Пузыреплодник сорта и виды: Пузыреплодник лучшие сорта

Пузыреплодник лучшие сорта

Наверняка каждый хоть раз в жизни встречал этот эффектный и одновременно нежный кустарник с забавным названием «пузыреплодник». Описание сортов этого растения – в нашем материале.

Известно около 14 видов этого декоративного листопадного кустарника. Род Пузыреплодник (Physocarpus) выращивают в наших широтах с 1793 г. (первое упоминание в каталогах Санкт-Петербургского ботанического сада). В настоящее время пышные кусты разных сортов пузыреплодника можно встретить не только в садах приусадебных участков, но и в городских парках.

Это неприхотливый, морозостойкий кустарник. Часто пузыреплодник используют в качестве живой изгороди, высаживая кусты вдоль железнодорожных магистралей.

Пузыреплодник калинолистный

Куст пузыреплодника калинолистного может достигать 3 м в высоту и столько же в диаметре. Ветви раскидистые, крона полушаровидная, густая. Диаметр цветков – до 1,2 см, окраска лепестков белая или розовая (возможны смешанные оттенки).

Листьям с зубчатыми краями характерна эффектная окраска: от золотистой до темно-пурпурной. Вид известен с 1864 г.

• Пузыреплодник: посадка, уход и размножение декоративного кустарника

  Полезные советы для новичков, как выращивать пузыреплодник.

Теневыносливый вид, но чтобы сохранять окраску листьев и цветов, ему необходимо достаточное количество солнечного света. В регионах с суровыми зимами пузыреплодник необходимо укрывать на зимний период.

Дартс Голд (Dart’s Gold)

Эффектный кустарник с декоративными листьями ярко-желтой окраски, нежными цветами и плодами украшает участок на протяжении всего сезона.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Розовато-белая	150	150	Июнь-июль

Лютеус (Luteus)

Пузыреплодник сорта Лютеус прекрасно подходит для оформления живых изгородей, хорошо смотрится в контрастных посадках за счет листвы, окрашенной в желто-оранжевые цвета.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Белая	300	300	Июнь-июль

Ред Барон (Red Baron)

Этот сорта пузыреплодника идеален и для одиночных, и для многоуровневых посадок. Полушаровидная крона с нежно-розовыми соцветиями и темно-красной листвой отлично дополняет живую изгородь.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Бледно-розовая	200	200	Июнь-июль

 Диабло (Diabolo)

Пузыреплодник Диабло (Диаболо) завораживает насыщенным темно-пурпурным оттенком листвы. Притягивает к себе внимание как в солитерной посадке, так и в живой изгороди.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Бледно-розовая	300	300	Июнь-июль

• Пузыреплодник Диаболо — яркий акцент для вашего сада

  Неприхотливый, быстрорастущий и дьявольски эффектный кустарник, декоративный на протяжении всего вегетационного периода.

Саммер Вайн (Summer Wine)

Окраска листьев пузыреплодника сорта Саммер Вайн напоминает цвет красного вина. В тени листва может слегка позеленеть, но это не снижает декоративности куста.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Розово-белая	200	200	Июнь-июль

 Леди ин Ред (Lady in Red)

Пузыреплодник Леди ин Ред – сорт относительно новый. Эффектные морщинистые листья имеют красный, вплоть до свекольного, оттенок.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Бело-розовая	150	120	Июнь

Литл Девил (Little Devil)

Темно-бордовые кусты пузыреплодника этого сорта могут служить яркими пятнами в контрастных композициях. Литл Девил отличается неприхотливостью и стойкостью.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Бледно-розовая	100	100	Июнь-июль

Литл Энджел (Little Angel) 

Листья пузыреплодника сорта Литл Энджел очень мелкие, с бордовым оттенком. Куст компактный, невысокий, хорошо смотрится в контейнерных посадках.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Розовато-белая	100	100	Июнь-июль

Литл Джокер (Little Joker)

Этот кустарник с листвой вишневого цвета хорошо переносит заморозки. Как и другие низкорослые сорта пузыреплодника, подходит для выращивания в контейнерах.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Розовато-белая	90-100	100	Июнь

Пузыреплодник амурский

Высота кустарников этого вида достигает 3 м в высоту. У широкой раскидистой кроны шаровидная форма. Листья обычно темно-зеленого цвета, цветки белые (до 1,5 см в диаметре). Пузыреплодник амурский в ландшафтном дизайне традиционно используется в групповых и одиночных посадках. Не уступает калинолистному в неприхотливости и зимостойкости.

Ауреомаргината (Aureomarginata)

Золотисто-темная кайма на зеленых листьях пузыреплодника этого сорта придает кустарнику очарование. Оригинальный вид куста освежает сад, привлекает внимание.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Белая	250	200	Июнь

Нана (Nana)

Это низкорослый сорт пузыреплодника амурского. Темно-зеленые листья формируют компактную крону. Применяют в сложных композициях и в солитерных посадках на небольших участках.

Окраска лепестков	Высота куста (см)	Ширина куста (см)	Сроки цветения
Бело-розовая	100-120	100-120	Июнь

Если вы в поисках красивых и необычных декоративных кустарников, обратите внимание на Снежеягодник

• Снежноягодник – эффектный кустарник для осени и зимы

  Кустарник с необычными снежно-белыми ягодами, которые украшают растение даже после листопада.

Листопадный кустарник пузыреплодник (Physocarpus) является представителем семейства розовые. Латинское наименование такого растения состоит из 2 корней древнегреческого языка, а именно: «physo» — «пузырь» и «carpos» — «плод». В данном роду имеется 14 видов. В диких условиях пузыреплодник можно повстречать в Северной Америке и в Восточной Азии. При выращивании в саду данный кустарник отличается своей неприхотливостью, а также тем, что он способен сохранять свой эффектный внешний вид на протяжении всего периода вегетации. Также данный кустарник является быстрорастущим и устойчивым к загазованности воздуха. Такое растение выращивают как одиночное и применяют в ландшафтном дизайне. Однако наиболее эффектно смотрится живая изгородь из пузыреплодника.

Особенности пузыреплодника

Раскидистый кустик пузыреплодника состоит из поникающих веток, которые формируют пышную шарообразную крону. У взрослого кустарника происходит отслаивание коры, причем широкими полосами. В высоту он может достигать 300 сантиметров. Трех-пятилопастные листовые пластины по форме напоминают листочки калины. У простых цветков белого окраса имеется множество тычинок. Они входят в состав соцветий полушаровидной формы, которые в диаметре могут достигать 5–7 сантиметров. Пышное цветение происходит в начале летнего периода. Также довольно эффектно смотрятся и плоды такого растения, они представляют собой вздутые листовки, которые при созревании окрашиваются в красный цвет. Культивируется лишь 2 вида пузыреплодника, при этом есть несколько эффектных сортов, листовые пластины которых обладают различным окрасом.

Посадка пузыреплодника в открытый грунт

В какое время сажать

Если в питомнике либо садовом центре вам удалось купить саженцы с закрытой системой корней, их высадку в открытую почву можно будет произвести в любое время года (только не зимой). Если у приобретенных саженцев открытая система корней, то для их посадки следует выбрать весну, а лучше всего осень. Для посадки такого растения подойдет хорошо освещенное, открытое место, рядом с которым не будут расти большие деревья. В том случае, если у сорта окрас листовых пластин зеленый, то такой кустарник сможет нормально расти и на затененном участке. К грунту пузыреплодник не требователен, однако он обязательно должен быть хорошо дренированным, и в его состав должна входить известь. Если же вы хотите, чтобы он имел максимально декоративный вид, тогда следует выбрать рыхлую суглинистую землю, насыщенную питательными веществами.

Как сажать

При подготовке посадочной ямки следует помнить, что ее величина должна быть такой, чтобы в ней смог уместиться слой почвы, насыщенной питательными веществами (либо землесмеси, состоящей из торфа, дерна, земли и песка), при этом у саженца корневая шейка после посадки должна находиться на одном уровне с поверхностью участка. В связи с этим подготовить ямку, выкопав ее и засыпав в нее плодородную почву, рекомендуется за полмесяца до намеченного дня посадки, в этом случае грунт успеет хорошо осесть. Саженец помещают в посадочную ямку вместе земляным комом, при этом помните, что вносить в почву удобрения во время посадки не следует, так как молодое растеньице просто не способно его нормально усвоить. Затем ямку надо будет заполнить почвосмесью (состав описан выше) либо грунтом, насыщенным питательными веществами. Посаженный кустарник нуждается в обильном поливе. Если после полива земля осядет, то нужно будет ее подсыпать. Первые дни следует наблюдать за тем, чтобы приствольный круг пузыреплодника был постоянно немного влажноватым. Поверхность участка следует засыпать слоем мульчи (перегной либо торф).

Уход за пузыреплодником

При уходе за таким растением очень важно его вовремя поливать, так как оно крайне негативно реагирует на засуху. При поливе следите за тем, чтобы жидкость не попадала на поверхность листовых пластин и соцветий, потому что это может привести к появлению ожогов. В связи с этим данную процедуру рекомендуется производить ранним утром либо в вечернее время. Летом в жаркий период полив надо будет осуществлять приблизительно пару раз в неделю, при этом за раз на 1 куст должно уходить 4 ведра воды. Наблюдайте за тем, в каком состоянии находятся листочки пузыреплодника, потому что ему способна навредить не только засуха, но и переувлажнение грунта. В том случае, если участок не засыпан мульчей, то каждый раз после того как кустарник будет полит, надо осуществлять рыхление его поверхности и прополку.

Подкармливать растение надо пару раз в год (в весеннее и осеннее время). В весеннее время подкормить растение надо следующей питательной смесью: на 1 ведро воды берут пятисотграммовую банку коровяка, а также по 1 большой ложке мочевины и аммиачной селитры. На 1 взрослый куст берется 1,5 ведра такого раствора. В осеннее время под каждый кустик следует вылить по полтора ведра питательного раствора, состоящего из 10 литров воды и 2 больших ложек нитроаммофоски.

Обрезка

Данному кустарнику необходима систематическая санитарная и формирующая обрезка. В весеннее время следует обязательно произвести обрезку в санитарных целях, для этого срезаются все травмированные, пораженные болезнью, пострадавшие от мороза стебли и ветви, а также те, что растут внутрь куста. Обрезая пузыреплодник в осеннее время, вы подготавливаете его к предстоящей зиме. Обрезку с целью формирования кроны можно произвести осенью, но опытные садоводы рекомендуют заняться ею весной. Для того чтобы кустик обладал формой фонтана, нужно срезать все тоненькие стебли у основания, оставив 5 либо 6 наиболее мощных, которые надо немного укоротить. Если же вы хотите, чтобы куст был широким, его нужно срезать на высоте 50 сантиметров. Когда кустарнику исполнится 6 лет, производят омолаживающую обрезку на пень. На толстых стеблях места срезов следует намазать садовым варом.

Пересадка

В некоторых случаях возникает необходимость в пересадке данного растения, к примеру, вам необходимо перенести его на другое место. Если кустарник уже взрослый, то пересадить его следует в начале весны, до того как набухнут почки, либо в осеннее время, когда окончится листопад. Куст пересаживают с достаточно объемным земляным комом, при этом сначала ему делают обрезку, во время которой срезают травмированные, пораженные болезнью и загущающие стебли, а оставшиеся следует укоротить до 0,2–0,3 м. Благодаря этому вам удастся сделать нагрузку на систему корней более слабой, потому что во время адаптации ей будет крайне сложно кормить взрослое растение. Пересадка производится практически так же, как и посадка, только следует учесть, что пузыреплодник в этом случае уже взрослый. Пересаженный куст надо полить, используя для этого раствор Гетероауксина либо Корневина, а еще нужно опрыскать листовые пластины Эпином либо Экогель-антистрессом.

Заболевания и вредители

Посадить и вырастить пузыреплодник довольно просто, а еще садовода порадует то, что он обладает очень высокой устойчивостью к вредителям и различным заболеваниям. Однако в том случае, если в почве не будет доставать питательных веществ, то у растения происходит развитие хлороза, из-за чего усыхают верхушечные стебли и желтеют молоденькие листовые пластины. Если вы заметили признаки данного заболевания, то следует произвести опрыскивание листвы либо полив самого куста под корень раствором Феррилена, Антихлороза, Феровита, но опытные садоводы рекомендуют воспользоваться Хелатом железа. Как правило, после данной процедуры пузыреплодник очень быстро восстанавливается.

Размножение пузыреплодника

Пузыреплодник можно достаточно легко размножить вегетативным способом, а именно: черенкованием, отводками, а также делением куста. Также для этого подойдет и генеративный (семенной) способ размножения. Высев семян производят в весеннее либо осеннее время, при этом для начала их надо стратифицировать в течение 30 дней. Однако следует знать, что выращенные таким образом кустарники редко сохраняют насыщенный окрас листьев, который присущ родительскому растению. А еще выращивание пузыреплодника из семян достаточно трудозатратный процесс. В связи с этим для его размножения рекомендуется прибегнуть именно к вегетативным способам.

Черенкование

Заготовку черенков следует производить до того, как куст зацветет. Для этого срезают зеленые побеги нынешнего года. Длина черенков может быть от 10 до 20 сантиметров, и на каждом из них должно присутствовать по 2 либо 3 междоузлия. Все листовые пластины, находящиеся внизу черенка, надо срезать, а те, что располагаются вверху — укорачивают на ½ часть. Подготовленные черенки надо погрузить в раствор средства, стимулирующего корнеобразование (например, Корневин). Затем их высаживают в учебную грядку в землесмесь, состоящую из торфа и песка. Производят их полив и накрывают пленкой из полиэтилена. Ухаживать за черенками очень просто, их надо вовремя поливать и систематически проветривать. В зимнее время укоренившиеся черенки нуждаются в укрытии, а уже весной их можно будет посадить на постоянное место.

Как размножить отводками

Данный метод размножения является наиболее простым и эффективным. В весеннее время следует отобрать наиболее мощный и абсолютно здоровый побег, который должен обязательно расти наружу. С него следует оборвать все листовые пластины, оставив лишь растущие на самом верху. Затем этот стебель укладывается в заранее подготовленную канавку, глубина которой должна быть около 12 сантиметров, далее его фиксируют, используя для этого скобу из дерева (можно взять шпильки для волос), потом канавку надо заполнить грунтом. На протяжении всего периода вегетации отводок будет нуждаться в своевременном поливе, прополке и рыхлении поверхности почвы. К наступлению осеннего периода отводок должен будет дать корни, и его надо отделить от родительского кустика и укрыть на зимовку.

Как размножить делением куста

Делением куста лучше всего размножать пузыреплодник калинолистный. Производят данную процедуру в весеннее либо осеннее время. Однако если у вас есть опыт и определенные навыки в этом деле, то поделить куст можно и летом. Чтобы данная процедура закончилась успешно, ее надо провести очень быстро, потому что корневая система, оказавшаяся на свежем воздухе, ни в коем случае не должна подсохнуть.

Пузыреплодник зимой

Уход в осеннее время

В осенний период данный кустарник выглядит особенно эффектно, ведь именно в это время листва окрашивается в различные цвета. Он обладает сравнительно высокой морозоустойчивостью и в зимнее время, как правило, замерзают лишь те ветви, которые не успели вызреть. Но следует учесть что укоренившиеся черенки как и молоденькие экземпляры нуждаются в укрытии на зиму.

Подготовка к зимовке

В том случае если синоптики предвещают очень морозную зиму то укрыть следует и взрослые кусты пузыреплодника. Для этого надо аккуратно стянуть кустарник шпагатом, а потом «надеть» на него конус из рубероида либо неплотно обмотать его лутрасилом. Однако для начала надо засыпать поверхность приствольного круга слоем мульчи (торфом), толщина которого должна быть от 5 до 8 сантиметров. Молодые кустарники надо обрезать, замульчировать их приствольный круг, а затем накрыть лапником.

Виды и сорта пузыреплодника с фото и названиями

На данный момент культивируется только 2 вида пузыреплодника, а еще их сорта и разновидности.

