Снип для снт 2019: Снип садоводство \ Акты, образцы, формы, договоры \ Консультант Плюс

Снип садоводство \ Акты, образцы, формы, договоры \ Консультант Плюс

]]>

Подборка наиболее важных документов по запросу Снип садоводство (нормативно–правовые акты, формы, статьи, консультации экспертов и многое другое).

Судебная практика: Снип садоводство Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Подборка судебных решений за 2019 год: Статья 40 «Права собственников земельных участков на использование земельных участков» ЗК РФ
(ООО юридическая фирма «ЮРИНФОРМ ВМ»)Руководствуясь статьей 40 ЗК РФ и установив, что согласно данным ЕГРН объект недвижимости, заявленный к проведению учетно-регистрационных действий расположен на земельном участке общей площадью 276 кв. м; земельный участок принадлежит на праве общей долевой собственности (доля в праве 1/2) истцам на основании договора купли-продажи земельного участка; согласно данным государственного кадастра недвижимости категория земель — «земли населенных пунктов»; вид разрешенного использования — «для садоводства», апелляционный суд отказал в признании незаконным решения об отказе в государственном кадастровом учете и государственной регистрации права собственности на объект недвижимого имущества — здание (жилое строение (садовый дом), поскольку созданный объект недвижимости не соответствует нормам по санитарно-бытовым условиям СНиП 30-02-97 «Планировка и застройка территорий садоводческих и (дачных) объединений граждан, здания, сооружения», согласно которым минимальные расстояния до границы соседнего участка должны быть: от жилого строения — 3 м, от постройки для содержания мелкого скота и птицы — 4 м, от других построек — 1 м.

Статьи, комментарии, ответы на вопросы: Снип садоводство Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Статья: Параметрирование строительства: модернизация регулирования и проблемы устранения избыточных ограничений
(Винницкий А.В., Харинов И.Н.)
(«Российский юридический журнал», 2020, N 6)В свою очередь, обязательные минимальные отступы от границ земельных участков предусмотрены на федеральном уровне лишь в отдельных случаях, к примеру в п. 6.6 Свода правил 53.13330.2019 «Планировка и застройка территории ведения гражданами садоводства. Здания и сооружения (СНиП 30-02-97* Планировка и застройка территорий садоводческих (дачных) объединений граждан, здания и сооружения)» (утв. Приказом Минстроя России от 14 октября 2019 г. N 618/пр и введен в действие с 15 апреля 2020 г.). Однако в силу п. 1 указанного Свода правил данный документ распространяется на проектирование планировки и застройки территории ведения гражданами садоводства, а также зданий и сооружений, находящихся на этой территории; этот Свод правил не распространяется на проектирование территории огородничества.
Тем самым установление такого параметра разрешенного строительства, как минимальные отступы от границ земельного участка, регламентируется ведомственными правовыми актами лишь в отдельных случаях, но не в качестве универсального инструмента.

Нормативные акты: Снип садоводство

Введены новые СНИПы для дачников: двигаем туалеты

+ A —

Владельцы участков теперь будут обустраивать их по-новому

Дачная жизнь — это не только труд на грядках до седьмого пота или чаепитие на зеленой лужайке в кругу семьи. Иногда случаются и конфликтные ситуации. Поводом может стать хотя бы то, что один сосед под носом у другого устраивает выгребную яму или туалет. До недавнего времени в правилах застройки и планировки дачного участка отсутствовали четкие указания, где должны находиться вонючие зоны.

Но недавно ситуация изменилась — 15 апреля вступил в силу новый Свод правил планировки и застройки территории СНТ. Так можно ли теперь заставить соседей убрать от своего забора вонючий сортир?

— Закон обратной силы не имеет, поэтому снести старую постройку нельзя, но при освоении новых дачных участков их владельцы должны учитывать, что расстояние от компостной ямы, септика или уборной до границы участка не должно быть менее 2 метров, — рассказывает первый заместитель председателя Мособлдумы, председатель Союза дачников Подмосковья Никита Чаплин. — Об этом сказано в пункте 6.3 нового Свода правил (СП 53.13330.2019) «Планировка и застройка территории ведения гражданами садоводства. Здания и сооружения».

— А как раньше регламентировалось размещение этих вонючих зон?

— По сути, они приравнивались к хозяйственным постройкам, то есть их можно было размещать на расстоянии одного метра от общего забора с соседями. И если у тех в этом месте была терраса или беседка, где они проводили много свободного времени, отмечали какие-то семейные торжества, то конфликты между соседями были неминуемы.

— Какие еще нормы застройки и проектирования СНТ изменились после вступления в силу нового СП?

— Очень важно, что на территории поселка должны быть созданы условия для передвижения инвалидов и других маломобильных групп населения. Еще параметры земельных участков общего пользования стали более гибкими: раньше зона общего пользования составляла 25% землеотвода СНТ, а сейчас можно варьировать от 20 до 25%.

Определили основной и дополнительный перечень инфраструктуры. К числу обязательных относятся сторожка с правлением, помещение, где хранятся средства пожаротушения, площадка для контейнеров твердых коммунальных отходов. А детские и спортивные площадки, стоянки для автомобилей, предприятия торговли, медпункт, объекты досугового назначения — это все дополнительная инфраструктура.

Также изменились параметры минимальной площади участка для ведения садоводства, сейчас это 4 сотки, а было 6 соток.

— Если все же вернуться к соседским спорам, что еще в этом плане изменилось в Своде правил?

— Законодатели рекомендуют дачникам ставить ограждение между соседними участками 1,2–1,8 метра, а было только 1,5 метра. Можно, конечно, отступать от этих параметров. Например, соседи по договоренности могут поставить любой забор, какой хотят, или вообще от него отказаться, но пусть обязательно согласуют это решение с правлением СНТ. И, наконец, сократилось на целый метр минимальное расстояние от стволов высокорослых деревьев до границы с соседями, теперь оно составляет 3 метра.

Справка «МК». Новый Свод правил вступил в силу с 15 апреля 2020 года, а до этого дачники руководствовались СНиП 30-02-97* «Планировка и застройка территорий садоводческих (дачных) объединений граждан, здания и сооружения», который действовал с 1998 года.

Опубликован в газете «Московский комсомолец» №28253 от 6 мая 2020

Заголовок в газете: Дачным сортирам указали на место

Какой по новым правилам может быть площадь личного садового участка? | Помощь юриста | Дача

15 апреля 2020 года вступил в силу новый свод правил СП 53. 13330.2019 «Планировка и застройка территории ведения гражданами садоводства. Здания и сооружения (планировка и застройка территорий, садоводческих (дачных) объединений граждан, здания и сооружения)». Этот свод правил касается исключительно садоводческих товариществ и не распространяется на огороднические товарищества. Ранее дачники руководствовались СП 53.13330.2011 «Планировка и застройка территорий садоводческих (дачных) объединений граждан, здания и сооружения. Актуализированная редакция СНиП 30-02-97*».

Как изменилась площадь личного садового участка в новом своде правил?

Одно из важных изменений нового свода правил СНТ — уменьшение минимальной площади участка для ведения садоводства до 0,04 га (4 сотки). Ранее этот параметр составлял 6 соток. 