Пузыреплодник амурский (Physocarpus amurensis)

Это вид в природных условиях можно повстречать в Северной Корее, Северном Китае и на Дальнем Востоке, при этом он предпочитает расти в смешанных лесах. Высота такого кустарника с кроной шаровидной формы около 300 сантиметров. Молоденькие стебли коричневато-красные и гладкие, при этом на старых стволах происходит отслаивание коры продольными полосками. Трех-пятилопастная листовая пластина обладает сердцевидным основанием и длиной около 10 сантиметров. Лицевая поверхность у них темно-зеленая, а изнаночная — белесовато-серая, потому что на ней располагаются звездчатые войлочные волоски. Соцветия щитковидной формы состоят из 10–15 белых цветочков, обладающих полутора сантиметровым диаметром. Цветение длится примерно 20 дней. Плод представляет собой вздутую листовку, которая при созревании становится красной. Этот вид отличается высокой морозоустойчивостью. Его применяют для создания живых изгородей, а также в групповых и одиночных посадках. Культивируется с 1854 г. Наиболее популярные формы:

1. Лютеус. Летом листовые пластины окрашены в насыщенно-желтый цвет, а в осеннее время они становятся бронзовыми.
2. Ауреомаргината. На листовых пластинах имеется окантовка темно-золотистого окраса.
3. Нана. У такого карликового кустарника темно-зеленые однотонные листовые пластины.

Пузыреплодник калинолистный (Physocarpus opulifolius)

Родина такого вида восточная часть Северной Америке, при этом он предпочитает расти в подлесках и на речных берегах. Этот кустарник с полушаровидной пышной кроной в высоту может достигать 300 сантиметров. Эллиптические трех-пятилопастные листовые пластины имеют вытянутую большую среднюю долю и зубчатую кромку. Лицевая поверхность у них зеленая, а изнаночная — окрашена в более бледный оттенок, иногда она может быть опушенной. Мелкие (диаметр около 1,2 см) цветочки обладают розовым либо белым окрасом, и тычинками красного цвета. Плод представляет собой вздутую сборную бледно-зеленую листовку, которая при созревании становится красной. Данный вид можно применять для создания живой изгороди, а также в одиночных либо групповых посадках. Культивируется с 1864 г. Наиболее популярные сорта:

1. Дартс Голд. Высота плотного и широкого куста может доходить до 150 сантиметров. Желтые листовые пластины в летнее время становятся зеленовато-желтыми. Кистевидные соцветия состоят из белых либо розовых цветков.
2. Диабло (краснолистный). Высота куста около 300 сантиметров. Окрас его листвы пурпурный либо темно-красный. Если куст растить в затененном месте, то его листочки будут зелеными с пурпурным отливом, а при выращивании в солнечном месте, они обладают красным окрасом. В осеннее время окрас листвы не изменяется. Данный сорт является наиболее популярным.
3. Рэд Барон. Высота куста около 200 сантиметров. Голые овальные трех-пятилопастные листовые пластины в длину достигают 7 сантиметров и имеют зубчатую кромку. Они окрашены в эффектный темно-красный цвет и являются более узкими по сравнению с пузыреплодником Диабло. Зонтиковидные соцветия состоят из белых с розовым отливом цветочков, достигающих в диаметре 5 сантиметров. Также довольно эффектно смотрятся и плоды красного цвета, в состав которых входит от 3 до 5 остроконечных мешочков. Данный сорт входит в число наиболее ценных.
4. Леди ин Рэд. Куст в высоту может достигать 150 сантиметров. Данный сорт выведен селекционерами из Англии. Листочки насыщенно-красного окраса постепенно темнеют. Окрас нежных цветочков бело-розовый.

Пузыреплодник (Physocarpus) — это листопадный кустарник. Он относится к семейству Розовые. Распространение — Северная Америка и Восточная Азия. В роду насчитывается 14 видов. В дикой природе России произрастает только 2 вида.

Это неприхотливое растение обладает эффектными декоративными качествами, которые оно не утрачивает в течение всего периода вегетации. Темпы роста отличаются быстротой. Его часто используют в ландшафтном дизайне.

Раскидистые ветви пузыреплодника формируют собой шаровидную крону. Высота не превышает 3 метров. Листья его визуально напоминают листья калины. Простые мелкие цветки белого цвета образуют соцветия, которые отличаются обильным и многочисленным соцветием. Диаметр соцветия может достигать 7 см.

В культуре используются только два вида культуры. Среди них выделяются несколько сортовых разновидностей. Они очень привлекательны для цветоводов и ландшафтных дизайнеров благодаря своим декоративным свойствам и неприхотливости.

Виды и сорта

Среди видов пузыреплодника широкое распространение в культуре России получили два вида:

Амурский пузыреплодник (Physocarpus Amurensis) — это кустарник, родиной которого является Восточная Азия. Отличается шаровидной кроной. Высота его не превышает 3 метров. Гладкие побеги имеют коричневый с красноватым оттенком цвет. У старых кустов кора отслаивается полосками продольной формы. Листья бывают трехлопастными или пятилопастными. Длина листьев может достигает 10 см. Верхняя их сторона — темно-зеленая, а снизу покрыты войлочными волосками сероватого цвета.

Амурский

До 15 мелких белых цветочков образуют соцветия. Цветение длится до трех недель. Этот вид является устойчивым к заморозкам. Окультурен был во второй половине 19 века. Используется для групповых и сольных посадок, а также распространен для создания живых изгородей.

Калинолистный (Physocarpus opulifolius) — очень популярных в российских садах кустарник. Это неприхотливое и очень декоративное растение. Отличается особой пышностью благодаря раскидистым ветвям, образующим крону в форме шара. Гофрированные листья отличаются крупными размерами. Высота куста — около 3 метров. Мелкие цветки имеют красноватые или розовые тычинки. Они образуют собой соцветия. Листья также могут быть трехлопастными или пятилопастными.

Этот вид пузыреплодника очень широко используется в цветоводстве и ландшафтном дизайне. Идеально подходит для создания живых изгородей. Свое распространение в культуре России получил во второй половине 19 века.

Калинолистный

Сорта калинолистного пузыреплодника

Голден Наггет (Golden Nugget)— популярный в цветоводстве сорт. Очень декоративен за счет своей яркой листвы золотой окраски. Его высота обычно не превышает 2,5 метров. Крона — широкая и шаровидная. Цветки бывают белой или розоватой окраски. Начало цветения обычно приходится на июнь. Эта сортовая разновидность отличается нетребовательностью к почвам, засухоустойчивости и морозостойкости. Растение не выносит избыточной влаги и застоя воды. Голден Наггет великолепен в разнообразных цветочных композиции, озеленение и создании живых изгородей.

Ред Барон (Red Baron) отличается эффектными декоративными свойствами. Сорт очень популярен благодаря темно-красной окраске листьев. Высота — около 2 метров. Имеет шаровидную крону. В тени листья не такие красные, как на солнце, а в осенний период времени становятся бронзовыми. Рост быстрый. Сорт устойчив к почве, засухоустойчивый и зимостойкий. Любит солнце. Применяется в ярких цветочных композициях, а также при создании живых изгородей. Часто используется в озеленении города и садов.

Ред Барон

Диабло (Diablo) — еще один красный сорт пузыреплодника (именно его можно увидеть заглавном фото). Цвет листьев более насыщенный чем у Ред Барон. Высота может достигать 3 метров. Густая и плотная крона имеет полушаровидную форму. Розоватые цветки собраны в щитковидные соцветия. Цветение начинается с середины июня. Листва имеет красный с фиолетовым оттенком цвет. Если кустарник растет в тени, то цвет листвы не такой красный и насыщенный. Сорт отличается декоративностью и неприхотливостью. Дьябло идеален в озеленении городов и садов, а также великолепен при создании живых изгородей, которые отличаются яркостью и плотностью.

Диабло

Леди Ин Ред (Lady In Red) — эффектный декоративный сорт, который был выведен в Великобритании. Красно-коричневые побеги растут вверх. Цвет листвы — ярко-красный. Мелкие розоватые цветки собраны в пышные густые соцветия, которые начинают цвести в июне. Кустарник вырастает до 1,5 метров. Этот сорт не боится ветров и засухи. Также устойчив к заморозкам. Леди Ин Ред любит солнце. В тени его листва не такая красная и насыщенная.

Леди ин Ред

Саммер вайн (Simmer Wine) — двухметровый компактный кустарник. Насыщенно-красные листья могут зеленеть в летнее время, особенно, если куст растет в тени. Бело-розовые небольшие цветки собраны в щитковидные соцветия. Саммер вайн начинает цвести с конца весны. Сорт является декоративным за счет своей красно-винной листвы и розовых соцветий. Этот неприхотливый и светолюбивый сорт зачастую используется в создании живых изгородей и композиций из хвойных и лиственных кустарников и деревьев, а также клумб из цветов-многолетников.

Саммер вайн

Лютеус идеален для озеленения парков и садовых участков. Золотистая листва этого кустарник не может остаться незамеченной. Солнечный сорт очень неприхотлив и не требователен к почве. Куст может использоваться в разнообразных ландшафтных композициях, в украшении зданий и улиц. Форма кроны — полушаровидная. Высота не превышает 3 метров. Кустарник обладает многочисленными белыми цветками, которые образуют собой щитки.

Лютеус

Дартс Голд (Dart`s Gold) является усовершенствованной  формой сорта Лютеус. Золотистый куст имеет многочисленные белые цветки, собранные в щитковидные соцветия. Цветение начинается в середине июня и длится в течение трех недель. Данный желтый сорт любит солнце, но растет и в затененных участках, однако при этом теряет насыщенность окраски. Сорт устойчив к засухи и небольшим заморозкам, но не переносит застоя влаги.

Дартс Голд

Ауреа (Aurea) — прекрасный кустарник, высота которого может достигать 2,5 метров. Ярко-желтая листва великолепна на фоне белых соцветия и красноватых плодов. Начало цветения приходится на конец июня. Сорт засухоустойчив, зимостоек и не требователен к почвам. Может расти в тени, но предпочитает солнечный свет. Используется в озеленение садов, создании разнообразных композиций и живых изгородей.

Ауреа

Литтл Девил (Little devil) — еще один краснолистный пузыреплодник. Красный дьявол отличается небольшим ростом (около 1 метра). Побеги растут вверх, образую полушаровидную крону. Литься имеют красный цвет с фиолетовым оттенком. В тени листва обретает зеленый цвет, поэтому желательно высаживать его в солнечных местах. Многочисленные цветки имеют бледно розовый цвет и формируют соцветия, которые зацветают в середине июня. Этот неприхотливый и солнцелюбивый сорт часто применяется в декорировании садов и городских аллей и зданий. Также используется для создания бордюров.

Литтл Девил

Андре — это сорт калинолистного пузыреплодника с широко шаровидной кроной. Вырастает до 2,5 метров. Листва имеет пурпурно-красный цвет. В осеннее время обретает бронзовый оттенок. В начале июня распускаются шарообразные соцветия из мелких белых или розоватых цветков. Сорт устойчив к засухе, ветрам и условиям городов. Андре предпочитает влажную почву и солнце. Андре прекрасен в озеленении садов и парков, также используется в создании многоконтрастных композиций.

Андре

Размножение

Растение размножают черенками, отводками и делением кустов. Для размножения черенками необходимо использовать зеленые побеги, которые отросли в этом году. Обрезать их требуется весной до момента, когда культура начнет цвести. Длина побега не должна быть больше 20 см. Листья с побега удаляются. Сверху листья оставляют, но немного укорачивают.

Черенки прежде необходимо замочить в растворе, который стимулирует образование корней. Подходит «Корневин». Для посадки используют либо речной песок, либо смесь песка и торфа. После посадки черенки желательно накрыть полиэтиленовой пленкой. Также для укрытия подойдут бутылки с отрезанными горлышками. До наступления зимы черенки требуется периодически проветривать и увлажнять.

Зимой укорененные побеги необходимо укрыть. В весеннее время их требуется пересадить на постоянное место произрастания.

Также растение размножается отводками. Это относительно несложный и эффективный метод. В качестве отводка применяется сильный и здоровый побег. Все, кроме верхних, листья удаляются. Побег укладывается в ямку глубиной около 15 см и пришпиливается к грунту. Делать это необходимо в начале весны, чтобы за зиму отводок могу укорениться в почве.

В засушливое время большое значение имеет увлажнение грунта. В конце осени молоденькие кустики требуется отделить от материнского куста и укрыть на зимний период.

Посадка

Сажать растение семенами нежелательно, гораздо лучше покупать молодые саженцы с закрытой корневой системы. Это связано с тем, что при посадке семенами, оригинальная окраска листвы передается далеко не всему потомству.

Кустики можно сажать летом, осенью или весной. Ямка для посадки саженца должна быть около полуметра в глубина и столько же диаметром. На дно ямы желательно положить немного перегноя или же торфяного субстрата. Саженец не стоит заглублять более, чем на 5 см. После посадки требуется обильно полить. Желательно также воспользоваться раствором «Корневина».

Место для посадки должно быть солнечным, так как в полутени или в тени окраска листьев становится менее насыщенной и яркой. В грунте не должна присутствовать известь, а также должен быть хороший дренаж.

Чтобы внешний вид был пышным и красивым, почва должна быть питательна веществами, но и на бедной почве кустарник будет радовать своим цветением. Растение можно сажать в условиях города и рядом с трассой, так как загрязненность и загазованность не страшны для него.

Уход

Пузыреплодник отличается неприхотливостью, однако некоторые правила ухода соблюдать все-таки придется. Режим полива зависит от возраста растения, температурного режима и климата. Если летом очень жарко, то поливать необходимо с конца весна и до наступления осеннего периода. Полив осуществлять нужно хотя бы один раз за де недели. Для взрослого дерева требуется около 40 литров воды. Если почва является тяжелыми суглинками, то есть большая опасность перелива растения.

Избыточное увлажнение может привести к развитию такого заболевания, как мучнистая роса. Она может привести к тому, что растение погибнет.

Весной и осенью культура нуждается в подкормках. В весеннее время в качестве подкормки выступают азотосодержащие удобрения, а в осеннее — минеральные. Весной можно использовать удобрение, которое состоит из:

1. 10 литров воды;
2. 0,5 литров коровяка;
3. 1 ст.л. аммиачной селитры;
4. 1 ст.л. мочевины.

В качестве осеннего удобрения разводят нитроамоффоску (в размере спичечного коробка) на 10 литров воды. На одно взрослое растение необходимо примерно 15 литров подкормки.

Пересадка и обрезка

Обрезка культуре необходима. Есть два вида обрезки: санитарная и формообразующая. Первую осуществляют весной, когда подмерзшие и ломаные ветки. А чтобы кустарник рос так, как необходимо, необходимо осуществлять формирующую обрезку. Она необходима как весной, так и осенью. Обрезка также провоцирует ускоренный и правильный рост побегов. Чтобы куст был широким, побеги обрезаются на полметра. А чтобы куст был в форме фонтана, обрезаются все тонкие побеги у основания, а оставшиеся побеги укорачиваются.

Растение пересаживают, если в этом имеется необходимость. Прежде, чем пересадить его, лишние и больные побеги удаляются. Пересадка осуществляется в весенний период. Куст пересаживают вместе с крупным земляным комом.

После пересадки кустарник требуется обильно полить водой и раствором «Корневина». Также необходимо обработать листву. Для этого подойдет «Эпин».

Применение в ландшафтном дизайне

Эта декоративная культура пользуется огромной популярностью у садоводом и ландшафтных дизайнеров. Ее сочные цвета и многочисленное цветение прикуют к себе внимание любого, даже самого искушенного любителя цветов.

Пузыреплодник используется в групповых и одиночных посадках. Его применяют в дизайне сада, городских парков. Им декорируют здания.

Но чаще всего культура выращивается для создания живых изгородей и бордюров.

На фото выше живая изгородь из краснолистных калинолистных пузыреплодников. Такая изгородь получается плотной, яркой и красивой.

С чем сочетается пузыреплодник?

Сорт Лютеус золотистого цвета великолепно будет смотреться с такими сортами, как Ред Барон и Диабло красного цвета. Для Дартс Голд идеальны барбарис и белый дерен.