По словам председателя Союза дачников Подмосковья, первого зампреда Московской областной Думы Никиты Чаплина, возможность уменьшить минимальную площадь личного участка с шести до четырех соток допускали правила землепользования и застройки территории многих муниципалитетов, а свод правил СНТ — нет. При этом есть дачники, которые готовы ограничиться четырьмя-пятью сотками, заявил он в интервью «Российской газете».

Что еще изменилось в новом своде правил СНТ?

Согласно новым правилам, площадь земель общего назначения может составлять от 20 до 25% территории всего товарищества. Раньше зона общего пользования строго составляла 25% от всего СНТ. 

Согласно документу, по границе территории СНТ должно быть установлено ограждение высотой 1,5-2 метра. Ширина проезжей части улиц должна составлять не менее 5,5 метра (две полосы по 2,75 м), а пешеходной части — 1 метр (должны быть хотя бы в одну сторону).

Новый свод разграничил объекты общего пользования на обязательные и дополнительные. К первым относятся сторожка с помещением правления, помещение для хранения средств пожаротушения и площадка для мусорных контейнеров. Дополнительной инфраструктурой признаются детские и спортивные площадки, стоянки для автомобилей, магазины, медпункт, объекты досуга.

Изменения были внесены и в части планировки и застройки личных садовых участков. Под строения теперь рекомендуется отводить не более 30% площади участка, а с учетом дорожек, площадок и других пространств с твердым покрытием — не более 50%.

Были уточнены рекомендованные параметры ограждений между участками, отступов от границ при возведении построек, посадке деревьев и проектировании септиков и компостов. В частности, дачникам советуют устанавливать ограждение по периметру участков высотой 1,2-1,8 метра. Однако в документе сказано, что по обоюдному письменному согласию с правлением товарищества владельцы соседних участков могут возвести ограждение другой высоты либо вовсе от него отказаться.

Как и прежде, минимальное расстояние до границы соседнего участка от дома должно составлять 3 метра, от построек, в которых содержится скот или птица, — 4 метра, от других хозпостроек — 1 метр. Однако в новом документе с 4 до 3 метров сократилось минимальное расстояние от стволов высокорослых деревьев до границы с соседями.  

Расстояние от компостной ямы, септика или уборной до границы участка не должно быть менее 2 метров. Ранее они приравнивались к хозяйственным постройкам и их можно было размещать на расстоянии одного метра от забора.

Что будет за нарушение правил?

Новый свод правил распространяется на вновь созданные объединения. Планировка и застройка существующих товариществ может не соответствовать документу.

По словам председателя Союза садоводов России, депутата Госдумы РФ Олега Валенчука, если площадь земельных участков не соответствует установленным предельным нормам, их не регистрируют в ЕГРН. В результате этого владельцам будет проблематично зарегистрировать строения на таких участках. Если же строения возведены в нарушение норм, то решение об их сносе может быть принято только через суд. Но для этого должны быть веские основания, которыми не являются формальные несоответствия своду правил, приводит его слова «Российская газета».

обновлений Snip & Sketch — программа предварительной оценки Windows

  • Статья
  • 5 минут на чтение
Полезна ли эта страница?

Пожалуйста, оцените свой опыт

да Нет

Любая дополнительная обратная связь?

Отзыв будет отправлен в Microsoft: при нажатии кнопки отправки ваш отзыв будет использован для улучшения продуктов и услуг Microsoft.Политика конфиденциальности.

Представлять на рассмотрение

В этой статье

Последние основные обновления и функции для Snip & Sketch. Над каким усовершенствованием ножниц вы бы хотели, чтобы мы поработали дальше? Дайте нам знать, выбрав меню в Snip & Sketch и выбрав Отправить отзыв .

19 сентября 2019 г.

Проведя некоторое время в кольцах Fast и Slow, мы начинаем развертывание Snip & Sketch версии 10. 1907 г. до 100 процентов инсайдеров Windows в кольце Release Preview. Мы также выпустим это обновление для небольшого процента тех, кто использует розничные сборки.

Напоминаем, что это обновление включает режим одного окна и поддержку масштабирования.

31 июля 2019 г.

Спасибо всем, кто поделился своими отзывами за наш обновленный опыт работы с ножницами! Мы очень ценим это и начинаем внедрять еще несколько улучшений на основе того, что вы нам сказали:

.

Режим одного окна

Вы склонны переделывать фрагменты несколько раз, чтобы получить идеальный снимок экрана? Мы обновляем кнопку New , чтобы теперь открывать новые фрагменты кода в текущем окне приложения, чтобы у вас не было тонны открытых фрагментов кода (которые затем нужно закрыть).) Если вы предпочитаете держать все фрагменты открытыми в отдельных окнах. эта опция теперь является переключателем в настройках, поэтому вы можете решить, какой режим вы предпочитаете.

Зум

Теперь вы можете увеличивать скриншоты, если они слишком малы для комментирования. И да, касание, CTRL + Плюс , CTRL + Минус и Ctrl + (Колесо мыши) поддерживаются!

Если вы предпочитаете иметь маленькое окно «Фрагмент и набросок», мы также уменьшим масштаб, чтобы весь фрагмент поместился в окне «Фрагмент и набросок».Если вы хотите увидеть фрагмент в исходном размере, нажмите кнопку масштабирования, а затем Просмотр фактического размера .

Улучшение возможности обнаружения WIN + Shift + S

Вы упомянули, что вам понравилось узнавать об использовании WIN + Shift + S , чтобы делать новые снимки в любое время, и мы думали, что другие тоже будут! Если вы еще не сделали фрагмент, теперь мы будем использовать пространство холста в Snip & Sketch, чтобы помочь вам узнать, как начать фрагмент без необходимости сначала открывать приложение.

В настоящее время эти изменения доступны для части инсайдеров в кольце Fast, поскольку мы оцениваем качество, прежде чем продолжить развертывание. Обратите внимание, что развертывание для каждого изменения, упомянутого выше, обрабатывается отдельно, с отдельными случайными группами в начальном развертывании, поэтому наблюдение одного из изменений с версией приложения 10.1907.2064.0 не обязательно означает, что вы увидите все три.

6 марта 2019 г.

Мы находимся в процессе развертывания нового обновления приложения для Snip & Sketch.Он включает в себя ряд исправлений, основанных на ваших отзывах, в том числе:

  • Исправлена ​​проблема, из-за которой фрагменты могли быть немного размытыми после сохранения или копирования в буфер обмена.
  • Исправлена ​​проблема, из-за которой копирование в буфер обмена завершалось сбоем, если вы отключались от приложения во время выполнения операции копирования.
  • Исправлена ​​проблема, из-за которой предлагаемое имя файла неожиданно оказывалось идентификатором GUID для фрагментов, открытых из всплывающего уведомления Win + Shift + S .
  • Добавлены подтверждения экранного диктора (экранного диктора) при копировании фрагмента в буфер обмена.
  • Формат сохранения по умолчанию изменен на png. Вы по-прежнему можете использовать раскрывающийся список при сохранении, чтобы выбрать нужный формат, если это не png.
  • Исправлена ​​проблема, из-за которой автоматическое копирование изменений в буфер обмена не работало при возврате из настроек Snip & Sketch.
  • Исправлена ​​проблема, из-за которой приложение могло аварийно завершить работу, если вы закрыли два окна приложения одно за другим.
  • Мы исправили проблему, из-за которой местом сохранения файлов по умолчанию были документы, а не изображения.При исправлении этого мы также исправили проблему, из-за которой при сохранении диалоговое окно сохранения не помнило, где вы в последний раз сохранили фрагмент.

10 декабря 2018 г.

В настоящее время мы выпускаем Snip & Sketch версии 10.1811.3371.0 для инсайдеров в кольце Fast. Это обновление приложения содержит ряд исправлений ошибок и улучшений надежности, в том числе:

  • Исправлена ​​проблема, из-за которой нижняя часть фрагмента могла обрезаться.
  • При сохранении в формате jpg мы теперь будем использовать белый фон в качестве фона для полей и фрагментов произвольной формы.
  • Исправлена ​​проблема, из-за которой, если вы вводили собственное имя файла при сохранении фрагмента, а затем снова переходили к сохранению, для предлагаемого имени файла отображалось автоматически сгенерированное имя вместо того, которое вы написали ранее.
  • Мы исправили проблему, из-за которой временные файлы изображений в хранилище приложений никогда не очищались, что потенциально приводило к использованию большого объема пространства, если вы делали много фрагментов.
  • Мы внесли некоторые улучшения для решения проблемы, из-за которой приложение могло зависнуть при открытии или комментировании изображения с высоким разрешением, когда было включено автоматическое копирование.

Кроме того, фрагменты окна и рамки теперь доступны для 100% инсайдеров в кольце Fast! Спасибо всем, кто поделился отзывами об опыте!

Привнесите обрезку окон в свой современный опыт

Запустите фрагмент с помощью предпочитаемой точки входа — WIN + Shift + S , Print Screen (если вы включили его), непосредственно из Snip & Sketch — и выберите параметр фрагмента окна в сверху и отрезать! Этот выбор будет запомнен при следующем запуске фрагмента.

31 октября 2018 г.

Это обновление содержит несколько улучшений, в том числе:

Добавление акцента

Планируете куда-нибудь вставить свой снимок экрана? Имеет ли это место тот же цвет фона, что и фон вашего снимка экрана? Когда вы обновитесь до последней версии приложения, вы обнаружите новую возможность добавлять рамку к своим снимкам экрана, придавая им немного больше, чем нужно, чтобы выделиться.

Печать

Иногда вам нужно сохранить физическую копию ваших снимков экрана — мы слышали, что раньше для этого требовалось слишком много шагов, и мы добавили кнопку на панель инструментов, чтобы вы могли печатать прямо из приложения.(Вы также можете распечатать в PDF.)

Уточнение параметров сохранения

  • Если у вас есть несохраненные изменения и вы идете, чтобы закрыть окно или открыть файл, теперь появится подтверждение.
  • Предлагаемое по умолчанию имя файла теперь будет включать отметку времени.
  • Сохранение теперь также поддерживает типы файлов jpg и gif.
  • Появилась новая страница настроек! Мы заменяем старое всплывающее окно About полной страницей настроек, где вы найдете возможность добавить рамку, возможность автоматического копирования в буфер обмена обновлений, внесенных в ваш фрагмент, и многое другое.

6 сентября 2018 г.

Отрезок задержки

Мы выпустили версию 10.1807.2286.0 Snip & Sketch, которая включала столь востребованную функцию отложенной обрезки. В сборке 18219 была ошибка, блокирующая работу кнопки New , поэтому попробуйте ее после обновления!

Просто выберите стрелку рядом с кнопкой «Создать» в приложении, и теперь вы найдете варианты Отрезать сейчас , Отрезать через 3 секунды и Отрезать через 10 секунд .Если у вас открыто приложение или оно закреплено на панели задач, вы также можете просто щелкнуть правой кнопкой мыши значок на панели задач, чтобы получить эти параметры, поскольку мы добавили их в список переходов.

сокращений CRISPR превращают гели в биологических сторожевых псов

Материалы, называемые гидрогелями, состоят из полимеров, наполненных водой. Фото: arkady/Getty

Есть ли что-то, что CRISPR не может сделать? Ученые использовали инструмент редактирования генов для создания множества генетически модифицированных организмов, а также для отслеживания развития животных, выявления болезней и борьбы с вредителями. Теперь они нашли для него еще одно применение: использование CRISPR для создания умных материалов, которые меняют свою форму по команде.

Материалы, изменяющие форму, могут быть использованы для доставки лекарств и создания часовых практически для любого биологического сигнала, сообщают исследователи в Science от 22 августа 1 . Исследование возглавил Джеймс Коллинз, биоинженер из Массачусетского технологического института в Кембридже.

Команда Коллинза работала с наполненными водой полимерами, которые удерживаются вместе нитями ДНК, известными как ДНК-гидрогели.Чтобы изменить свойства этих материалов, Коллинз и его команда обратились к форме CRISPR, в которой используется фермент, вырезающий ДНК, под названием Cas12a. (Редактор генов CRISPR-Cas9 использует фермент Cas9, чтобы отрезать последовательность ДНК в нужной точке.) Фермент Cas12a можно запрограммировать на распознавание определенной последовательности ДНК. Фермент разрезает свою цепочку ДНК-мишени, а затем разрезает отдельные нити ДНК поблизости.

Это свойство позволило исследователям создать серию гидрогелей, контролируемых CRISPR, содержащих целевую последовательность ДНК и отдельные нити ДНК, которые распадаются после того, как Cas12a распознает целевую последовательность в стимуле.Разрыв отдельных цепей ДНК приводит к тому, что гидрогели меняют форму или, в некоторых случаях, полностью растворяются, высвобождая полезную нагрузку (см. «Гели, контролируемые CRISPR»).

Команда создала гидрогели, запрограммированные на высвобождение ферментов, малых молекул и даже клеток человека — что может быть частью терапии — в ответ на раздражители. Коллинз надеется, что гели можно будет использовать для создания умных терапевтических средств, которые высвобождают, например, лекарства от рака при наличии опухоли или антибиотики при инфекции.

Адаптировано из D. Han et al. Наука https://doi.org/10.1126/science.aay4198 (2019).

Интеллектуальные объективы

Исследователи также интегрировали гидрогели, управляемые CRISPR, в электронные схемы. В одном подходе они поместили гидрогели внутрь небольшого чипообразного устройства, называемого микрожидкостной камерой, которое было связано с электронной схемой. Цепь отключилась в ответ на обнаружение генетического материала патогенов, включая вирус Эбола и устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA).Команда даже использовала гидрогели для разработки прототипа диагностического инструмента, который посылает беспроводной сигнал, когда распознает генетический материал лихорадки Эбола в лабораторных образцах. Когда член команды нес беспроводной детектор, они смогли идентифицировать поблизости положительные образцы.

Дэн Луо, биоинженер из Корнельского университета в Итаке, штат Нью-Йорк, говорит, что гидрогели CRISPR лучше других чувствительных гидрогелей, потому что ученые могут легко определить, что вызывает изменение материала.В прошлых усилиях по созданию умных гидрогелей использовались ферменты, которые либо не разрезали определенные последовательности ДНК, либо разрезали только небольшое количество определенных последовательностей, что ограничивало их адаптируемость.

«Сейчас мы живем в эпоху CRISPR, — говорит Коллинз. «Он захватил биологию и биотехнологию. Мы показали, что он может внедряться в материалы и биоматериалы».