На фото разные зеленые сорта пузыреплодника идеально сочетаются со спиреей и барбарисом для озеленения площадей и скверов.

Также культура хорошо смотрится в сочетании с такими культурами:

• Чубушник;
• Курильский чай;
• Жимолость;
• Спирея;
• И другие.

Для посадки в вазонах и кашпо хорошо подходят карликовые сортовые разновидности. К таковым, например, относится Нана (Nana). Он относится к амурской разновидности культуры. Еще одним низкорослым сортом является Литтл Девил (Little devil).

Карликовые зеленолистные и краснолистные сорта в кашпо.

Сорт Summer Wine

Пузыреплодник opulifolius Tiny Wine.

Пузыреплодник ‘Summer Wine’ и спирея ‘Ogon’

Пузыреплодник “Diabolo”, пионы, гортензия крупнолистная и гортензия сорта “Anna Bella”.

Summer Wine

Где купить?

Купить саженцы пузыреплодника можно в садоводческих магазинах, питомника. Также можно заказать почтой и через интернет-магазины.

Сорт	Где купить	Цена
Диабло (40-60 см)	Россельхозпитомник в Санкт-Петербурге	999 р.
Лютеус (40-60 см)	Россельхозпитомник в Санкт-Петербурге	999 р.
Ред Барон (90 см)	Питомник Калина (Московская обл. )	450 р.

Обзор на видео
Консультация от видеоканала Флорист-Х.

Самый распространенный вид – пузыреплодник калинолистный (Physocarpus opulifolius). Это куст высотой до 3 м с густой кроной. В начале лета растение обильно покрывается цветами белого или розового оттенка, собранными в соцветия. Форма Luteus отличается золотистой окраской листьев, особенно яркой в начале вегетации. А у сорта Darts Gold золотистый цвет сохраняется постоянно. Форма Aureomarginata имеет листья с золотистой каймой. Сорт Diabolo примечателен темно-пурпурной окраской листьев. Сорта пузыреплодника более компактны по сравнению с видовым растением. Существует и карликовая форма Nanus – высотой до 1 м.

Как выглядит кустарник пузыреплодник

Пузыреплодник зимостоек, теневынослив, устойчив к неблагоприятным условиям. Не любит только застоя воды в почве. Легко размножается черенками. Декоративные формы прекрасно сочетаются друг с другом, благодаря этому пузыреплодник в дизайне ландшафтов применяется очень активно. Из видового растения получается хорошая живая изгородь, в том числе стриженная.

Посмотрите на фото, как выглядит пузыреплодник, роскошно цветущий на фоне других насаждений:

Наружность пузыреплодника зависит от его вида и сорта, но обычно это кустарник с раскидистыми ветками, которые образовывают шаровидную крону. Кора отслаивается широкими полосами. Растение достигает высоты до 2,5 м. Листья 3-х или 5-ти лопастные, распределены по веткам равномерно, из-за чего куст выглядит пышным сверху донизу. Цветки белые или розоватые, с многочисленными тычинками по центру, сгруппированные в соцветия (по форме они напоминают полушария) диаметром от 5 до 7 см. Плоды тоже выглядят эффектно, представляют собой вздутые, пузыревидные листовки, которые при созревании краснеют. Свое название растение получило как раз из-за характерной формы плодов.

Насколько удачно сочетается с другими насаждениями кустарник пузыреплодника, смотрите на фото:

К описанию пузыреплодника можно присовокупить и то, что он очень быстро растет, прибавляя до 40 см в диаметре за сезон. Срок его жизни от 30 до 40 лет. Среди садоводов он славится тем, что сохраняет свой декоративный вид практически весь сезон.

Прочитав обобщенное описание пузыреплодника, посмотрите и фото – на нем изображено, как выглядит этот замечательный представитель растительного мира:

Виды и сорта пузыреплодника: фото и описание

Основными считаются два вида пузыреплодника – амурский и калинолистный.

Амурский располагается одиночно или маленькими группами среди зарослей разного рода кустов, на горных склонах. Он является охраняемым в заповедниках растением. Представляет собой куст до 2,5 м высотой. На взрослых экземплярах кора шелушится равномерными полосками. Стволы у молодых кустов гладкие, обычно темной расцветки. Листья около 10 см длиной, зеленые сверху и серые снизу. Цветки белые, диаметром примерно 1,5 см, организованные в соцветия-полукруги.

Оцените красоту этого вида пузыреплодника на фото, презентованном ниже:

Цветут амурские пузыреплодники до 20 дней, плоды при созревании становятся красными, придавая кустарнику яркую, красочную наружность. Также стоит отметить, что данная разновидность растения хорошо переносит зиму, так как ветки полностью одревесневают. Все известные формы и сорта этого вида пузыреплодника активно применяются в оформлении приусадебных участков, парков, городских скверов.

Калинолистный вид – это куст высотой около 2,5 м с широкими, раскидистыми ветками. Побеги образовывают густую шаровидную крону.

Предлагаем оценить пузыреплодник данного вида – посмотрите фото, удачно передающее его достоинства:

Листья приблизительно 5 см в диаметре, сверху зеленоватые, а снизу светлее, по краям зубчатые, слегка поникшие. Цветы размером около 1,2 см, белой или розовой окраски, с ворсинками по центру. Плоды выглядят очень нарядно, по мере созревания они меняют свой цвет (с зеленого на красный).

Декоративные сорта:

Darts Gold

Diablo

Red Baron

И др. служат отличным «материалом» для работы ландшафтных дизайнеров.

Вы можете увидеть вышеописанные виды и сорта пузыреплодника на фото, предложенных ниже:

Ознакомьтесь с коротким описанием сортов пузыреплодника (рассмотрены самые известные образцы):

Diablo

Вырастает до 3-3,5 м в высоту, до 2 м в ширину. Листья глянцевые, в осенний период меняют цвет из глубокого пурпурного на желтый. При этом кустарник выглядит еще более эффектно. Цветки организованы в соцветия, по форме похожие на полукруги.

Nanus

Отличается белыми цветками, маленькими листьями зеленоватого цвета. Эта карликовая форма может достигать не более 1 м. Растение лучше всего высаживать возле изгороди, а также на клумбах – среди травянистых одно- или многолетников.

Summer Wine

Кустарнику присущи средние параметры. Ветви своим изгибом напоминают россыпи салюта. Бело-розовые цветы расположены по всей длине веток. Цветет растение весной. Листья насыщенно-красного цвета. Данный сорт отличается высокой морозостойкостью, неприхотливостью к местности.

Luteus

Кусты растут высотой до 2,5-3 м. Весной наличествует желтый окрас листвы, к лету крона становится зеленой. Цветки белоснежные, собранные в полукруглые соцветия. Кустарник примечателен тем, что его ветви образовывают шаровидный купол.

Darts Gold

Кустарник меняет «летний» ярко-желтый цвет своих листьев на оранжевую гамму в осенний период времени. Такие сезонные метаморфозы выглядят весьма оригинально. Цветки у растения чаще белые, но иногда встречается кремовый окрас.

Red Baron

Растет до 1,5 м в высоту. Отличается данный сорт гофрированными листьями. Цветы розоватого оттенка, они располагаются равномерно по всему кусту.

Aureomarginata

Массивный образец с раскидистыми ветвями. Имеет необычный окрас – зеленые листья с темной или золотистой каймой.

Nugget

Обладает толстыми стеблями, устремленными вверх.

Coppertina

Расцветка оранжевая в весенний период, склонна к покраснению летом. Куст вырастает до 2 м.

Прочитав описание сортов пузыреплодника, посмотрите и фото, на которых изображены самые привлекательные варианты:

Как размножить пузыреплодник черенками, отводками и делением

Размножение пузыреплодника проводят несколькими традиционными способами, а именно – при помощи отводков, черенкованием или делением куста.

Далее описана технология самого популярного пути разведения пузыреплодника – размножения черенками:

1. Срезать молодые ветви длиной до 20 см, с несколькими разветвлениями. При этом необходимо обсечь все листья снизу, а сверху укоротить их примерно наполовину.
2. Черенки замочить в стимуляторе корнеобразования.
3. Посадить заготовки в грядку, предварительно снабженную песчано-торфяной смесью.
4. Обильно полить и накрыть полиэтиленом.

В дальнейшем черенкам пузыреплодника нужен уход: следует проветривать и поливать их, укрывать на зиму. Разобраться в том, как размножить пузыреплодник черенками, не сложно, с этим справится даже начинающий садовод.

Выращивание пузыреплодника методом образования отводок также не сопряжен с трудностями. Берут сильный побег, срезают с него всю листву, кроме верхнего ряда, укладывают в проделанную заранее канаву (глубина 10-12 см). Пришпиливают скобой, присыпают почвой. Не забывают о своевременном поливе и удалении сорняков. К осени уже будет готов отдельный отводок, с собственной корневой системой. Его отсекают от материнского кустарника, в результате чего получают крепкий саженец пузыреплодника, посадка и уход за которым в дальнейшем производится согласно общим правилам.

Далее пойдет речь о том, как размножать пузыреплодник в саду методом деления куста.

Приступать к процедуре лучше всего в начале весны или осенью. Выкапывают зрелый куст, разрезают корневой аппарат на несколько сегментов, затем сразу же осуществляют посадку пузыреплодника (а точнее каждой новой единицы, полученной в процессе деления).

Как посадить пузыреплодник и как за ним ухаживать

Уход и выращивание пузыреплодника нужно начинать с выбора местности для посадки. Растение замечательно себя чувствует как на солнце, так и в тени. Участок лучше выбрать отрытый, без деревьев поблизости. Экземпляр не выносит извести в почве, застоя воды – такого рода грунт спровоцирует загнивание корневой системы. Кустарник способен мириться с высокой концентрацией углекислого газа, поэтому его нередко высаживают как живую изгородь возле дороги.

Приобретают юный саженец с закрытыми корнями в проверенном питомнике или используют посадочный материал, заготовленный собственноручно. Молодое растение нельзя высаживать в морозную погоду. Заниматься посадкой лучше осенью, так как имеется больше условий для благополучной приживаемости, интенсивного роста.

Далее предлагается пошаговая инструкция того, как посадить пузыреплодник:

1. Выкопайте яму, насыпьте туда слой плодотворной почвы за несколько дней до посадки, чтобы грунт успел осесть. Глубину траншеи определяйте с таким расчетом, чтобы после помещения слоя плодотворной земли верхушка корней растения находилась на поверхности.
2. При перенесении саженца в посадочную канаву не убирайте землю с корней, дабы не причинять вред неокрепшему растению. Удобрения на этом этапе, как правило, не добавляют.
3. Засыпьте траншею земельной смесью (плодородная прослойка почвы + песок + дернина + торф), обильно полейте растение.
4. После осадки приствольного круга подсыпьте еще земли.
5. Несколько дней наблюдайте за тем, чтобы земля вокруг саженца не пересыхала.

Если вы желаете сделать из кустарников пузыреплодника плотную изгородь, высадите молодые растения в 2 полосы. На междурядья оставьте расстояние 40 см, пространство между растениями в пределах одной полосы должно равняться 45 см. В будущем изгородь формируется обрезкой на любой вкус.

Обратите внимание, как происходит посадка пузыреплодника – на фото изображена процедура перенесения саженцев на место их стационарного «обитания»:

От того, как вы будете ухаживать за пузыреплодником, зависит его здоровье и внешний вид. Растение неприхотливо, но это не означает, что после посадки о нем можно забыть. При необходимых условиях куст за сезон может вырасти до 40 см. На второй год после посадки только закладываются цветочные початки, из-за этого крайне важны обрезка и аккуратное формирование кроны. Растение морозостойкое, но при очень сильных холодах могут обмерзнуть верхушки веток. Следует позаботиться об утеплении на зиму.

Взгляните на фото – при правильной посадке и уходе пузыреплодник будет выглядеть так же шикарно:

Растение плохо переносит засуху. Периодичность увлажнения регулируется в зависимости от грунта, погоды, возраста насаждений. Если почва суглинистая и летом держится стабильно высокая температура, то кусты обильно поливают с середины весны до начала осени. При поливе вода не должна орошать листья или цветки, от этого у кустарника появляются ожоги. Рекомендуется поливать растение либо до, либо после захода солнца. Делают такие манипуляции 2 раза/неделю. Под взрослый куст идет около 40 л жидкости. Избегайте застоя воды!

Пузыреплодник славится тем, что практически не подвержен недугам и паразитарному повреждению. Очень редко проявляется хлороз листьев, связанный с тем, что растение испытывает дефицит микроэлементов в земле. Также хлороз может быть вызван вредителями, которые переносят вирусы. Именно поэтому кусты необходимо регулярно удобрять. Без надлежащей подкормки они могут вскоре погибнуть.

Удобряют насаждение дважды в год. Весной подкармливают азотсодержащими препаратами, питательными смесями (10 л воды + 1 ст. л. аммиачной селитры + 0,5 л коровяка). Перед наступлением холодов осенью удобряют комплексами минералов.

Растение проявляет все свои декоративные качества лишь тогда, когда постоянно получает рациональный уход.

Посмотрите на фото – пузыреплодник, обеспеченный заботой действительно выглядит потрясающе:

Как обрезать кустарник пузыреплодник

Санитарная стрижка предполагает удаление поломанных, поврежденных, приболевших веток. К ней прибегают весной. Формирующую обрезку пузыреплодника можно делать после цветения. Если вы хотите организовать опрятную живую изгородь, то нужно стричь растение несколько раз за вегетационный период. Первая стрижка производится до распускания почек. Когда и как обрезать пузыреплодник дальше, зависит от того, какую форму, параметры и направление вы хотите ему придать.

Взрослые кусты нуждаются и в омолаживающей стрижке (через каждые 6 лет). Оптимальное время для нее – ранняя весна, когда еще не наступил период формирования листвы. Допускается проведение процедуры осенью, после листопадного сезона. Старые, засохшие ветки удаляют до самого их основания, а остальные отсекают до места отхождения боковых побегов.

У экземпляров, которые растут свободно, крона напоминает фонтан. Чтобы куст был более широким, обрезают ветви на высоте 0,5 м. Нужно оставлять только самые сильные и здоровые элементы, тогда кустарник быстро обретет красивую форму.

Пузыреплодник в ландшафтном дизайне сада (с фото)

Некапризное, но очень симпатичное растение привлекает внимание коллекционеров и садоводов. Пузыреплодник в ландшафтном дизайне смотрится эффектно, броско, выгодно.

Добавит изюминку вашему саду куст пузыреплодника любого сорта – посмотрите на фото, какими интересными могут быть импровизации:

Если посадить рядом два сорта данного растения, они будут «играть» очень органично, оттеняя друг друга. Необходимо изучить особенности разных видов, в том числе свойства сезонной смены расцветки листьев. Если подобрать сорта правильно, облик участка преобразится до неузнаваемости.

Пузыреплодник отлично подходит для формирования естественного забора, так как безболезненно переносит частую стрижку. Изгороди легко придать практически любые очертания, которые вам по душе. Стоит помнить, что растение отличается массивностью, поэтому для небольших территорий больше подойдут карликовые формы. Кустарник гармонично сочетается с другими представителями флоры.

Взгляните на фото – пузыреплодник в ландшафтном дизайне сада смотрится весьма оригинально:

Красивые насаждения радуют глаз, пробуждают в душе светлые и добрые чувства. Пузыреплодник – вариант, который успешно выполняет эстетические функции, придает участкам особый шарм. Он с благодарностью откликается на малейшую заботу, не предоставляет никаких хлопот хозяевам.

Пузыреплодник: виды и сорта | Огородники

Красивые нежные кусты пузыреплодника выращиваются на наших территориях с ХІХ века. Растение относится к семейству Розовые и насчитывает всего 14 видов. В садоводстве популярны лишь два из них: пузыреплодник амурский и пузыреплодник калинолистный. Однако каждый вид имеет несколько сортов, которые отличаются друг от друга некоторыми характеристиками. Более подробнее об этом мы расскажем вам в этой статье.

Пузыреплодник Амурский

Эти кустарники можно встретить во флоре Китая и Дальнего Востока. Они вырастают до 3-х метров и имеют гладкие стебли. Старые кустарники определяются по ленточному отслоению коры на стволах. Листья среднего размера, лопастные, имеют сердцевидную форму, сверху зелёные, снизу светло-серые. Соцветия имеют форму щита, и состоит из 10-12 маленьких белых цветочков. Плоды в состоянии зрелости имеют красный цвет. Растение морозостойкое. Вид имеет два сорта: Нана и Ауреомаргината, которые относятся к желтолистным сортам.

• Ауреомаргината. Кустарники этого сорта характеризуются темно-зеленым рисунком на листьях. Листья сеченые, края ярко-салатовые, середина темная. Декоративный вид кустарника придает пикантности садовому участку. Высота кустов около 2-2,5 метра, ширина – 200 см. Цветение начинается в середине июня.
• Нана. Этот сорт относится к пузыреплоднику Аморскому, имеет листья темно-зеленого цвета, которые формируют компактную шапку, используется в сложных сочетаниях и сольных посадках. Высота кустарника достигает не более метра. Цветы белого окраса, собраны в рыхлые соцветия. Начало цветения в июне. После отцветания формируются семенные коробочки светло-салатового цвета.

Пузыреплодник калинолистный

Родиной этого растения является Среднеамериканские мешаные леса, так же его можно увидеть в долинах и возле рек. Характеризуется высоким ростом и зеленой кроной полусферического вида. Листья овальные, средняя доля вытянутая. Цветы белые или розовые с красными тычинками. Плоды после дозревания имеют красный цвет. Включает в себя желтолистые сорта Дартс Голд и Лютеус, и краснолистые сорта Диабло, Ред Барон, Саммер Вайн, Леди ин ред, Литл Дэвл, Литл Энджел, и Литл джокер.

• Дартс Голд. Кусты имеют очень красивый внешний вид, ярко-жёлтые листья и нежные белые цветы. Высота растения около 150 см, ширина взрослого куста такая же. Цветение начинается с июня и продолжается до двух недель. Цветы розовато-белые, собраны в полусферические соцветия пятилепестковые с желтыми серединками.
• Лютеус. Представители этого сорта отлично подходят для формирования живых изгородей. Ярко-желтые цвета листьев гармонично смотрятся на контрастных насаждениях. Цветы белого окраса. Высота куста около трех метров, ширина – 2,5 метра. Зацветает в начале лета. Хорошо переносит обрезку и редко болеет.

К сортам, которые имеют красные листья относятся:

• Диабло. Этот сорт отличается неприхотливостью в выращивании и подходит для начинающих садоводов и новичков. Он практически не требует ухода за собой. Листья красного цвета имеют глянцевый блеск. Растения, которые растут в полутенистых местах, имеют зеленые листья с сиреневатым оттенком. Внешний вид кустарника сильно напоминает кусты калины. Окрас равномерный, зависит от степени освещенности места. Цветы имеют светло-розовый тон, окружность около 1-1,54 мм, красные тычинки, середина цветка оранжевая. Цветы собраны в щитовидные соцветия, которые имеют диаметр от 6 до 8 см. Цветение начинается в конце июня и длится до 14 дней. По окончанию цветения формируются красные плоды, внутри которых к осени созревают семена.

• Ред Барон. Этот сорт часто используют для сольных и многоуровневых насаждений. Куст имеет полусферическую форму. Соцветия нежно-розового цвета, листья темно-красные. В высоту растение вырастает до двух метров и столько же в ширину. Зацветает в июне-июле.
• Саммер Вайн. Название сорта переводится как «летнее вино». Двухметровые растения имеют листья красного винного цвета, что придает ему очень декоративный вид. В тенистых местах листва приобретает зеленый оттенок. Цветы бело-розового цвета, собраны в кистевидные соцветия, истощает приятный аромат. Цветение начинается в начале лета и может продлиться до двух месяцев.
• Леди ин Ред — «Женщина в красном» — это нововыведенный сорт, который отличается гофрированными листьями красного или насыщенного бордового цвета. Высота кустарника около полутора метров, ширина 1-1,2 мм. Зацветает пышными бело-розовыми соцветиями в конце июня.
• Литл Девил — «Маленький дьявол» часто используют в контрастных композициях. Метровые кусты имеют темно-красные листья, отличаются нетребовательность к уходу и стойкостью к различным заболеваниям. Цветет в июне-июле. Хорошо переносит обрезку. Окрас соцветий – бело-розовый.

• Литл Энджел — «Маленький ангел» свое название этот сорт получил благодаря мелким бордовым листочкам и компактным размерам куста. Он вырастает до метра в высоту, до метра в ширину и зацветает в июне розоватыми соцветиями. Из-за маленьких размеров часто выращивается в контейнерах, горшках, становится украшением террас и балконов.
• Литл Джокер. Куст имеет вишневые листья и отличается высокой морозостойкостью. Цветы нежно-розового цвета. Растения невысокие – до метра в высоту, цветут в июне. Часто используются для выращивания в горшках или контейнерах как единичное украшение ландшафта.

Читайте: Как вырастить неприхотливый пузыреплодник

Присоединяйтесь к нашей группе в Facebook

Поехали в сад! Сорта пузыреплодника калинолистного

Род пузыреплодников насчитывает более десяти видов листопадных кустарников, дико произрастающих в Северной Америке и Северо-Восточной Азии. У нас наибольшее распространение получил пузыреплодник калинолистный и его сорта, отличающиеся размерами куста и окраской листьев и цветков.

‘Nanus’ (var. nanus) — кустарник до 1–1,5 м высотой, с компактной плотной кроной, зелеными листьями и белыми цветками. Используется в небольших садах, рокариях, низких живых изгородях.

‘Luteus’ (‘Aureus’) — 2,5–3 м высотой. Молодая листва желтая, через некоторое время становится желтовато-зеленой. Осенью листья снова желтеют. Цветки белые.

‘Dart’s Gold‘ — голландский гибрид сортов ‘Nanus‘ и ‘Luteus‘, с округлой кроной до 1,5 м в диаметре. На протяжении всего лета сохраняет желтую окраску листвы, приобретая лишь легкий зеленоватый оттенок. Осенью появляется и бронзовый цвет. Цветки белые.

‘Nugget‘ — американский гибрид ‘Nanus‘ и ‘Luteus‘. Высота 1,5–2 м, листва при распускании темно-желтая, затем светло-желтая, а позже становится лимонно-зеленой. Желтый цвет возвращается листве осенью, и тогда листья красиво контрастируют с коричневой корой. Цветки белые.

‘Diabolo’ (‘Monlo’) — один из самых эффектных сортов пузыреплодника калинолистного, родом из Германии, удостоен медалей садоводческих обществ. Высота 2–3 м, листья темно-пурпурные, цветки розовые, красиво контрастирующие с листвой, плоды ярко-красные.

‘Summer Wine’ (‘Seward’) — гибрид сортов ‘Nana‘ и ‘Diabolo‘. Высота 1,5–2 м, ветви длинные, изящно изогнутые. Цветки при распускании розовые.

‘Coppertina’™ (‘Mindia’) — гибрид сортов ‘Dart’s Gold‘ и ‘Diabolo‘ выведен французскими селекционерами. Высота 1,5–2,5 м, при распускании листва медно-оранжевого цвета, летом становится пурпурно-красной. Цветки белые, в бутонах розовые.

‘Center Glow’™ — американский гибрид сортов ‘Diabolo‘ и ‘Dart’s Gold‘. Высота 1,8–2 м, на фоне листвы темно-пурпурного цвета выделяются молодые листочки такого же оттенка, но с ярко-желтыми серединками. Цветки кремово-белые.

‘Ledy in Red’ (‘Tuilad’) — кустарник 1–1,5 м высотой, родина сорта – Великобритания. Листва ярко-красная при распускании, затем немного темнеет. Цветки очень нежные, розово-белые.

Лучшие сайты на тему: Сорта пузыреплодника калинолистного

1. Пузыреплодник калинолистный – Сорта и обрезка | Osadovod …

   Наибольшую любовь у садоводов пузыреплодник калинолистный … Самый распространенный и заслуженно обожаемый сорт — это, конечно, Диоболо …

2. Пузыреплодник – сорта пузыреплодника, плоды … — AyZdorov. ru

   В странах Европы наибольшее распространение получил пузыреплодник калинолистный. Он богат своими сортами и разнообразием внешнего вида.

3. Пузыреплодник — декоративный и неприхотливый / Кустарники …

   25 июл 2013 … К таким растениям относится и пузыреплодник калинолистный. … Так как большинство сортов пузыреплодника калинолистного …

4. Пузыреплодник: багрец и золото в одном кустарнике

   Сформированный Пузыреплодник Диаболо … У пузыреплодника калинолистного есть два сорта с окрашенными листьями, особенно ценимых …

5. Пузыреплодник калинолистный | Марина Сахнова

   30 ноя 2011 … Пузыреплодник калинолистный (Physocarpus opulifolius) имеет несколько сортов, и все их, условно, можно объединить в две большие …

6. Сорта пузыреплодника калинолистного на Supersadovnik.ru

   Род пузыреплодников насчитывает более десяти видов листопадных кустарников, дико произрастающих в Северной Америке и Северо- Восточной …

7. пузыреплодник калинолистный — Самое интересное в блогах

   Наиболее эффективен сорт Диаболо ( Physocarpus Diabolo) — на фоне листвы цвета … Пузыреплодник калинолистный или Спирея калинолистная.

8. Энциклопедия растений:

   Пузыреплодник — Pro-landshaft.ru

   Пузыреплодник калинолистный, или спирея калинолистная (P. opulifolius). Широкий … Сорта пузыреплодника калинолистного. Пузыреплодник …

9. Пузыреплодник — Энциклопедия декоративных садовых растений

   Известен сорт ‘Luteus’ (Лутеус) с ярко-желтыми листьями летом и бронзовыми в осенней … Пузыреплодник калинолистный — Ph. opulifolius (L. ) Maxim.

10. Сорта пузыреплодника — Саженцы в Петербурге.

    Сорта пузыреплодника, описание фотографии, саженцы. … Основное направление селекции пузыреплодника калинолистного направлено на …

Другие статьи из этой категории

посадка и уход в открытом грунте, виды и сорта, фото

Размножение пузыреплодника отводками

Закладка отводков как способ размножения пузыреплодника, дает очень неплохие результаты. Для отводка необходимо выбрать здоровый и сильный побег, направленный наружу. С него удаляются практически все листья, оставляют только те, что на верхушке. Затем подготовленный побег укладываем в канавку (глубина канавки до 15 см) и пришпиливаем к земле (для этой цели отлично подойдут деревянные скобы).

Эту процедуру надо проводить в начале весеннего сезона, чтобы за оставшееся время до зимы отводок успел укорениться

Важно вовремя увлажнять почву в засушливые периоды – без увлажнения неокрепшие корни отводка могут погибнуть. В конце осеннего сезона молодые кусты пузыреплодника отделяются от материнского растения и укрываются на зиму

Размножение пузыреплодника

Размножение растения происходит стандартными путями:

1. Деление кустарника.
2. Формирование отводков.
3. Черенкование.
4. Размножение семенами.

Деление кустарника

Пузыреплодник: посадка и уход — деление куста

Этот способ используется в начале весны и осенью. Процесс начинается с выкапывания отдельного куста и обследования его корневой системы. Если она здорова, то её разрезают на сегменты и сразу же высаживают. Из каждой отдельной части можно получить самостоятельный и здоровый куст.

Формирование отводов

При использовании методики создания отводов можно достигать достаточно хороших результатов. Закладка отводов позволяет садовнику подобрать оптимальный побег, способный достигнуть желаемых результатов. При выборе материала для формирования отводка необходимо тщательно выбирать из наиболее здоровых ветвей. Оптимальным решением становятся отводки, которые направленны наружу.

После окончательного выбора необходимо полностью удалить с материала всю имеющуюся листву — оставить допускается только те элементы, которые располагаются на самой верхушке. Подготовленный таким образом побег помещается в специальную канавку, длиной до 15 см, и прикрепляется к земле. Для пришпиливания отличным решением становятся простые деревянные скобы.

Оптимальными временными рамками для проведения таких работ являются первые недели весны. В это время в ветвях начинается движение сока, а к зиме молодой отводок окончательно укоренится и продолжает свое развитие. От садовода потребуется своевременно увлажнять почву, особенно во время кратковременной засухи. Молодое растение без стабильной корневой системы может испытать серьезные проблемы на первых этапах, а отсутствие достаточного объема влаги негативно скажется в будущем. В результате правильного наблюдения за растением к концу осени кустарник полностью отделяется от материнского растения и может готовиться к холодному периоду.

Черенкование

Если в качестве методики для создания нового растения взято черенкование, то при выборе веточки необходимо отталкиваться от зеленых побегов, которые возникли в текущем году. Изолированные побеги (черенки) необходимо замочить в специально подготовленном стимуляторе развития корневой системы (средство, разведенное в воде в строгой пропорции). Это химическое вещество поможет новому растению сформировать зачатки собственной корневой системы. После прохождения необходимой подготовки черенки высаживаются в смесь песка с торфом. Альтернативным решением при выборе грунта может стать речной песок, прошедший минимальную фильтрацию.

Пузыреплодник: посадка и уход — черенкование

После завершения процесса посадки нужно полить подготовленные черенки и укрыть их специальным полиэтиленом. Если количество подготовленных отростков невелико, то можно применить пластиковые бутылки — каждый черенок изолируется от холода по отдельности с помощью бутылок с обрезанными горлышками.

Последующий обязательный уход за вновь сформированными растения заключается в периодическом увлажнении пузыреплодника и систематическом проветривании, чтобы предотвратить запаривания и возникновение плесени. При точном соблюдении правил по обращению с растением уже весной его можно пересаживать в необходимое место в открытый грунт.

Размножение семенами

При использовании данного метода следует помнить, что из семян не всегда получается вырастить куст с аналогичными характеристиками, как у «куста-родителя». Семена должны быть собраны в осенний период. Следует обязательно проводить стратификацию для подготовки к выживанию в условиях холода. Лучше всего высевать растения весной.

Пузыреплодник спирея

В народе пузыреплодник спирею называют «таволгой». Это высокое растение, которое достигает трех метров в высоту. Трех- или четырехлопастные листья пузыреплодника спиреи имеют необыкновенную схожесть с листьями калины. Раскидистые ветви – длинные, достигающие земли, спадающие вниз. Если куст не подстригать, то он сможет закрыть большое пространство, поэтому часто это растение сажают перед заборами частных домов либо во дворах с высотными домами.

Как и у всех пузыреплодников, кора спиреи способна отслаиваться и имеет характерный коричнево-грязный цвет. Растение начинает цвести в июне множеством щитовидных соцветий бело-розового цвета. Цветет данный вид около 3,5 недели. Плоды пузыреплодника спиреи меняют свой окрас от зеленого до красного, а затем высыхают. После высыхания плоды высыпаются на землю.

Секреты успеха

Пузыреплодник отличается редкой неприхотливостью. Хотя кустарник предпочитает суглинки, но прекрасно приспосабливается почти ко всем видам почв. Исключение составляют щелочные грунты, в этих случаях рекомендуется подкислить землю. Еще одно условие для хорошего развития растения — достаточно глубокое залегание грунтовых вод. Кустарник плохо переносит переувлажнение грунта. Если участок располагается в зоне понижения естественного ландшафта (пойменная зона, близость ручьев, родников и т.д.), то рекомендуется посадка на искуственно сформированный холм высотой не менее 30-50 см.

Молодым растениям требуются регулярные поливы, взрослые экземпляры достаточно засухоустойчивы. Поливать растения рекомендуется утром или вечером, не допуская попадания воды на листья и цветы. 

Подкармливают кустарники дважды в год. Весной перед цветением вносят смесь коровяка (0.5 л.), аммиачной селитры (1 ст. л.) и мочевины (1 ст. л), растворенную в 10 л. воды. Осенью удобряют золой в количестве около 100–200 г/м2 или монофосфатом калия. Можно применять и готовые смеси с пометкой “осенние”.