Общественная группа Alcester News | Facebook

Последний еженедельный отчет полиции Алчестера South SNT.
События прошлой недели, представляющие общественный интерес:-
АЛЬСЕСТЕР

· *Подозрительные обстоятельства.Десять акров, Альстер. На частной территории замечены двое мужчин, собирающихся покататься на велосипеде. Им бросил вызов представитель общественности, и они сказали, что думали, что это лом. (новый велосипед). Мужчины уехали на белом транзитном фургоне. Оба описываются как восточноевропейские. 8:00 суббота, 23 ноября. 0100 23.11.2019

· *Подозрительные обстоятельства. Сеймур-роуд, Алстер. Мужчина с сумкой прогуливался по окрестностям, подъездам и садам, возможно, заглядывая в дома. Описан как белый мужчина высокого роста в темной одежде.На данный момент правонарушений не выявлено. 19:45, пятница, 22 ноября. 0442 22.11.2019

· *Подозрительные обстоятельства. Юбилейный двор, Альстер. Мужчина ходит от двери к двери, продавая вещи из сумки (включая календари). Он говорил жителям, что у него больной сын и ему нужны деньги. Описан как белый мужчина, около 40 лет, рост 5 футов 8 дюймов, короткие темные волосы, борода, в темной куртке и брюках. 16:00 четверг, 21 ноября. 0283 21.11.2019

· *Транспортные преступления. Винчкомб-роуд, Алстер.Преступники перерезали тормозной трос на рабочем фургоне, чтобы они могли сдвинуть его достаточно, чтобы прорезать дыру в двери, чтобы попасть внутрь. Затем изнутри были украдены различные инструменты. Информация из этого района предполагает, что это произошло в 00:10 четырьмя мужчинами в темной одежде, балаклавах и перчатках. Они использовали автомобиль черного / темного цвета. Среда 20 ноября. 0070 20.11.2019

· *Кража. Магазин, Хай-стрит, Алстер. Женщина украла семь вещей из магазина путем кражи.Персонал бросил ей вызов, но она оскорбила ее и убежала в сторону The Oak Tuery. Белая женщина, 35 лет, рост 5 футов 5 дюймов, черные волосы взлохмачены, одета в большое серое пальто с капюшоном, черные брюки от спортивного костюма, черно-белые кроссовки, кремовый шарф и черный рюкзак. 11:20 вторник, 19 ноября. 0132 19.11.2019

GREAT ALNE

· *Попытка ограбления. Спернал-лейн, Грейт-Алн. Прохожие проснулись от звука разбитого стекла. При проверке они увидели мужчину с фонариком, пытающегося проникнуть в мастерскую на территории.Затем этот человек сбежал. Неизвестно, был ли у них автомобиль. 1:30 утра, среда, 20 ноября. 0018 20.11.2019

БИДФОРД

· *Подозрительные обстоятельства/браконьерство. Жорж Элм Лейн — Графтон Лейн. Две машины и человек, замеченные в поле, возможно, гоняют зайцев. На месте происшествия был замечен синий фургон Transit с регистрационным номером, оканчивающимся на «JYG», а также автомобиль Skoda с регистрационным номером, оканчивающимся на «NBF». с 7:30 до 10:30 в воскресенье, 24 ноября. 0154 24.11.2019. Инцидент продолжается на момент составления настоящего отчета.

· *Ущерб. Копенгагенский путь, Бидфорд. Окно наверху с двойным остеклением разбито камнем. Было замечено, как два человека убегали с места происшествия. 18:25, среда, 20 ноября. 0317 11.02.2019

SALFORD PRIORS

· *Антисоциальное поведение. Автостоянка рядом с парком Salford Priors. Небольшой баллончик с «веселящим газом», найденный на автостоянке. Утро четверга 21 ноября. 0108 21.11.2019. Закись азота вдыхают для быстрого кайфа, хотя это может быть опасно.

TEMPLE GRAFTON

· *Вмешательство транспортных средств.Темпл Графтон. Дверь автомобиля обнаружена открытой. Ворота в помещение также взломаны. Из машины ничего не украдено. С 23:00 19 ноября до 19:15 20 ноября. 0129 20.11.2019

DORSINGTON

· Транспортные преступления. Автостоянка на пути к сердцу Англии. В машине разбито окно, из салона изъяты предметы, в том числе перчатки и сумочка с ее содержимым. Днем понедельник 18 ноября. 0362 18/11/2019

Кражи из рабочих фургонов. Кражи из фургонов по-прежнему являются актуальной проблемой в этом районе. Ниже мы предлагаем несколько простых советов по предотвращению преступлений о том, что делать, если автомобиль оставлен без присмотра.Текущие тенденции показывают, что правонарушители используют приемы «звони и кради» или «отрежь и надрежь». В этом случае боковые двери отодвигаются, чтобы попасть внутрь, или ножницами по металлу вырезаются отверстия в обшивке фургона, чтобы получить доступ к механизмам открывания, или фактически создается отверстие, достаточно большое, чтобы в него можно было залезть. бронированный, то удаление наиболее ценных предметов и использование дополнительных методов предотвращения преступлений будет лучшим сдерживающим фактором.

· Припаркуйте автомобиль в безопасном месте (по возможности, в гараже или за запертыми воротами).

· Используйте дополнительные устройства безопасности, чтобы фургон нельзя было сдвинуть с места. Припаркуйтесь рядом со стенами или припаркуйте другой автомобиль перед фургоном, если вы едете.

· Используйте датчики движения внутри и снаружи фургона, чтобы предупредить вас, что кто-то находится поблизости. (Мы знаем одного местного торговца, у которого в фургоне есть простая радионяня для отслеживания шума и движения в режиме реального времени)

· Припаркуйтесь на хорошо освещенной улице так, чтобы ваш дом или дом соседей были хорошо видны.

· По возможности убирайте ценные вещи из автомобиля на ночь и храните их в надежном месте.

· Не оставляйте инструменты или оборудование на виду внутри автомобиля.

· Рассмотрите возможность установки соответствующей системы сигнализации, защищающей кабину и грузовые отсеки.

· Нанесите защитную маркировку на электроинструменты и оборудование. В качестве альтернативы, выгравируйте или нанесите на эти предметы идентифицируемые метки. Сфотографируйте ценные предметы

· Рассмотрите возможность установки в фургоне безопасных контейнеров или запирающихся шкафчиков для хранения инструментов.

· Убедитесь, что двери фургона надежно запираются, и рассмотрите возможность установки подходящих замков.

· Обязательно физически проверьте, что двери и окна фургона заперты, если вы использовали пульт дистанционного управления для запирания автомобиля, даже если обратная связь показывает, что фургон заперт.

· При посещении предприятий старайтесь парковаться рядом со входом и желательно в поле зрения видеонаблюдения

· Зарегистрируйте бесплатно серийные номера вашего имущества на www.immobilise.com . Пожалуйста, посетите веб-сайт для получения дополнительной информации.

· Рассмотрим ИК-сигнализацию с питанием от батареи, которая при активации звонит вам на мобильный телефон.

· Будьте бдительны при разгрузке. Следите за людьми, которые проявляют интерес.

· Позвоните в полицию по номеру 101 или 999, если вы заметили кого-то подозрительного.

Соседский дозор. У нас есть несколько планов NHW в этом районе. Чтобы узнать больше о Neighborhood Watch и о том, как вы можете создать местную программу или присоединиться к ней, посетите веб-сайт: https://www. ourwatch.org.uk/

Дифференциальная способность клеток CD90+ при активации аутофагии после химиотерапии при гепатоцеллюлярной карциноме

1Introduction

Последние эпидемиологические данные Globocan 2018 предсказал, что рак печени, в котором преобладает гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК), будет шестым наиболее часто диагностируемым раком и четвертой ведущей причиной смертности от рака во всем мире.У мужского населения его заболеваемость и смертность в 2–3 раза выше, чем у женского, поэтому он занимает пятое место по общемировой заболеваемости и второе место по смертности [1]. Плохой клинический исход у пациентов с ГЦК объясняется поздней диагностикой, резистентностью клеток ГЦК к доступным в настоящее время методам лечения и рецидивом опухоли после радикального лечения [2].

Стволовые клетки рака печени (CSC) широко признаны в качестве основного источника HCC [3,4]. Эти клеточные популяции известны своей устойчивостью к радио- и химиотерапии, что приводит к неэффективности терапии и метастазированию [5,6]. Для выявления и классификации РСК печени были предложены различные белковые маркеры [7]. CD90 (Thy-1) является одним из наиболее распространенных печеночных CSC, используемых в многочисленных исследованиях in vitro и in vivo [8–10]. Это гликофосфатидилинозитол (GPI) с молекулярной массой 25-37 кДа, экспрессируемый в различных клетках. Помимо активации Т-клеток, CD90 участвует в многочисленных неиммунологических биологических процессах, являясь важным регулятором межклеточного и межклеточного взаимодействия, апоптоза, адгезии, миграции, рака и фиброза [11,12].Основываясь на анализе генной онтологии, сверхэкспрессированные гены в клетках CD90+ из HCC были связаны с воспалением, лекарственной устойчивостью и метаболизмом липидов по сравнению с CD90+ из неопухолевой печени [13].

Аутофагия, механизм самопереваривания для элиминации цитоплазматических материалов, клеточных компонентов (липидов, белков) и органелл, является одним из ключевых факторов клеточного гомеостаза в нормальной физиологии. Он включает образование двухмембранных везикул (аутофагосом), поглощающих грузы лизосом.Затем внешняя мембрана аутофагосомы сливается с лизосомальной мембраной, а внутренний пузырь вместе с его грузом деградирует [14].

При раке аутофагия признана обоюдоострым мечом, поскольку она действует и как супрессор рака, и как промоутер рака [15]. Раксупрессивная функция аутофагии широко характеризуется участием в предотвращении воспаления клеток [16], в то время как факторы, способствующие развитию рака, связаны с гипоксией [17–20] и экстенсивными активными формами кислорода [21–25].Однако при ГЦК эта двойная роль аутофагии еще более сложна, поскольку объясняется сложностью клеточной гетерогенности, различной этиологией и множеством факторов (образ жизни, выбор лечения, пол и т. д.) во время длительного развития заболевания.

Как недавно было рассмотрено, нарушение регуляции аутофагии известно в популяциях CSC при нескольких видах рака [15]. Однако, что касается ГЦК, информация о предпочтении аутофагии печеночному РСК все еще неясна и в основном ограничивается фенотипом CD133+. Аутофагия участвовала в поддержании CD133+CSC в условиях дефицита кислорода и питательных веществ, которые типичны для микроокружения HCC [26,27]. Аутофагия также активировалась в клетках CD133+ при недостаточной радиочастотной абляции [28] и иммунотерапии интерфероном-гамма [29]. Недавно интересное исследование по отслеживанию клонов при циррозе печени трансгенных крыс показало, что печеночные клетки CSC Axin2/EGFP+CD90+ генерируются исключительно в цирротической печени с аберрантной аутофагией и способствуют гепатокарциногенезу [30].

Однако до сих пор имеется ограниченная информация об актуальности аутофагии в клеточных субпопуляциях CD90 HCC. Здесь мы приводим новые доказательства предпочтения аутофагии в клетках CD90+, как в пробирке, так и в клинических тканях ГЦР, включая ее активацию после химиотерапии. Это открытие открывает новые перспективы для разработки будущих стратегий лечения ГЦК.

2Материалы и методы2.1Образцы2.1.1Образцы тканей человека

Восемьдесят шесть образцов были взяты у 43 отобранных пациентов с ГЦК, перенесших резекцию печени в Университетском медицинском центре Хошимина, Вьетнам, в период с 2014 по 2017 год. У каждого пациента собирали узелки ГЦР (ГЦК) и наиболее отдаленные ткани резецированной ГЦК (окружающие неопухолевые; СНТ). Свежие ткани хранили в стабилизирующем растворе RNAlater (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и хранили при температуре -80°C перед дальнейшей обработкой. Диагноз пациентов был установлен на основе международных критериев вместе с его градацией Эдмондсона Штайнера (ES) HCC, параметрами опухоли, результатами лабораторных исследований и другими клиническими данными. Информированное согласие на участие в исследовании было получено от каждого пациента или законного представителя, а протокол был одобрен этическим комитетом UMP Ho Chi Minh City No.240/DHYD-Жесткий диск.

2.1.2 Клеточная линия

Клеточная линия HCC человека JHH6 использовалась в качестве модели in vitro. Субпопуляции JHH6, экспрессирующие маркер CSC CD90+ и его отрицательный аналог CD90-, выделяли с помощью сортировки магнитных клеток MACS (Miltenyi Biotec GmbH, Бергиш-Гладбах, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Чистоту и процент клеток CD90+ проверяли с помощью проточной цитометрии (FACSCalibur, BD Biosciences, Нью-Джерси, США). Подробности о разделении клеток и характеристиках субпопуляций сообщались ранее [31].Клетки выращивали в среде Вильямса E с добавлением 10% (об./об.) FBS, 1% L-глутамина и 1% антибиотиков. Их поддерживали при 37°C во влажном инкубаторе с 5% CO2 и обычно расширяли с помощью отщепления 0,05% трипсина.

2.2Гистологический анализ

Сразу после операции ткани печени фиксировали в формалине и заключали в парафиновый блок. Фиксированные срезы подвергали окрашиванию гематоксилином и эозином и иммуноокрашиванию. Два независимых патологоанатома (UMC HCM City и ASUGI) провели гистологический анализ и поставили окончательный диагноз.

2.3 Иммуноокрашивание

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ проводили на срезах парафинированных тканей, используемых для гистологического анализа. Парные ткани HCC и SNT подвергали иммуноокрашиванию на белок LC3. Вкратце, срезы печени депарафинизировали ксилолом и регидратировали постепенной концентрацией этанола. Ткани инкубировали с антителом против LC3 (PA1-16930, Thermo Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США) с последующей инкубацией с первичным универсальным усилителем антител и полимером HRP (Thermo Fisher Scientific, Чешир, Великобритания).Комплекс визуализировали с помощью набора субстратов пероксидазы DBA (Vector Laboratories, Великобритания) и окрашивали ядро ​​гематоксилином. Изображения ИГХ генерировали с помощью микроскопических систем Leica DM2000 (Leica, Wetzlar, Germany).