Весенняя санитарная обрезка Пузыреплодника состоит в удалении подмерзших и поломанных ветвей. Формирующая зависит от предпочтений владельцев. Для создания широкого куста, все побеги обрезают на высоте в 50 см. С помощью небольшого укорачивания самых крепких стволиков и обрезки у основания тонких, можно придать растению форму фонтана. Раз в шесть лет требуется омолаживающая обрезка “на пень”. Срезы каждый раз обрабатывают садовым варом.

Если понадобится пересадить взрослое растение, то делать это надо весной (до распускания почек) или осенью (после листопада). Пузыреплодник обрезают до 20–30 см., выкапывают вместе с комом земли и переваливают в подготовленную яму.

Общие сведения, особенности и сорта пузыреплодника

Пузыреплодник получил необычное название из-за плодов в форме пузыря. Растение преимущественно представлено кустарниками. Особенности внешнего вида и общие характеристики:

• отдел покрытосеменные;
• поникающие ветки;
• цвет коры – буровато-коричневый, древесина белая;
• средняя высота не более трех метров;
• склонен к разрастанию в ширину, на расстояние более 4 м;
• быстрый рост;
• округло яйцевидная листва зеленого окраса, с гладкой и махровой поверхностью;
• цвет плодов в зрелом состоянии – красный;
• окрас цветов преимущественно белый или розовый;
• период цветения до 25 дней;
• цветики диаметром в 15 мм собраны в соцветия;
• холодостойкое, легко переносит зимний период;
• не прихотлив в уходе;
• не требователен к солнечному свету, составу почвы;
• легко переносит засуху.

Главным преимущество растения стала неприхотливость. Оно требует минимального ухода и радует владельца около 25 лет. На сегодняшний день насчитывается 14 видов растения. Большая часть получена естественным путем, но есть и гибриды.

Сорт Diabolo

Сорт diabolo

Диабло считается самым распространенным представителем семейства и выделяется яркостью листвы. В период цветение сорт напоминает рябину. Внешний вид листков отличается бордовой каймой на заостренных концах. Зацветает куст в начале лета – июне месяце. Кустарник начинают покрывать белые гроздья шарообразной формы, продолжительность цветения – две недели. Розовые тычинки добавляют ощущение легкости и пушистости. Стволы редко превышают толщины в 1 м. Как и большинство представителей семейства сорт Диабло стрессоустойчив легко переносит жару и холод. Плоды куста обличаются фиолетово-красным окрасом в зрелом состоянии.

Сорт Nanws

Кустарник выделяется среди прочих миниатюрными размерами. Низкорослое растение не превышает максимальной высоты в 1,5 метра. Листва соразмерна сорту и не имеет оттенков. Редко используют для декоративных целей, чаще встречается в природной среде.

Сорт Summer Wine

Сорт summer wine

Представитель семейства Розовые был создан благодаря работе селекционеров и скрещиванию кустарника Диабло и Нанус. Гибрид выделяется насыщенным багряным цветом листвы и компактностью. Высота растения редко превышает два метра. Удобство формирования сделало его частым гостям на садово-дачных участках. Ветки податливые, гибкие, длиной до 1,5 метров. Весной куст усыпан цветками розового цвета. Стрессоустойчивость позволяет культивировать Саммер Вайн в разных климатических зонах.

Сорт Red Baron

Сорт red baron

Данный сорт достигает минимальной высоты в 1,5 метра. Куст усеян большим количеством гофрированной листвы темно-красного цвета. Диаметр кроны в среднем два метра, размер скромный. Молодые отростки, завершение кроны, отличаются красным цветом. Цветовая палитра листвы зависит от контакта с солнцем. При частом контакте с ним листва приобретает красный цвет, в тенистой зоне они зеленый с оттенком красного. Растение выделяется быстрым ростом. При выращивании в декоративных целях необходимо регулярно проводить обрезку кроны.

Сорт Luteus

Сорт luteus

Светолюбивое растение достигает максимальной высоты трех метров. Сорт отличается желтоватым окрасом листвы. Многие садоводы выбирают растения для ландшафтного дизайна из-за правильной шарообразной формы кроны. Растение хорошо переносит неблагоприятные погодные условия и поможет поднять настроение владельцам в пасмурный день.

Сорт Dart’s Gold

Сорт dart’s gold

Быстрорастущее растение часто выбирают для украшения дачного участка. Хорошо подходит для городской среды из-за устойчивости к выхлопным газам и загрязнениям. Кустарник сохраняет желтый окрас в течение всего летнего периода. Часто используется для создания естественных изгородей, которые получаются плотными и яркими. Цветы кустарника имеют белый окрас и собираются в щитки размером до пяти сантиметров.

Сорт Амурский

Сорт амурский

В естественной среде встречается на горных склонах одиночными, небольшими группами или по отдельным кустам. Сорт относится к заповедным растениям, охраняемых государством. Амурский пузыреплодник отличается шелушащейся корой во взрослом состоянии. Длина листвы зелено-серого цвета достигает 10 сантиметром. В период цветения белые цветы смотрятся эффектно в небольших соцветиях с диаметром отдельного цветка в 1,5 сантиметра. Продолжительность цветения в среднем составляет 20 дней.

Удобрение и подкормка кустарника

Подкармливают пузыреплодник дважды за сезон. Весной потребуются удобрения, содержащие повышенную дозу азота для роста вегетативной массы. Делать это нужно в момент распускания почек. Применяют настой коровяка или птичьего помёта из расчёта пол литра на ведро воды. Осенью применяют раствор нитроаммофоски примерно спичечный коробок удобрения на ведро воды. Взрослым кустам пузыреплодника, достигшим 10 и более лет, увеличивают дозу подкормки в половину.

Подкармливайте культуру 2 раза в год

Пузыреплодник прекрасно отзывается на мульчирование приствольного круга органическими материалами. Мульча создаёт благоприятные условия для корней растения: почва не перегревается, структурируется и дышит, к минимуму сводятся скачки влажности. Мульча избавит от постоянного рыхления и прополки.

Описание пузыреплодника Ред Барон

Пузыреплодник Ред Барон был привезен из Северной Америки, где он чаще всего произрастает на речных берегах. Куст высокорослый, относится к калинолистному виду. Его пятилопастные листья очень напоминают калиновые листья. Период цветения начинается в июне-июле. В начале сентября вызревают плоды.

Описание пузыреплодника калинолистного Ред Барон

Высота	около 2 м
Форма куста	округлая, раскидистая
Ветви	дугообразные
Цветы	бело-розовые с красной тычинкой, собранные в соцветия, полушарообразной, щитковидной формы
Плоды	сборные, красные вздутые листовки
Листья	5-7 лопастные, 7-10 см в диаметре, округло-эллиптической формы, темно-красного цвета, который осенью становиться бронзовым, в тени листва зеленая, с красноватым оттенком

Описание пузыреплодника Ред барон

Пузыреплодник известен многим своим внешним видом, однако, далеко не все знают его точное название. Приведенное описание с основными характеристиками растения подчеркивает его декоративность.

Куст обладает кроной в форме полушара, объем которой может достигать 2 м. Побеги прямые или изгибающиеся дугой, их количество зависит от места посадки, растения, растущие на солнечных участках гуще. Кора имеет коричневый цвет с красными оттенками.

Листья с гладкой поверхностью расположены очередно, состоят из 3-5 лопастей, доходят по длине до 7 см. Форма, схожа с зеленью калины, вытянутая с небольшой гофрировкой и ярко выраженными жилками. Название «ред», переводимое с английского как красный, куст получил благодаря отличительной черте: цвету листовых пластин. Оттенки становятся сочнее и ярче под воздействием солнечных лучей, при посадке в тени потеряют насыщенный пурпурный колер, а нижняя часть листа окрасится в зеленый. В осенний период приобретают бронзовый оттенок.

Цветы мелкие, бледно-розовые или белые, с 5 лепестками, собраны в щитках диаметром 5 см. Формирование и раскрытие бутонов происходит с конца мая и до середины июня.

Плоды декоративные, представляют собой сложную листовку, состоящую из вздутых простых фиолетовых и красных оттенков, с блестящей и твердой кожурой, меняющие цвет по мере вызревания и засыхания от розовых оттенков до бурых.

Сорта пузыреплодника

Пузыреплодник получил своё название из-за специфического вида плодов, они напоминают пузырь, расширенные в середине, в верхней же части похожие на кисть. В своем роду он насчитывает четырнадцать видов. Всего сортов несколько сотен. Они получены естественным путем и при гибридном размножении. Основные различия состоят в высоте кустарника и цвете его листьев. Тринадцать сортов родиной из северной Америки. А его неприхотливость позволила распространиться по всему свету.

Сорт Диабло

Пузыреплодник калинолистный сорт «Диабло»

Получившим наибольшее распространение является растение под названием Диаболо (Diabolo), его стволы редко достигают толщину больше одного сантиметра. Листочки имеют острые концы бордового окраса, которые осенью становятся желтыми. Он напоминает цветками русскую рябину, только цветет в июне и июле месяцах.

Низкорослостью отличается сорт кустарника Нанус (Nanws), он редко вырастает в высоту более полутора метров. Его листья мелкие и не имеют каких-либо оттенков.

От скрещивания Нануса и Диаболо, получился вид под названием Летнее вино (Summer wine). В размерной таблице растение находится посередине между Нанусом и Диаболо, но имеет более толстые стволы и по внешнему виду напоминает фейерверк, взмывая и одновременно распадаясь на множество мелких брызг. Цветы его белого цвета с розоватым оттенком, они располагаются по длине каждой из веточек. Кора, как и листья по окраске стремятся к темному бордо. Тем не менее растение при всем своем летнем виде отлично переносит заморозки.

Сорт Лютеус

Из всех сортов своей модной окраской выделяется Лютеус (Luteus).

Начало цветения ознаменовывается желтым окрасом листьев, который к окончанию летнего периода становится насыщено зеленым. Пузыреплодник Лютеус, своей шаровидной формой, послужит отличным украшением для любой усадьбы.

Растение прекрасно перенесет условия города, не боится ни света ни тени.

Сорт Золотые стрелы

Другая разновидность – это Золотые стрелы (Dart’s Gold) свое название растение получило совершенно заслуженно из-за своих листьев, меняющих цвет с ярко выраженного желтого, на насыщенный апельсиновый. Чего нельзя сказать о цветах, которые белые или кремовые и ни чем не выделяются.

Diable D’or был получен из Дьявола и Золотых стрел. От первого он приобрел достаточно высокий рост, от последнего окрас листьев, только не желтый, а с оттенком меди, который переходит в красноту. Его ещё называют пурпурным, что подтверждают плоды, становясь из салатовых бордовыми.

Сорт Красный Барон

Пузыреплодник Red Baron

Красный барон (Red Baron), пожалуй, самый распространенный сорт пузыреплодника. Он легко приживается в любом климате и на практически на любой почве. Чем заслужил почитание поклонников живых изгородей. Его рост стабильно равняется одному метру, но широкие листья длиной около восьми сантиметров скроют любую территорию от любопытных глаз. Один из самых компактных видов кустарника. Пузыреплодник Diablo лучше всего переносит размножение методом черенкования.

Nagget – гибридный вид, со стремящийся вверх фигурой, по форме, напоминающую бутылку. Тоже меняющий цвет листьев в зависимости от сезона.

Сорт Капертинна (Coppertina) отличается бутонами розового цвета, что не встречается у остальных сортов.

Aurea, пузыреплодник Аурея, сразу же начинает свой рост желтыми цветами с лимонными оттенком. Кустарник позволит создать оригинальный ландшафтный дизайн.

Начав свое мировое турне, пузыреплодник стал насчитывать более 300 сортов.

Размножение

Этот кустарник размножается несколькими способами

У каждого из них есть свои особенности, на которые нужно обратить внимание

Размножение семенами

Плоды пузыреплодника с семенами

Семена пузыреплодника дают хорошую всхожесть, однако при таком способе размножения нет гарантии сохранения всех сортовых особенностей. Велика вероятность, что у кустов, выращенных из семян, листья будут не красного, а зеленого цвета.

По этой причине размножение семенами применяется крайне редко. Чтобы сохранить оригинальный окрас листьев, размножать пузыреплодник следует вегетативным способом.

Черенкование

Размножение черенками

Это самый простой и достаточно популярный метод, который дает быстрые и традиционно хорошие результаты. Для размножения черенкованием используют зеленые побеги, которые нарезают длиной 10-20 см

Важно, чтобы на каждом черенке было по несколько точек роста

Черенкование проводят весной или в начале лета, до цветения кустарника:

1Черенки отделяют, с нижней половины побега листья удаляют, а с верхней – наполовину укорачивают. Можно также поцарапать кожицу у основания черенков: считается, что в этих местах корешки образуются быстрее.

2Основания полученных черенков замачивают в любом из стимуляторов корнеобразования. Этот этап не является обязательным, поскольку пузыреплодник может успешно укореняться и без стимуляции.

3Побеги высаживают в речной песок или субстрат, состоящий из песка с торфом.

4После посадки черенки следует полить и укрыть полиэтиленовой пленкой.

5Последующий уход до начала зимы заключается в проветривании и систематическом увлажнении. Когда начнут появляться новые листья и побеги, что свидетельствует об успешном укоренении, пленку можно будет снять.

6На зиму укорененные черенки следует укрыть, лучше всего еловым лапником. Основания стеблей мульчируют листвой, торфом или землей.

7Весной молодую поросль можно будет высадить на постоянное место.

Деление куста

Молодые кусты растения

Этот способ менее популярен, чем черенкование, поскольку требует физических усилий, а число молодых растений, полученных в результате деления куста, очень ограничено. Один хорошо развитый взрослый куст можно разделить на 4-6 частей.

Следует проводить деление куста ранней весной, до наступления периода активного роста.

Возможно поведение этой процедуры осенью, после того, как кустарник отцветет, а до морозов останется минимум полтора месяца:

1Под деленки готовят посадочные ямы, а стебли обрезают на уровне 60-70 см. Это пойдет пузыреплоднику только на пользу и будет дополнительным стимулом для появления новых побегов.

2Растение аккуратно выкапывают, полностью извлекая из грунта корневую систему.

3Куст делят таким образом, чтобы каждой части досталось хорошее корневище и одна мощная здоровая ветка длиной более 20 см.

4Отделенные части нужно высадить на новое место как можно быстрее, чтобы не допустить пересыхания корней.

5После этого растения поливают и мульчируют почву, чтобы избежать образования корки.

6В первый год отделенные молодые растения нуждаются в укрытии на зиму.

Размножение отводками

Это достаточно распространенный способ размножения. Проводят такую процедуру в апреле, после того как на побегах появятся первые листочки, чтобы за период вегетации отводок успел укорениться.

Порядок размножения отводками таков:

1С побега удаляют практически все листья, кроме тех, которые находятся на самой верхушке.

2В земле под веткой делают канавку глубиной до 10-15 см.

3Не отрезая подготовленный побег с куста, укладывают его в канавку, пришпиливают к земле и засыпают плодородным грунтом

Кончик побега необходимо оставить открытым, не засыпая землей.

4Важно поливать почву в чересчур засушливые периоды, поскольку без увлажнения еще не совсем окрепшие корни могут погибнуть.

5В конце осени молодые укоренившиеся кусты отделяют от взрослого растения. На зиму их следует укрыть еловым лапником.

6Такая закладка отводков дает неплохие результаты, если для них выбрать сильные и здоровые побеги, направленные наружу.

Вейгела: описание, виды и сорта, посадка в открытый грунт и правильный уход за растением (60 Фото & Видео) +Отзывы

Пузыреплодник калинолистный: условия выращивания и уход

Пузыреплодник калинолистный – очень неприхотливое растение. Он спокойно мирится с любыми типами почв: и со слабокислыми, и со слабощелочными, с бедными песчаными и тяжёлыми глинистыми. Вот только чего он не переносит, так это длительного застоя воды в корнях.

И хотя у себя на родине в природных условиях он растёт по берегам рек, в саду с сортовыми растениями экспериментировать не стоит: посадочная яма должна иметь хороший дренаж, а растение, хотя оно и засухоустойчивое, должно получать полив.