2.4 Обработка in vitro

E64D (SC 201280, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, США), ингибитор лизосомальных протеаз, растворяли в ДМСО. Клетки JHH6 CD90+ и CD90- высевали с концентрацией 30000 клеток/см2 на 24 часа. Затем клетки подвергали воздействию 5 мкМ доксорубицина (Pfizer) в течение 24 часов в присутствии 50 мкМ E64D и без него.Рассчитанная концентрация ДМСО составляла 0,3% при каждой обработке. Жизнеспособность клеток определяли с помощью анализа 3(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ, Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Экстракты общего белка и РНК собирали для анализа белка и гена соответственно. Параллельно с этим был проведен анализ МТТ для индуктора аутофагии рапамицина и ингибитора аутофагии хлорохина (Enzo Life Sciences, Фармингдейл, штат Нью-Йорк, США)

2.5Оценка потока аутофагии

флуоресцентное чтение накопленных аутофагических вакуолей в живых клетках, ингибированных лизосомами, с помощью анализа флуоресцентного микропланшета.Набор для обнаружения аутофагии Cyto-ID Green (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, USA) использовали для обнаружения кислых аутофагических вакуолей. Вкратце, клетки JHH6 CD90+ и CD90- высевали в 96-луночный темный флуоресцентный планшет на 24 часа. Затем клетки подвергали воздействию 5 мкМ доксорубицина в течение 24 часов в присутствии 50 мкМ E64D и без него. 100 мкМ хлорохина, ингибитора потока аутофагии, использовали в качестве положительного контроля для обнаружения аутофагических вакуолей, основываясь на предложении производителя. Концентрация ДМСО была рассчитана равной 0. 3% в каждой процедуре. После обработки клетки окрашивали красителями Cyto-ID Green и Hoechst 33342 для окрашивания ядер в течение 30 минут при 37°С с последующей промывкой. Флуоресцентный сигнал измеряли с помощью флуоресцентного считывателя микропланшетов (Perkin Elmer, EnSpire Multimode Plate Reader, Гамбург, Германия). Одновременное определение проводили для Cyto-ID Green и Hoechst 33342 на фильтре FITC (возбуждение ~480 нм, эмиссия ~530 нм) и синем фильтре DAPI (возбуждение ~340 нм, эмиссия ~480 нм). Затем зеленый сигнал аутофагии нормализовали с синим сигналом, и результаты выражали относительно контрольных клеток.

2.6 Выделение и количественная оценка белка

Через 24 часа после обработки из клеток собирали общие белки с использованием буфера для лизиса клеток (Cell Signaling Technology, Дэнверс, Массачусетс, США) и гомогенизировали путем удаления и встряхивания. Экстракт центрифугировали в течение 10 минут при 14000 g в охлаждаемой микроцентрифуге. В конце извлекали супернатанты и определяли концентрацию белка с помощью анализа белка с бицинхоновой кислотой.

2.7 Вестерн-блот-анализ

Анализ белка LC3 проводили с использованием вестерн-блоттинга (WB) экстракта общего белка, полученного из тканей печени человека, и фракций JHH6 CD90+ и CD90-.Белки (20 мкг) разделяли по размеру с помощью SDS-PAGE на 12% полиакриламидном геле. Гель с электропереносом на мембране PVDF подвергали иммуноблотингу с антителом LC3, в то время как актин (A2066, Sigma) использовали в качестве хозяйственного белка. Пероксидазную реакцию получали экспонированием мембраны в растворах системы детекции ECL-Plus WB (Реагенты для детекции ECL Plus Western Blotting, GE Healthcare, Италия). Количественное определение белка проводили после денситометрического анализа полос по сравнению с актином в каждом образце (Image Studio™, LI-COR, Линкольн, Небраска, США).

2.8 Обратная транскрипция – количественная ПЦР в реальном времени (ОТ – кПЦР) протокол. ПЦР в реальном времени проводили в соответствии с протоколом SYBR Green Supermix (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США). ПЦР-амплификацию проводили в реакционном объеме 15 мкл, содержащем 25 нг кДНК, 1x SYBR Green Supermix, состоящий из 100 нМ KCl, 40 нМ Трис-HCl, pH 8.4, 0,4 мМ каждого dNTP, 40 ед/мл ДНК-полимеразы iTaq, 6 мМ MgCl2, SYBR Green I, 20 мМ флуоресцеина и стабилизаторы (Bio-Rad), а также 250 нМ геноспецифических прямых и обратных праймеров. Реакцию проводили в системе ПЦР в реальном времени CFX 9600 (Bio-Rad). Последовательности праймеров перечислены в таблице дополнительных данных S1.

2.9Статистический анализ

Критерий Стьюдента был выполнен для статистического сравнения между группами с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 8.0 (GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния, США).Для образцов тканей человека непрерывные переменные распределения мРНК с помощью RT-qPCR рассчитывали с использованием t-критерия после теста на нормальность, и значения представляли как средние значения (95% ДИ). Данные in vitro были получены по меньшей мере из трех независимых экспериментов и выражены как среднее ± стандартное отклонение. Статистическая значимость была установлена ​​на p-значение

3Результаты3.1 Исходные характеристики клинических образцов ГЦК

Демографические особенности пациентов с ГЦК показаны в таблице 1. Участники были преимущественно мужчинами (35 мужчин против 8 женщин) со средним возрастом 58± 10 лет.Этиологией хронического заболевания печени в 63% случаев был вирус гепатита В (ВГВ), в 14% — вирус гепатита С (ВГС) и в 21% — другие причины (метаболические/алкогольные).

По шкале HCC 36 (83%) были отнесены к категории Child-Turcotte-Pugh (CTP) A, в то время как только 5 (6%) пациентов относились к CTP B, ни одному из пациентов ранее не выполнялась гепатэктомия. Что касается массы опухоли и количества поражений, у 63% пациентов была обнаружена опухоль с одним узлом. Гистологический анализ показал, что 40% были хорошо дифференцированными ГЦК ЭС 1 степени, 29% были умеренно дифференцированными ГЦК ЭС 2 степени, а остальные 29% были низкодифференцированными ГЦК ЭС 3-4 степени.Для биохимического анализа сыворотки медиана (95% ДИ) уровней аланинтрансаминазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) составила 59 (32–84) и 74 (46–102) МЕ/мл соответственно. Что касается уровня альфа-фетопротеина (АФП), у 39% пациентов уровень АФП был ниже 20 нг/мл, у 39% — от 20 нг/мл до 400 нг/мл и у 24% — уровень АФП выше 400 нг/мл.

3.2 Высокая экспрессия белка LC3 в тканях ГЦР

Наше предыдущее исследование показало высокую активацию маркера РСК CD90/THY-1 в тканях ГЦК в европейской когорте [31].Здесь мы проверили его экспрессию в этой вьетнамской когорте с помощью количественной ОТ-ПЦР. Мы проанализировали экспрессию мРНК из 86 образцов тканей с помощью RT-qPCR и выразили в произвольных единицах (а.е.) с образцом, рассматриваемым как 1,0 а.е. Значительное увеличение CD90 наблюдалось в ГЦР по сравнению с парной окружающей неопухолевой тканью (СНТ), при этом среднее выраженное значение (95% ДИ) составляло 23,2 (14,2-32,4) и 2,7 (1,0-4,5) для ГЦК и СНТ. , соответственно (p(

Рис. 1A).

Используя тот же набор образцов, что и для CD90, были определены маркеры аутофагии семейства ATG, белок, ассоциированный с рецептором ГАМК типа А, подобный 1 (ATG8/GABARAPL1) и ATG6/Beclin-1. количественно.Экспрессия мРНК ATG8 была немного выше в тканях HCC по сравнению с тканями SNT со средним выраженным значением (95% CI) 0,8 (0,5-1,1) и 0,6 (0,4-0,8) для HCC и SNT соответственно (рис. 1B). С другой стороны, экспрессия мРНК беклина-1 была обнаружена рассредоточенной как в тканях HCC, так и в SNT (дополнительные данные, рисунок S1). Был определен дальнейший анализ корреляции, существующей между мРНК ATG8 и клиническими параметрами. Как в тканях ГЦР, так и в тканях СНТ экспрессия ATG8 была связана с ГЦК, связанной с HBV (p(

, таблица 2).

Затем с помощью вестерн-блоттинга определяли относительную экспрессию белка LC3 в парных тканях HCC и SNT (рис. 1C). Как показано на рис. 1E, обе полосы LC3, LC3-I (21 кДа) и LC3-II (17 кДа) были высоко экспрессированы в тканях ГЦР (p(

, рис. 1D).3.3 Дифференциальная экспрессия маркеров аутофагии в выделенных клетках CD90+

Поскольку CD90 является маркером для различных типов клеток, мы исследовали функцию клеток CD90+ в HCC, используя модель in vitro с использованием линии клеток HCC. проточная цитометрия, как описано ранее [31].Чистоту субпопуляций CD90+, использованных в анализе, выбирали выше 70% позитивности (до 5-го пассажа после сортировки) (рис. 2А). Как и ожидалось, на базальном уровне мРНК CD90 была примерно в 60 раз выше в изолированных субпопуляциях CD90+, чем ее аналог CD90- (p(

, рис. 2A-B). Мы также проверили несколько маркеров, таких как фактор роста гепатоцитов (HGF) и AXIN2, о котором ранее сообщалось, что он связан с аутофагией в CD90, проявляя повышающую регуляцию в этой клеточной субпопуляции (рис. 2B).

Экспрессию генов аутофагии и базального белка LC3 в клетках JHH6 CD90+ и CD90- затем определяли с помощью экспрессии мРНК (RTq-PCR) и вестерн-блоттинга соответственно. Связанные с аутофагией гены ATG8 (p (рис. 2C-D).

Для проверки оборота LC3-II при стимуляции аутофагии обе клетки обрабатывали E64D, ингибитором лизосомальных протеаз, в концентрациях от 5 до 200 мкМ. в течение 24 ч. Расчетная концентрация ДМСО составляла 0,3% при каждой обработке. Тест МТТ, проведенный для проверки жизнеспособности клеток после обработки, не показал какой-либо токсичности для выбранной концентрации 50 мкМ (рис.2Е). При обработке E64D и носителем ДМСО степень накопления LC3-II была более заметной в клетках CD90+ (примерно в 6 раз и в 2 раза для E64D и ДМСО соответственно) по сравнению с клетками CD90- (примерно в 3 раза для E64D). ) (рис. 2D-E). Эти данные могут свидетельствовать о том, что клетки CD90 становятся более чувствительными к стимуляции аутофагии, хотя эта чувствительность не отражалась на жизнеспособности клеток. Также были проведены тесты на жизнеспособность клеток для рапамицина, ингибитора m-TOR, и хлорохина, лизосомного протеасомного ингибитора, оба из которых участвуют в пути аутофагии, показывая более высокую жизнеспособность клеток CD90+ (рис.2Е).

3.4 Влияние доксорубицина на аутофагию в клетках CD90+

Аутофагия связана с механизмом защиты клеток от химиотерапии. Здесь мы обрабатывали клетки CD90+ и CD90- доксорубицином, противоопухолевым препаратом, обычно используемым для лечения ГЦК на ранней и промежуточной стадиях. Концентрация 5 мкМ была выбрана на основании наших предыдущих данных о LC50 доксорубицина в нескольких клеточных линиях ГЦР, в том числе в JHH6 [32].

После лечения доксорубицином в течение 24 часов обе полосы LC3 увеличивались в субпопуляциях CD90+ и CD90-.Повышение уровня LC3-I также было очевидным, также по сравнению с E64D, что указывало на активацию аутофагически транслируемых генов после воздействия доксорубицина. После лечения степень активации LC3-II была выше в клетках CD90+ по сравнению с клетками CD90- (p(

, рис. 3A). Характер модуляции генов между двумя клеточными популяциями также был разным. Увеличение ATG8 было отмечены только в клетках CD90+ (рис. 3Б).

Присутствие аутофагических вакуолей было обнаружено с помощью считывания флуоресценции.Затем зеленый сигнал аутофагии нормализовали с сигналом синего ядра, и данные представляли относительно контроля каждой субпопуляции. Наличие аутофагических вакуолей после E64D было слегка заметно для клеток CD90+ по сравнению с клетками CD90- (рис. 3C). Чтобы сравнить данные лечения доксорубицином in vitro в клиническом образце, мы также проверили два образца ГЦК, пациенты которых ранее получали локорегионарную терапию доксорубицином, показывая положительный результат LC3 на тканях (рис. 3D).

4Обсуждение

Аутофагия — это самопереваривание и один из нормальных клеточных механизмов поддержания внутриклеточного гомеостаза путем транспортировки цитоплазматического материала в лизосомы через аутофагосомы.При воздействии внешних агентов, включая химиотерапевтические препараты, может активироваться аутофагия, что устраняет потенциально поврежденные материалы и органеллы.

В настоящее время химиотерапия путем трансартериальной химиоэмболизации является одобренным на международном уровне вариантом лечения пациентов с ГЦК [33]. Доксорубицин является одним из наиболее распространенных химиотерапевтических агентов, используемых для лечения ГЦК; однако резистентность ГЦК к доксорубицину является общей чертой терапевтических режимов, что снижает эффективность лечения. Кроме того, ответ на доксорубицин может различаться не только среди пациентов, но и в отдельных случаях ГЦР. Различная чувствительность может быть связана с гетерогенностью ГЦР, в том числе в присутствии различных клеточных популяций.

CD90 является одним из маркеров, обычно используемых для распознавания популяции РСК. В этом исследовании мы показали, что мРНК CD90 значительно активируется при ГЦК по сравнению с его парными неопухолевыми тканями. Эти данные, полученные по азиатским случаям ГЦК, соответствовали нашим предыдущим данным по европейским случаям [31], предполагая, что CD90 является общим маркером гепатоканцерогенеза, а также для различных этиологий ГЦК.Несколько исследований показали, что отдельные клетки CD90+ обладают другими свойствами по сравнению с «массой» опухоли (CD90-). Клетки CD90+ были связаны с плохой дифференцировкой, воспалением, транспортерами ABC, лекарственной устойчивостью и метаболизмом липидов по сравнению с клетками CD90- или CD90+ из неопухолевой печени [9,10,34].