Неплохо, особенно первое время, рыхлить приствольный круг, позволяя корням дышать, а лучше, конечно, мульчировать толстым слоем каких-то растительных материалов (солома, сено, хвоя, компост и т.д.).

Одно из важных достоинств пузыреплодника калинолистного – его высокая морозостойкость и устойчивость к болезням и вредителям. Во всяком случае, у меня его никто «не ест», он ничем не болел, и никогда на зиму я его не укрывал.

А вот скорость роста при этом очень хорошая, скажем, за год прибавить в высоту 80-90 см для него является нормальным. Понятно, что для такой скорости вам понадобится умение управляться с секатором или садовыми ножницами. Ведь только ухоженный, правильно обрезанный куст станет настоящим украшением вашего участка.

Обрезают его примерно в конце мая – начале лета, после окончания цветения (цветёт на прошлогодних побегах), удаляя 1/3, а то и половину длины побега. Удаляют всё лишнее и загущающее, стоит иногда удалять полностью слишком старые ветви.

Кстати, пузыреплодник калинолистный, особенно сорта с мелкими листочками – это отличный вариант для топиарных форм. Из него можно делать не просто шары и плотные изгороди-бордюры, но и делать их разноцветными, подбирая и умело комбинируя подходящие сорта. А их на сегодня выведено более трёх десятков.

Правда, есть тут один нюанс, который стоит учитывать. Хотя пузыреплодник калинолистный и может расти в частичном затенении, но для проявления всех сортовых особенностей, в первую очередь – яркого и чистого цвета листвы, сажать его нужно на открытом, хорошо освещённом месте. При затенении, вместо ярко жёлтого, вы получите салатовый, а вместо красного – неприятный бурый оттенок.

Иногда, как и у многих цветных и вариегатных форм растений, в кроне пузыреплодника может «выстрелить» чисто зелёный побег (генетическая память). Такие побеги необходимо сразу и полностью удалять, поскольку есть опасность, что растение постепенно полностью позеленеет.

Пузыреплодник калинолистный может за год прибавить в высоту 80-90 см.

Биологическое описание

Пузыреплодник – декоративный листопадный кустарник, который относится к семейству Розовые. Род Пузыреплодник насчитывает более 10 видов, из которых наибольшее распространение и популярность получил пузыреплодник калинолистный. В высоту кустарник растет от 1 до 3 метров.

Пузыреплодник используется как в одиночных, так и в групповых посадках, а также для создания живых изгородей и озеленения улиц, скверов, парковых зон. Родина этого растения – Восточная Азия и Северная Америка. В США и Канаде он растет в диком виде в смешанных лесах, долинах и по берегам рек.

Описание пузыреплодника:

• Кора бурого или коричневого цвета. С возрастом она имеет свойство отслаиваться
• Листья яйцевидной или эллиптической формы, небольшого размера, примерно 4-10 см длиной. Края листьев пильчато-зубчатые. С верхней стороны листовые пластины имеют темный и насыщенный оттенок, а с нижней стороны они окрашены в более светлые тона
• Цветки белые или розовые, собранные в выпуклые щитковидные соцветия. Зацветает кустарник в июне-июле и цветет в течение двух-трех недель
• Плоды представляют собой миниатюрные пузыри-листовки, собранные в щитки

Необычная форма плодов и дала растению такое непривычное название – пузыреплодник. На латыни оно звучит как Physocarpus. Это название произошло от двух греческих слов: physo, что означает «пузырь» и carpos, что переводится как «плод».

Правила ухода

Сирень довольно зимостойка (выносит морозы до –30 ºС) и нетребовательна к почвам. Но все же предпочитает серые лесные суглинки и черноземы. Абсолютно не выносит кислых почв и близкое стояние грунтовых вод.

Она светолюбива, хотя может расти и в полутени, но при этом не так обильно цветет. Великолепно переносит городские условия, формовку и обрезку кроны, пересадку практически в любое время года.

Если у сирени не срезаны все цветущие ветки, то после цветения во избежание образования семян необходимо удалить отцветшие соцветия, что будет способствовать образованию молодых побегов, которые обеспечат обильное цветение на будущий год.

У привитых кустов систематически удаляют дикую поросль.

Размножают сирень семенами (в основном дикорастущие виды), прививкой, отводками, корневой порослью, особо ценные сорта – зелеными черенками, при этом поросль тоже будет сортовая.

В групповых посадках выдерживают расстояние между кустами 2,5–3 м.

Сорта сирени, привитые на подвое, для уменьшения количества поросли сажают так, чтобы корневая шейка была на 3–4 см выше уровня почвы, а у всех остальных видов она должна быть на уровне почвы.

В посадочную яму добавляют 15–20 кг перегноя или компоста и 200–300 г древесной золы, перемешав ее с садовой землей и песком, оптимальная кислотность почвы рН 6,6–7,5.

Лучшее комплексное удобрение для сирени – зола, которую разводят из расчета 200 г на 10 л воды.

Поливают в период цветения и интенсивного роста, во второй половине лета – только при засухе.

Как размножить пузыреплодник

Особо известно размножение пузыреплодника черенками до начала цветения насаждения. Для такого употребляют юные зеленые отростки текущего года размером 10–15 см. Нижний срез на черенке выполняют чуть ниже почки и под углом 45 градусов. Листочки убирают, сохраняют только два наиболее верхних и при этом сокращают их наполовину.

Черенки устанавливают на сутки в емкость с водой, в какую присоединяют катализатор корнеобразования (Корневин, Гетероауксин). После черенки сажают на грядку-школку в смесь песка и торфа либо укореняют в домашних условиях в контейнере. Тару прикрывают пленкой либо пластмассовой крышкой, иногда выветривают и увлажняют почву. Весной черенки сажают на стабильное место.

Итак, черенкование пузыреплодника не представляет затруднений. Но если вы желаете затратить еще меньше усилий, в таком случае куст возможно размножить при помощи отводок.

Весной подбирают крепкий и здоровый побег, обрывают листья (сохраняют лишь макушку), кладут в предварительно выкопанную ямку (глубиной 10–15 см) и пришпиливают к почве. Около вбивают деревянный колышек и связывают к нему верхушку отведенного побега. Землю в месте отводки постоянно увлажняют, а на последующий год ранней весной, возникнувший юный кустик пикируют на стабильное место в саду.

Ещё знаменит подобный метод копирования пузыреплодника, как деление куста. Весной либо в осеннее время кустик раскапывают и делят на пару частей, любая из каких обязана иметь пару отростков и мочку корней. Деленки сразу же усаживают, чтобы их корни не успели высохнуть.

Пузыреплодник размножают и семенами, какие высеивают весной либо осенью (непременно после стратификации). Но это весьма сложный процесс. Да и сортовые кустарники подобным методом развести не удастся: они не сохранят характеристики материнского растения.

Нетребовательный пузыреплодник преобразит ваш сад с весны до поздней осени. У куста красивые и листья, и соцветия, и плоды. Отведите для него место на дачном участке — и эффектный кустарник вас не разочарует!

Пузыреплодник зимой

Подготовка к зиме

Осенью пузыреплодник удивительно красив, когда однотонная листва начинает пестреть осенними красками. Пузыреплодник достаточно морозостойкое растение, и обычно зимой на взрослых кустах замерзают только молодые невызревшие веточки, однако укоренившиеся к осени черенки пузыреплодника, как и молодые кустики, на зиму укрывают.

Зимовка пузыреплодника

Как укрывать пузыреплодник, если вы ожидаете морозной зимы? Осторожно стяните куст шпагатом и накройте его конусом из рубероида. Можно неплотно обернуть куст лутрасилом

Но предварительно почву вокруг куста нужно замульчировать слоем торфа толщиной 5-8 см. Молоденькие кустики после обрезки и мульчирования приствольного круга лучше укрыть лапником.

Презентабельный вид с весны до осени

Пузыреплодник – кустарник семейства Розовых, относится к листопадному роду растений. В зависимости от сорта размер взрослого куста варьируется от 1,5 до 3 м в высоту. Растение имеет шарообразную крону, длинные (до 2 м) плетевидные ветви, мелкую листву насыщенного цвета. В период цветения выпускает большое количество зонтичных соцветий белого либо розового оттенка. Цветы имеют густой медовый аромат. Появляются они в июне на четвертом году роста, продолжительность благоухания 3 недели.

Соцветия и плоды

Плоды называют листовками, они несколько вздуты, после созревания меняют окраску с зеленой на красновато-розовую. Если взять гроздь плодов в ладонь и сжать, раздастся легкое потрескивание. Осенью листья изменяют окрас в зависимости от сорта на фиолетовый, желтый либо бордовый. Благодаря стремительно быстрому разрастанию и пластичности ветвей пузыреплодник активно применяется для формирования живых изгородей и растительных композиций.

Отличительными особенностями являются:

• устойчивость к засухе и морозам;
• отзывчивость на обрезку, пересадку;
• быстрый рост в открытом грунте;
• приживаемость в затененных зонах;
• уживчивость практически на любых почвах;
• редкая поражаемость болезнями и вредителями.

Прочие особенности пузыреплодника зависят от того, к какому виду он принадлежит.

сорта и особенности — sdelayzabor.ru

Пузыреплодник калинолистный давно и успешно используется в ландшафтном дизайне. Европейские селекционеры выращивают новые сорта этого кустарника, которые отличаются неприхотливостью и удивительной декоративностью. Среди всего разнообразия праздничным нарядом отличаются разновидности с листвой, окрашенной разными оттенками красного. Некоторые из них получили заслуженную премию английского Королевского общества садоводов, которая присуждается растениям с особенно выраженными декоративными свойствами и неприхотливостью в уходе и размножении.

Любопытные факты

Краснолистные сорта пузыреплодника предпочитают солнечные открытые места. Хорошо растут и развиваются они также в тени, но яркая листва при этом теряет свою индивидуальность. От недостатка солнечного света она становится зеленой и приобретает обыденный внешний вид.

Специалисты рекомендуют размножать пузыреплодник с красной листвой одним из следующих способов: делением куста, черенкованием, отводками. Хорошую всхожесть дают и семена. Но вряд ли саженцы, выращенные таким способом, обретут все сортовые особенности. С большой долей вероятности их листья будут зелеными, а не красными.

Сорта пузыреплодника отличаются не только цветом листьев. Разновидности, имеющие красную листву, во время цветения покрываются россыпью розовых соцветий, что добавляет декоративности кустарникам.

Сорта с красными листьями

Краснолистные кустарники пузыреплодника разнообразны по форме куста и оттенкам листвы. Наибольшую популярность приобрели следующие сорта:

Diabolo (Диаболо)

Пузыреплодник сорт Диаболо

Могущественные кустарники этого сорта пузыреплодника, если пустить их рост на самотек, могут достигать в высоту 3,5 метров, а в ширину – 2 метров. Несмотря на то, что ветви у растения тонкие, не превышающие 1 сантиметра в диаметре, они отличаются высокой плотностью посадки листвы. Множество листиков темно-бордового цвета имеют эллиптическую форму. Глядя на них, кажется, что они устремлены своими заостренными кончиками исключительно в сторону солнца. Нарядная листва осенью меняет свой цвет на желтый, не менее праздничный.

Summer Wine (Саммер вайн)

Пузыреплодник сорт summer wine

Кустарник с раскидистыми ветвями покрывает яркая листва, своим цветом напоминающая красное крепленое вино. Форма куста и цвет листьев создают необыкновенный эффект. Со стороны они напоминают картину винных брызг или праздничного салюта. Ветви растения достаточно крепкие, в диаметре достигают 1,5 – 2 сантиметра. Кора расслаивающаяся, коричневая. Цветет этот сорт пузыреплодника весной, плотно покрываясь бело-розовыми соцветиями. Сорт хорошо переносит сильные морозы, поэтому на территории России его можно выращивать практически во всех регионах.

Red Baron (Ред Барон)

Пузыреплодник ред барон

Этот сорт пузыреплодника имеет красивую полушаровидную форму кроны. Высота и ширина взрослого растения практически одинакова: 2 метра в высоту и столько же в ширину. Во время цветения кусты покрываются бело-розовыми соцветиями. Темно-красные листья, гофрированные по жилкам, имеют вытянутую форму.  Осенью они меняют свой цвет на бронзовый.

Schuch (Шух)

Пузыреплодник шух

Кустарники этого сорта пузыреплодника достигают 2 метров в высоту. Ветви с красно-коричневой корой покрыты темно-красной листвой и устремлены вверх. Осенью цвет листьев остается неизменным.

Ledi in Red (Леди ин Ред)

Пузыреплодник Леди ин ред (Lady in Red)

Название «Дама в красном» говорит само за себя. Этот сорт пузыреплодника вырастили английские селекционеры. Кусты красивой формы не превышают полутора метров в высоту. Нарядная листва ярко-красного цвета к осени становится более темной.

Это, безусловно, неполный список краснолистных сортов пузыреплодника. Но они являются одними из самых популярных среди европейских специалистов по ландшафтному дизайну. Их красоту, неприхотливость, простоту размножения успели оценить и наши садоводы.

Условия произрастания

О неприхотливости пузыреплодника уже знают многие наши садоводы и специалисты по ландшафту. Преимущества этого растения:

• засухоустойчивость и морозоустойчивость
• нетребовательность к почвенному составу
• неприхотливость в уходе
• высокая степень декоративности
• возможность размножения разными способами
• возможность создания садовых форм с помощью стрижки
• устойчивость к заболеваниям и атакам вредителей

Несмотря на все достоинства пузыреплодника, следует помнить, что краснолистные сорта менее устойчивы к сильным морозам, в отличие от основных растений. Поэтому молодые саженцы в первый год после посадки следует укрывать на время зимних холодов. Весной обязательно потребуется санитарная обрезка, во время которой нужно удалить все обмерзшие, сухие и поврежденные ветви. Формирующую стрижку делают по мере надобности.

В отличие от основных растений, краснолистные сорта пузыреплодника лучше будут расти и развиваться на плодородных почвах. Следует воздержаться от посадки кустов с красными листьями на суглинках, где есть опасность застоя влаги. От переувлажнения растения могут быть повреждены мучнистой росой.

Весной саженцы можно подкармливать азотными удобрениями, а осенью – калийно-фосфатными. В частом поливе пузыреплодник не нуждается.

Использование в ландшафтном дизайне

Нарядные краснолистные кусты пузыреплодника можно использовать в разных композициях. Из них можно сформировать яркую живую изгородь, украсить одиночной посадкой газон или неприглядный участок сада, включить в декоративную композицию для украшения клумбы или цветника.

Праздничный наряд красного пузыреплодника хорошо сочетается со строгой зеленью хвойников. Ветроустойчивость позволяет высаживать кусты даже на крышах.

Украшая гравийные и каменистые дорожки живой изгородью из пузыреплодника, можно рассчитывать, что красотой можно будет любоваться не менее 30 лет.

Пузыреплодник в ландшафтном дизайне: сорта, посадка, уход

Пузыреплодник — это декоративный листопадный кустарник из семейства Розовые. Саду добавляют изюминки его яркие листья, напоминающие по форме калину, и нежные соцветия в форме шарика, что расцветают белым в конце весны-начале лета.

Кустарник нашел свое место в ландшафтном дизайне благодаря тому, что при красивом внешнем виде неприхотлив и быстро разрастается.

Пузыреплодник калинолистный

Сорта растения

Сорта пузыреплодника отличаются формой и цветом листьев, периодом цветения, предпочтениям к погодным условиям. Присмотреть разные виды для своего сада можно в каталоге садового цетра Greensad — greensad.ua/category/puzyreplodnik/. В условиях нашего климата распространены сорта:

Пузыреплодник калинолистный — цветет белым или светло-розовым в конце весны-начале лета. Имеет несколько подвидов (Dart’s Gold, Lady in Red и др.), самые высокие вырастают до 2-3 метров. Если высадить кустарник на затененной площадке, листья приобретают красноватый окрас.

Пузыреплодник однопестичный — кустарник с трех-пятилопастными листьями, цветет в июне и вырастает до 1 метра. Его природная среда — хвойный лес. Растение стойкое к перепадам температур и морозам до -30 °C.

Пузыреплодник головчатый — кустарник с ярко-зелеными листьями, цветущий в мае-июле. Растение вырастает до 60 сантиметров, оно неприхотливо к погодным условиям, но не любит чрезмерной влажности.

 Как украсить пузыреплодником сад?

Вырастая на солнечных участках без тени, пузыреплодник сохраняет яркость листвы. При регулярной поливке кустарник разрастается, образует широкую крону и пышно цветет. Его высаживают по одному, формируют аллеи или создают изгородь.

Используют пузыреплодник также в композиции с другими растениями — спиреей, сиренью, туей. В миксбордере (цветнике с несколькими видами растений разных ярусов) несколько сортов кустарника комбинируют с барбарисом, травянистым многолетником, низкорослым миндалем.

Пузыреплодник калинолистный сорт Диабло

Ветвистая крона кустарника позволяет использовать его в качестве живой изгороди, ее можно обрезать, придавать нужной формы и высоты. Можно использовать в одной изгороди несколько сортов растения с разными оттенками листьев, придав саду живописности.

Пузыреплодник требует минимального ухода. Перед посадкой черенков стоит удобрить почву перегноем и дерном. Взрослые кусты обрезают 5-6 раз за сезон. Кустарник легко переносит зиму, но приствольный круг не помешает прикрыть соломой или другим утеплителем.

Весной почву обогащают удобрениями с азотом, осенью — минеральными. Растение, обеспеченное должным уходом, будет украшать ваш сад ярким цветением из сезона в сезон!

Пузыреплодник уход осенью подготовка к зиме. Пузыреплодник — отличное решение для организации живой изгороди

Среди всех существующих декоративных растений пузыреплодник является наименее требовательным в уходе, и еще его часто используют как лекарственное средство. Ниже мы подробно изучим самые популярные сорта этого кустарника, особенности его размножения и то, как ухаживать за пузыреплодником.

Знакомьтесь — пузыреплодник

– это декоративный кустарник, главным преимуществом которого является быстрый рост, неприхотливость, а также привлекательность внешнего вида, которая сохраняется на протяжении всего периода вегетации. Пузыреплодник эффектно смотрится при создании композиций в ландшафтном дизайне, так как из него отлично получаются даже живые изгороди.

Внешне кустарник отличается наличием раскидистых ветвей, которые под собственным весом немного поникают к земле, образуя шарообразную крону. В полном расцвете сил пузыреплодник способен достигать 3 м в высоту и примерно столько же в диаметре.

Знаете ли Вы? Период цветения пузыреплодника не очень продолжительный, однако его соцветия могут практически полностью покрывать куст. По завершению цветения на растении образовываются не менее привлекательные плоды .

Своими листьями и соцветиями пузыреплодник напоминает калину. Однако, в зависимости от вида и сорта, этот кустарник может иметь разный окрас листьев и цветков.

Виды и основные сорта кустарника

Виды пузыреплодникане очень разнообразны. В цветоводстве используются только два – Амурский и Калинолистный, которые, тем не менее, представлены множеством сортов.

Отличается высотой – около 3 м, а также идеальной гладкостью красновато-коричневых побегов, кора на которых только в старости начинает отслаиваться практически идеально ровными продольными полосками. Имеет достаточно крупные листья – до 10 см с сердцеобразным основанием, темно-зеленым верхом и сероватым низом, покрытым волосками.

В соцветии данного вида пузыреплодника можно насчитать по 10-15 цветков, диаметр каждого 1,5 см. Их цветение продолжается в течение 3 недель, после чего появляются плоды, со временем приобретающие красный окрас.

Этот кустарник устойчив даже к самым холодным зимам, а также способен спокойно приживаться в групповых посадках. Самые популярные сорта пузыреплодника амурского, которые можно увидеть на клумбах дачников, это:

• Лютеус – кустарник с яркими желтыми листьями, которые ближе к осени приобретают привлекательный бронзовый оттенок;
• Ауреомаргината – отличается темно-золотистой каймой на листочках;
• Нана – это карликовый амурский пузыреплодник с однотонными темно-зелеными листьями, но очень привлекательными цветами.

Это так же достаточно высокий кустарник с густой шаровидной кроной. Его листья могут иметь от 3 до 5 лопастей и зубчики по краям. Верх у них так же более темный, нежели низ.

Цветочки у калинолистных пузыреплодников более мелкие, составляют всего 1,2 см в диаметре, однако могут иметь не только белый окрас, но и розоватый с красными тычинками. Плоды по мере созревания краснеют. Высаживание этого вида кустарника в групповом варианте так же возможно. Его самые популярные сорта:

• Дартс Голд – кустарник, максимальная высота которого 1,5 м. Отличается плотностью побегов и желтыми листьями, которые за лето немного зеленеют. Может иметь как розовые, так и белые цветы.
• Ред Барон – 2-метровый кустарник с большими (около 7 см) листьями темно-красного окраса и узкой формы, что делает их особенно эффектными. Цветы у этого сорта крупные – до 5 см, имеют розовый оттенок. Плоды красные, состоят из 3 или 5 остроконечных мешочков. Этот сорт ценится среди садоводов больше всего.
• Леди ин Рэд – отличается высотой кустов в 1,5 м и ярко-красными листьями. Правда, со временем листья темнеют. Цветет этот сорт нежно-розовыми цветочками.
• Диабло – краснолистный пузыреплодник высотой до 3 м с пурпурными или темно-красными листьями.

Важно! При выращивании пузыреплодника Диабло в тени его листья станут зелеными с легким оттенком пурпура. По этой причине его лучше высаживать на хорошо освещенных участках.

Уход пузыреплоднику нужен для того, чтобы растение достигало максимальных показателей своего развития – и в росте, и в цветении. И хотя в целом этот кустарник не требователен в уходе, о некоторых особенностях должен знать каждый садовод.

Выбор подходящего места и посадка

Посадка пузыреплодника – очень ответственная задача, так как она предполагает не только выбор хорошего места для кустарника, но и подготовку для него почвы, насыщение ее необходимыми минеральными веществами. Практически все сорта пузыреплодника отлично приживаются и на солнечных участках, и на совсем затененных. Плодородность почвы для него не имеет практически никакого значения, главное –грунтовые воды не должны подходить к поверхности, и сам грунт не должен быть перенасыщен известью.

Важно! Грунтовые воды в сочетании с известью могут стать причиной развития такого заболевания кустарников, как хлороз, а также загноить его корневую систему. Поэтому, даже если поначалу куст покажет хороший рост, со временем он все равно увянет.

Посадку пузыреплодника можно осуществлять в любое время года, кроме зимы, однако наиболее эффективной будет пересадка пузыреплодника весной, поскольку это самое подходящее время для укоренения куста на новом месте. Для посадки можно использовать самый стандартный набор удобрений или же просто чернозем.

Регулярность полива и подкормка

Воду пузыреплодник очень любит и при засухе может погибнуть. Поэтому взрослый куст в жаркое лето рекомендуется поливать дважды в неделю, используя при этом около 40 л воды. Учтите также, что вода ни в коем случае не должна попадать на листья и соцветия пузыреплодника –это может привести к ожогам. Также поливы стоит проводить либо рано утром, либо поздно вечером.

После каждого полива почву можно мульчировать, но если вы этого не делаете, то хотя бы удалите под кустом сорняки и прорыхлите ее. Что же касается целенаправленных подкормок, то они проводятся единожды весной, и единожды осенью:

1. Весной в 10 л воды растворяют 250 г коровяка, 1 столовую ложку селитры и 1 столовую ложку мочевины и используют такой раствор для полива кустов. Только учтите, что на один взрослый куст требуется около 15 л такого удобрения.
2. Осенью 2 столовые ложки нитроаммофоски разбавляют в 10 л воды и поливают приствольный круг. Объем удобрения потребуется такой же, как и весной.

Обрезка кустарника

Обрезка пузыреплодника должна проводиться регулярно, что позволит сформировать правильную форму куста. Формирующую обрезку рекомендуют делать весной, при этом если вы желаете получить широкий куст, все его побеги следует укоротить до 1,5 м, если высокий и фонтановидный – удалить все тонкие побеги и оставить посередине 6 самых крепких.

Но кроме этого каждую весну пузыреплодник нуждается в санитарной обрезке, которая предполагает удаление сломанных и пораженных различными заболеваниями побегов. Обратите также внимание, нет ли в кусте веток, которые растут внутрь, а не наружу. Если есть – их также следует удалить. С санитарной целью пузыреплодник обрезается и перед зимой, чтобы верхушки молодых побегов не обмерзли.

Раз в шесть лет куст требует омолаживающей обрезки, при которой удаляют все побеги под невысокий пень. После такой обрезки все толстые побеги потребуется обработать при помощи садового вара, чтобы обезопасить растение от болезней.

Важно! Если вы приобретаете молодой саженец пузыреплодника, лучше выбирайте вариант с закрытой корневой системой, то есть те растения, которые посажены в горшки. Во-первых, это даст вам гарантию того, что растение примется и у него нет повреждений на корнях, а во-вторых, что растение было выращено в рассаднике и действительно является представителем того сорта, который вы желаете получить.

Размножение пузыреплодника

Поскольку приобретать саженцы пузыреплодника – достаточно затратное дело, можно попробовать самостоятельно размножать его кусты. Для этой цели применяют разные способы, каждый из которых отличается своими преимуществами.

Черенкование

Черенки заготавливаются из молодых побегов взрослого куста еще до начала его цветения. Срезать для этого нужно кусочек побега длиной в 10-20 см, на котором обязательно должны присутствовать 2-3 междоузлия. После срезания удаляются листья на нижней части черенка, а на верхней укорачиваются на половину.

Нижнюю часть черенков смачивают в стимулятор корнеобразования (отлично подойдет раствор из корневины) и высаживаются на грядку из торфа и песка. После этого их также потребуется полить и укрыть полиэтиленом. До полного прорастания черенкам нужны периодически поливы и проветривания. На зиму их необходимо хорошо укрыть, а весной можно пересаживать на постоянное место.

Отводками

Размножение пузыреплодника при помощи отводок предполагает закапывание в землю молодого побега, который больше всего наклонен к земле. Перед закапыванием с него нужно удалить все листья, но кроме тех, которые растут на верхушке и не будут закрыты землей. Глубина канавок для отводок должна составлять не более 12 см.

Отводку обязательно следует поливать и полоть, рыхлить возле нее почву. Тогда уже к осени ее можно отделять от основного куста, но обязательно укрыть на зиму. Весной растение можно будет пересаживать.

Делением куста

Это самый простой способ размножения пузыреплодника , поскольку он предполагает всего лишь выкапывание куста из почвы и разделение его на несколько частей. После этого каждая часть закапывается отдельно, что в скором времени позволит ей разрастись до первоначальных размеров. Очень важно при этом максимально быстро выполнять все действия, чтобы не допустить высыхания корней.

Семенами

Этот способ размножения наименее приемлем для садового пузыреплодника , так как выросшие сеянцы не всегда получают те же сортовые характеристики, что и кусты, с которых семена были взяты.

Самый распространенный вид – пузыреплодник калинолистный (Physocarpus opulifolius ) . Это куст высотой до 3 м с густой кроной. В начале лета растение обильно покрывается цветами белого или розового оттенка, собранными в соцветия. Форма Luteus отличается золотистой , особенно яркой в начале вегетации. А у сорта Darts Gold золотистый цвет сохраняется постоянно. Форма Aureomarginata имеет листья с золотистой каймой. Сорт Diabolo примечателен темно-пурпурной окраской листьев. Сорта пузыреплодника более компактны по сравнению с видовым растением. Существует и карликовая форма Nanus – высотой до 1 м.

Как выглядит кустарник пузыреплодник

Пузыреплодник зимостоек, теневынослив, устойчив к неблагоприятным условиям. Не любит только застоя воды в почве. Легко размножается черенками. Декоративные формы прекрасно сочетаются друг с другом, благодаря этому пузыреплодник в дизайне ландшафтов применяется очень активно. Из видового растения получается хорошая живая изгородь, в том числе стриженная. Посмотрите на фото, как выглядит пузыреплодник, роскошно цветущий на фоне других насаждений:

Наружность пузыреплодника зависит от его вида и сорта, но обычно это кустарник с раскидистыми ветками, которые образовывают шаровидную крону. Кора отслаивается широкими полосами. Растение достигает высоты до 2,5 м. Листья 3-х или 5-ти лопастные, распределены по веткам равномерно, из-за чего куст выглядит пышным сверху донизу. Цветки белые или розоватые, с многочисленными тычинками по центру, сгруппированные в соцветия (по форме они напоминают полушария) диаметром от 5 до 7 см. Плоды тоже выглядят эффектно, представляют собой вздутые, пузыревидные листовки, которые при созревании краснеют. Свое название растение получило как раз из-за характерной формы плодов. Насколько удачно сочетается с другими насаждениями кустарник пузыреплодника, смотрите на фото:

К описанию пузыреплодника можно присовокупить и то, что он очень быстро растет, прибавляя до 40 см в диаметре за сезон. Срок его жизни от 30 до 40 лет. Среди садоводов он славится тем, что сохраняет свой декоративный вид практически весь сезон. Прочитав обобщенное описание пузыреплодника, посмотрите и фото – на нем изображено, как выглядит этот замечательный представитель растительного мира:

Виды и сорта пузыреплодника: фото и описание

Основными считаются два вида пузыреплодника – амурский и калинолистный.

Амурский располагается одиночно или маленькими группами среди зарослей разного рода кустов, на горных склонах. Он является охраняемым в заповедниках растением. Представляет собой куст до 2,5 м высотой. На взрослых экземплярах кора шелушится равномерными полосками. Стволы у молодых кустов гладкие, обычно темной расцветки. Листья около 10 см длиной, зеленые сверху и серые снизу. Цветки белые, диаметром примерно 1,5 см, организованные в соцветия-полукруги. Оцените красоту этого вида пузыреплодника на фото, презентованном ниже:

Цветут амурские пузыреплодники до 20 дней, плоды при созревании становятся красными, придавая кустарнику яркую, красочную наружность. Также стоит отметить, что данная разновидность растения хорошо переносит зиму, так как ветки полностью одревесневают. Все известные формы и сорта этого вида пузыреплодника активно применяются в оформлении приусадебных участков, парков, городских скверов.

Калинолистный вид – это куст высотой около 2,5 м с широкими, раскидистыми ветками. Побеги образовывают густую шаровидную крону. Предлагаем оценить пузыреплодник данного вида – посмотрите фото, удачно передающее его достоинства:

Листья приблизительно 5 см в диаметре, сверху зеленоватые, а снизу светлее, по краям зубчатые, слегка поникшие. Цветы размером около 1,2 см, белой или розовой окраски, с ворсинками по центру. Плоды выглядят очень нарядно, по мере созревания они меняют свой цвет (с зеленого на красный). Декоративные сорта:

Darts Gold

Red Baron

И др. служат отличным «материалом» для работы ландшафтных дизайнеров. Вы можете увидеть вышеописанные виды и сорта пузыреплодника на фото, предложенных ниже:

Ознакомьтесь с коротким описанием сортов пузыреплодника (рассмотрены самые известные образцы):

Вырастает до 3-3,5 м в высоту, до 2 м в ширину. Листья глянцевые, в осенний период меняют цвет из глубокого пурпурного на желтый. При этом кустарник выглядит еще более эффектно. Цветки организованы в соцветия, по форме похожие на полукруги.

Отличается белыми цветками, маленькими листьями зеленоватого цвета. Эта карликовая форма может достигать не более 1 м. Растение лучше всего высаживать возле изгороди, а также на клумбах – среди травянистых одно- или многолетников.

Summer Wine

Кустарнику присущи средние параметры. Ветви своим изгибом напоминают россыпи салюта. Бело-розовые цветы расположены по всей длине веток. Цветет растение весной. Листья насыщенно-красного цвета. Данный сорт отличается высокой морозостойкостью, неприхотливостью к местности.