Исследования in vitro показали, что доксорубицин индуцирует цитотоксичность и изменение клеточных органелл вместе с активацией белка LC3-II и вовлечением аутофагии [35].В этом исследовании мы показали, что в JHH6, низкодифференцированной клеточной линии HCC, степень активации аутофагии доксорубицином различалась между субпопуляциями CD90+ и CD90-, при этом более высокая способность наблюдалась в положительной субпопуляции. Из данных иммуноблоттинга мРНК (ATG8/LC3/GABARAPL1) и LC3 было замечено, что, хотя субпопуляции CD90+ имели более низкую базальную экспрессию, они были более чувствительны к индукции аутофагии, о чем свидетельствует более высокая повышающая регуляция по сравнению с CD90-клетками. . Это увеличение наблюдалось не только при лечении доксорубицином и E64D, но и при лечении 0.3% ДМСО в качестве носителя.

В тканях ГЦК распределение мРНК ATG8 было сопоставимо между узлами ГЦК (высокий уровень CD90) и SNT (низкий уровень CD90), в то время как в клеточной линии JHH6 экспрессия ATG8 была значительно ниже в клетках CD90+. Эти данные согласуются с предыдущим отчетом, показывающим, что низкий уровень ATG8 в тканях HCC был связан с плохим прогнозом пациента [36], аналогично тому, что наблюдалось для высокого уровня CD90. На основании клинических данных мы заметили, что экспрессия ATG8 значительно выше у пациентов с ГЦК, связанных с ВГВ, и у пациентов с высоким уровнем АЛТ.Кроме того, экспрессия ATG8 в узлах ГЦК постепенно увеличивалась, переходя от высокодифференцированного (ES1), умеренно дифференцированного (ES2) к низкодифференцированному HCC (ES3/ES4). Обратная корреляция была обнаружена для уровня АФП, также наблюдаемого для высокой экспрессии CD90+ в предыдущих исследованиях [8,31].

Для подтверждения данных по мРНК мы провели экспрессию белка LC3 в тканях печени. Наши данные согласуются с предыдущими исследованиями [37–39], показывающими высокую экспрессию LC3 в ГЦК по сравнению с тканями СНТ. Из данных иммуноблоттинга парных тканей ГЦК мы наблюдали высокую вариабельность экспрессии LC3, причем большинство из них было высоким в узелке ГЦК по сравнению с его СНТ (72%). Следует отметить, что связь между генами аутофагии и белком в узлах ГЦК и клиническими переменными может быть контрастной. Мы считаем, что прямая количественная оценка генов LC3 или аутофагии в различных образцах ГЦК может быть довольно сложной, поскольку нормальные клетки имеют базальный поток аутофагии, который может различаться у разных людей физиологическим образом. Широкая гетерогенность рака и микроокружение рака еще больше усложняют данные. По этой причине углубленный анализ субпопуляций ГЦК, как показано в этом исследовании, был бы полезен для лучшего понимания механизма.

В заключение мы подтверждаем, что клетки HCC CD90+ и CD90- имеют различную активацию аутофагии. Аутофагия участвует в механизме защиты от рака против доксорубицина. Рак, стимулирующий функцию аутофагии в клетках CD90+, был связан с окружением ГЦК.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансовая поддержка

Эта работа финансировалась за счет гранта Международного сотрудничества с Вьетнамом от региона Фриули-Венеция-Джулия для Fondazione Italiana Fegato. CHCS был поддержан грантом от Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC) (IG19862) для GT.

Департамент социальных служб | Доверительные фонды для лиц с особыми потребностями

Доверительные фонды для лиц с особыми потребностями (SNT) — это тип доверительного фонда, который сохраняет за получателем SNT право на получение государственных пособий, основанных на потребностях, таких как Medicaid и Supplemental Security Income (SSI). Эти трасты также могут называться трастами дополнительных потребностей или трастами «(d)(4)(A)» в соответствии с федеральным законом, который их уполномочил, 42 U.SC § 1396p(d)(4)(A). Любое лицо моложе 65 лет, которое является инвалидом в соответствии со стандартом Администрации социального обеспечения, может размещать активы в SNT, чтобы установить или сохранить право на участие в программе Medicaid. Как правило, поскольку бенефициар SNT не владеет активами в доверительном управлении, он или она может по-прежнему иметь право на участие в программах пособий с ограничением по активам. Кроме того, федеральный закон освобождает от штрафа перевод активов в СНТ.

Однако для того, чтобы использовать SNT для получения или сохранения льгот Medicaid, как документ о доверительном управлении, так и ежегодная отчетность SNT должны быть раскрыты и проверены.Существует несколько требований для создания СНТ. Некоторые из этих требований включают, но не ограничиваются:

  • Получатель SNT был признан нетрудоспособным в соответствии с 42 USC 1382(a)(3)(A).
  • СНТ является безотзывным.
  • SNT предназначен исключительно для получателя SNT.
  • Устанавливать СНТ могут только конкретные лица (родитель, дедушка, бабушка, опекун, суд).
  • В случае смерти бенефициара SNT штат Нью-Джерси является первым оставшимся бенефициаром и получит все суммы, оставшиеся в доверительном управлении, до суммы, равной общей сумме предоставленных льгот Medicaid, за вычетом любого возмещения или восстановления платежей Medicaid. ранее полученные государством.
  • Запрещены переводы в траст после достижения бенефициаром SNT возраста 65 лет. Любые дополнения к трасту после этого времени с активами бенефициара регулируются правилами, регулирующими неправомерную передачу ресурсов.
  • Распределение денежных средств от траста бенефициару SNT должно учитываться как незаработанный доход.
  • Годовые отчеты необходимо направлять в агентство по определению права на получение помощи и в Отдел административных действий бенефициара DMAHS (BAAU) по адресу, выделенному жирным шрифтом на следующей странице.Щелкните здесь, чтобы просмотреть образец годовой бухгалтерской формы.
  • В случае деликта (иска о телесных повреждениях) для восстановления финансирования SNT агентство Medicaid должно сначала возместить платежи Medicaid, связанные с деликтом, прежде чем SNT может быть установлено.

С правилами штата Нью-Джерси для SNT можно ознакомиться по адресу N.J.A.C. 10:71-4.11(г)1 .

Следующие предметы можно отправить по почте в BAAU по адресу, выделенному ниже жирным шрифтом:

  • Годовая и итоговая бухгалтерская отчетность СНТ.
  • Уведомление о расходах в годовом периоде по одному пункту или цели, которые превышают 5000 долларов США, или любую сумму, которая существенно истощит основную сумму траста.
  • Изменения в опекуне или контактной информации опекуна.
  • Уведомление о смерти получателя СНТ.
  • Запрос от доверительного управляющего на сумму, причитающуюся DMAHS.
  • Вопросы для БААУ.

Отдел административных действий бенефициара DMAHS
Почтовый индекс 5
PO Box 712,
Trenton, NJ 08625-0712
609-588-3026 или 3089

 

Платежи в случае смерти должны быть отправлены на один из следующих адресов (чеки должны быть отправлены на « Treasurer, State of New Jersey »):

По обычной почте –
Департамент доходов штата Нью-Джерси
Сейф 656
200 Woolverton Ave., корп. 20
Трентон, Нью-Джерси 08646

 

Почтой с ночным отправлением, заказным письмом, FedEx или курьером —
Департамент доходов штата Нью-Джерси
200 Woolverton Ave.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*