Кусты растут высотой до 2,5-3 м. Весной наличествует желтый окрас листвы, к лету крона становится зеленой. Цветки белоснежные, собранные в полукруглые соцветия. Кустарник примечателен тем, что его ветви образовывают шаровидный купол.

Darts Gold

Кустарник меняет «летний» ярко-желтый цвет своих листьев на оранжевую гамму в осенний период времени. Такие сезонные метаморфозы выглядят весьма оригинально. Цветки у растения чаще белые, но иногда встречается кремовый окрас.

Red Baron

Растет до 1,5 м в высоту. Отличается данный сорт гофрированными листьями. Цветы розоватого оттенка, они располагаются равномерно по всему кусту.

Aureomarginata

Массивный образец с раскидистыми ветвями. Имеет необычный окрас – зеленые листья с темной или золотистой каймой.

Обладает толстыми стеблями, устремленными вверх.

Coppertina

Расцветка оранжевая в весенний период, склонна к покраснению летом. Куст вырастает до 2 м. Прочитав описание сортов пузыреплодника, посмотрите и фото, на которых изображены самые привлекательные варианты:

Как размножить пузыреплодник черенками, отводками и делением

Размножение пузыреплодника проводят несколькими традиционными способами, а именно – при помощи отводков, черенкованием или делением куста. Далее описана технология самого популярного пути разведения пузыреплодника – размножения черенками:

1. Срезать молодые ветви длиной до 20 см, с несколькими разветвлениями. При этом необходимо обсечь все листья снизу, а сверху укоротить их примерно наполовину.
2. Черенки замочить в стимуляторе корнеобразования.
3. Посадить заготовки в грядку, предварительно снабженную песчано-торфяной смесью.
4. Обильно полить и накрыть полиэтиленом.

В дальнейшем черенкам пузыреплодника нужен уход: следует проветривать и поливать их, укрывать на зиму. Разобраться в том, как размножить пузыреплодник черенками, не сложно, с этим справится даже начинающий садовод. Выращивание пузыреплодника методом образования отводок также не сопряжен с трудностями. Берут сильный побег, срезают с него всю листву, кроме верхнего ряда, укладывают в проделанную заранее канаву (глубина 10-12 см). Пришпиливают скобой, присыпают почвой. Не забывают о своевременном поливе и удалении сорняков. К осени уже будет готов отдельный отводок, с собственной корневой системой. Его отсекают от материнского кустарника, в результате чего получают крепкий саженец пузыреплодника, посадка и уход за которым в дальнейшем производится согласно общим правилам. Далее пойдет речь о том, как размножать пузыреплодник в саду методом деления куста. Приступать к процедуре лучше всего в начале весны или осенью. Выкапывают зрелый куст, разрезают корневой аппарат на несколько сегментов, затем сразу же осуществляют посадку пузыреплодника (а точнее каждой новой единицы, полученной в процессе деления).

Как посадить пузыреплодник и как за ним ухаживать

Уход и выращивание пузыреплодника нужно начинать с выбора местности для посадки. Растение замечательно себя чувствует как на солнце, так и в тени. Участок лучше выбрать отрытый, без деревьев поблизости. Экземпляр не выносит извести в почве, застоя воды – такого рода грунт спровоцирует загнивание корневой системы. Кустарник способен мириться с высокой концентрацией углекислого газа, поэтому его нередко высаживают как живую изгородь возле дороги. Приобретают юный саженец с закрытыми корнями в проверенном питомнике или используют посадочный материал, заготовленный собственноручно. Молодое растение нельзя высаживать в морозную погоду. Заниматься посадкой лучше осенью, так как имеется больше условий для благополучной приживаемости, интенсивного роста. Далее предлагается пошаговая инструкция того, как посадить пузыреплодник:

1. Выкопайте яму, насыпьте туда слой плодотворной почвы за несколько дней до посадки, чтобы грунт успел осесть. Глубину траншеи определяйте с таким расчетом, чтобы после помещения слоя плодотворной земли верхушка корней растения находилась на поверхности.
2. При перенесении саженца в посадочную канаву не убирайте землю с корней, дабы не причинять вред неокрепшему растению. Удобрения на этом этапе, как правило, не добавляют.
3. Засыпьте траншею земельной смесью (плодородная прослойка почвы + песок + дернина + торф), обильно полейте растение.
4. После осадки приствольного круга подсыпьте еще земли.
5. Несколько дней наблюдайте за тем, чтобы земля вокруг саженца не пересыхала.

Если вы желаете сделать из кустарников пузыреплодника плотную изгородь, высадите молодые растения в 2 полосы. На междурядья оставьте расстояние 40 см, пространство между растениями в пределах одной полосы должно равняться 45 см. В будущем изгородь формируется обрезкой на любой вкус. Обратите внимание, как происходит посадка пузыреплодника – на фото изображена процедура перенесения саженцев на место их стационарного «обитания»:

От того, как вы будете ухаживать за пузыреплодником, зависит его здоровье и внешний вид. Растение неприхотливо, но это не означает, что после посадки о нем можно забыть. При необходимых условиях куст за сезон может вырасти до 40 см. На второй год после посадки только закладываются цветочные початки, из-за этого крайне важны обрезка и аккуратное формирование кроны. Растение морозостойкое, но при очень сильных холодах могут обмерзнуть верхушки веток. Следует позаботиться об утеплении на зиму. Взгляните на фото – при правильной посадке и уходе пузыреплодник будет выглядеть так же шикарно:

Он относится к красивым декоративным кустарникам неприхотливым и быстрорастущим. Этот куст отличается своей шаровидной кроной с пониклыми раскидистыми ветвями, гофрированными листьями, укрывающими его пышно и обильно. Пузыреплодник краснолистный отличается цветом листвы и обладает высокой декоративностью в течение всего сезона. Его часто используют в одиночной посадке или как из пузыреплодника.
«Загородные хобби»

Характеристика пузыреплодника

Взрослый куст достигает высоты до трех метров, листья трех-пятипалые схожие с листвой калины. Это многолетнее растение начинает весной или в начале лета цвести, покрывая весь куст белыми цветами с множеством тычинок в виде полушарий в диаметре 5-7 см. Культура представлена несколькими сортами

с листвой разнообразной расцветки.

Посадка пузыреплодника

Для поддерживания высокой декоративности культуры необходимо сажать растение на открытое солнечное место. При посадке в тени или полутени пузыреплодник отлично растет, но листва его блекнет.

Культура растет на любой почве при условии, что в ней нет извести, и сделан дренаж. Конечно, на богатой плодородной земле растение растет гораздо быстрее, выглядит эффектнее и ярче. Достоинством культуры является устойчивость к выхлопным газам, поэтому растение можно смело высаживать у дорог.

Выращивать пузыреплодник из семян так, как есть вероятность потерять основные характеристики культуры. Желательно его приобретать в питомнике, выращенном в контейнере. Это растение можно сажать в любое время. Чтобы посадить растение необходимо заранее примерно за две недели выкопать посадочную яму диаметром и глубиной до 50 см, на дно которой поместить плодородную смесь, которая должна осесть ко времени посадки.

Во время посадки растение аккуратно чтобы не повредить ком земли с корнями достают из контейнера и помещают в яму. Затем засыпают плодородной землей, заглубив куст на 5 см, чтобы появились дополнительные побеги. Обязательно нужно полить саженец водой с раствором «Корневина» и замульчировать приствольный круг. Мульча предохранит появление корки на поверхности и корни получат достаточно воздуха для дальнейшего роста.

пузыреплодник

Уход за пузыреплодником

Культура неприхотливая, растет быстро, за сезон при благоприятных условиях может добавить в высоту и ширину до 40 см. Можно формировать форму куста, делая нужную обрезку, которую он переносит безболезненно и начинает обрастать новыми молодыми побегами. Формирующую обрезку проводят ранней весной до момента пробуждения почек либо осенью после периода вегетации. Для получения сильного куста обрезку проводят уже на высоте 45-55 см. Чтобы придать кусту форму фонтана, нужно вырезать все побеги у основания, оставив только пять сильных веток, которые обрезают на высоте 1,5 м. Санитарную обрезку проводят каждую весну, вырезая сухие и поломанные ветки.

Растение плохо переносит засуху. А при поливе нужно соблюдать осторожность, так как вода способна обжечь листья, соцветия. Поэтому полив при сухой погоде лучше проводить ближе к вечеру два раза в неделю, выливая под взрослое дерево не менее 40 литров воды. Но и переувлажнение может сказаться отрицательно на растении. Оно может заболеть мучнистой росой и даже погибнуть.

Пузыреплодник необычайно зимостоек и в средней полосе можно его не укрывать на зиму. Правда, в сильные морозы могут подмерзнуть кончики ветвей.

Подкормку пузыреплодника проводят весной и осенью. Весной подкормка сводиться к тому, что под куст готовится смесь 0,5 л коровяка с добавлением по столовой ложке мочевины, аммиачной селитры и разводится в 10 л воды. Под взрослый куст вносят 15 литров этой смеси. Осенью под куст вносят раствор нитроаммофоски (2 ст. л. на ведро) и расход составляет 15л/растение.

Размножение пузырника

Его проводят несколькими способами: деление куста, отводками, черенкование.

живая изгородь из пузыреплодника

Разведение отводками

Для этого выбирают здоровый побег, направленный в сторону, удаляют с него листья, оставив их на верхушке. Этот побег в начале весны укладывают в бороздку глубиной 15 см, закрепляют скобами, засыпают землей. К осени побег укорениться. Необходимо регулярно увлажнять отводок, чтобы быстрей росла корневая система. Осенью отводок можно отделить от материнского растения и укрыть на зиму.

Черенкование

Для этой цели используют молодые побеги, выросшие в этом сезоне. Приготовленные черенки замачивают в стимуляторе корнеобразования, высаживают в песок и укрывают полиэтиленовой пленкой или пластиковыми бутылками. Посадки постоянно увлажняют, проветривают, а на зиму укрывают. Весной укоренившиеся черенки можно высадить на подготовленное место.

Сорта пузыреплодника

Наибольшей популярностью пользуются сорта калинолистного пузыреплодника, имеющего листья красного либо желтого цвета.

Теперь вы убедились, что посадка, уход и даже размножение кустарника вполне по силам огороднику с небольшим опытом. Пузыреплодник краснолистный действительно неприхотливый кустарник, который своей красой будет , и радовать вас долгие годы.

Поделитесь с друзьями в социальных сетях!

Сайт некоммерческий, развивается на личные средства автора и ваши пожертвования. Вы можете оказать помощь! (Даже небольшой суммой, можно ввести любую)
(картой, с сотового тел, яндекс деньгами — выберите нужное)

Спасибо!

Приглашаю Вас в группу на Subscribe. ru для дачников, садоводов: «Загородные хобби» Все о загородной жизни: дача, сад, огород, цветы, отдых, рыбалка, охота, туризм, природа

Посадка и уход за пузыреплодником

Посадка пузыреплодника

Для того чтобы это растение радовало Вас прекрасным декоративным видом, и очаровательными цветками, нужно знать несколько тонкостей по посадке и уходу за ним. Культура предпочитает яркие солнечные места , но терпимо относится и к тени. Но если Вы желаете, чтобы листья никогда не блекли высаживайте только на хорошо освещаемых участках.

Почва должна быть без извести и дренажа. Это любая плодородная, рыхлая и свежая земля. Также для посадки может подойти субстрат, бедный на питательные вещества. Пузыреплодник устойчив к загазованности воздуха, поэтому можете смело высаживать его возле дорог. Для посадки декоративного кустарника используйте только части потомства, так как размножение семенами не передает четкий окрас листьев.

Для посадки стоит выкопать яму глубиной и диаметром 50 см, на дно добавить перегной или смесь грунта с торфом. Дальше куст пузыреплодника достают с контейнера и ставят в посадочную яму. Затем засыпается яма плодородным грунтом, а саму культуру заглубляют до 5 см. Это поможет дать кустарнику дополнительные побеги из спящих почек.

После окончания процедуры посадки обильно полейте пузыреплодник водой, после впитывания воды обязательно проведите мульчирование приствольного круга. При такой обработке поверхностная корка не сможет образоваться и корни пузыреплодника получат необходимое им количество воздуха.

Черенкование пузыреплодника

Размножается пузыреплодник несколькими способами. Мы вам расскажем о том как правильно черенковать пузыреплодник. Для размножения этим способом нужно использовать зеленые стебли, которые выросли в этом году. Для этого подходят молодые ветви с 2-3 почками, срезанные рано утром, или же не в солнечную погоду.

Это предохранит их от чрезмерного испарения влаги с поверхности побегов. Срезы рекомендуют сделать косыми , а листья частично удалить. Некоторые побеги стоит замочить в любом стимуляторе корнеобразования и высадить в смесь песка с торфом или же в речной песок.

После высадки черенков их нужно обильно полить и укрыть полиэтиленом . Если же черенков оказалось мало, можно укрыть каждый из них по отдельности, используя пластиковые бутылки с обрезанным горлышком. Следующий уход, до зимы, заключается в периодическом увлажнении и проветривании саженцев. После наступления холодов, укорененные черенки укрывают, а весной высаживают на постоянное место.

Формирование кустов пузыреплодника

Пузыреплодники ценятся за хорошую скорость роста . Размещают кусты в группах, особенно с растениями разной листвы. Из них также можно создавать разные миксбордеры, как из разных форм кустов пузыреплодника, так и совмещая с другими растениями. Или же садят их одиночно, что не менее эффектно смотрится в ландшафтном дизайне.

Для поддержания декоративного вида кустарника его нужно стричь и формировать. Пузыреплодник легко поддается этой процедуре, поэтому с него можно сделать практически любую форму . Молодые растения стоит стричь постоянно, это способствует отличному ветвлению, и развитию пышности куста. Формирование кустов обычно проводят весной или осенью.

Если же цель обрезки – это сохранить и отметить форму фонтана , то рекомендуют обрезать на высоте около 120 см и вырезать только тонкие побеги, которые находятся возле основы растения, оставляя при этом только около 4 самых мощных побегов. Пузыреплодник – красивый кустарник, который дополнит и украсит участок своей необычной формой кроны, которую Вы придадите ему сами.

Некоторые сорта пузыреплодника обладают раскидистыми веточками и фонтановидными формами кустов, их обрезание и создание формы исходит из ожидаемого результата садовода. Таким образом, если Вы хотите большой и широкий куст с большим количеством побегов, то стоит обрезать только нижнюю область, оставляя примерно 45 см в высоту.

Когда и как стричь пузыреплодник

Пузыреплодник очень хорошо переносит обрезку, поэтому при желании, можно создать компактный и красивый куст. Особенно важно подстригать молодые растения, которые могут сформировать пышную привлекательную крону.

Обрезку этого растения проводят по двум причинам – для профилактики, и для формирования декоративного вида куста. В обоих случаях эту процедуру стоит проводить весной, или ранней осенью. Санитарная обрезка подразумевает под собой удаление поврежденных и поломанных веток. Формировочная обрезка производится после цветения кустарника.

Побеги стоит обрезать на 1/2 или 1/3 величины текущего прироста. А на второй и последующие годы – на 2/3. Такую обрезку проводят с целью получения густого стебельного куста. У некоторых сортов с цветной листвой могут появляться побеги с зелеными листьями, их стоит также удалять. Множество сортов этого растения имеют раскидистые побеги и фонтановидную форму кроны, их обрезка и формирование будет зависеть от того, что вы хотите получить в итоге. Если же вам нужен мощный здоровый куст с многим количеством стволов, рекомендуется обрезать ниже, оставляя до 40-50 см высоты.

Если же вы решили просто подчеркнуть форму кроны пузыреплодника, обрезайте на высоте около 120-150 см и вырезайте тонкие ветви у основания куста, оставляя только самые мощные. Живая изгородь из пузыреплодника должна формироваться 1-2 раза за вегетационный период, или если потребуется, то немного чаще. Первая стрижка проводиться в апреле месяце, до распускания почек, остальные — по мере необходимости.

Также пузыреплодник нуждается в омолаживающей обрезке , при которой удаляются старые побеги у самого основания, а остальные обрезаются до места отхождения бокового побега. Такую процедуру стоит проводить осенью, когда листья начнет опадать, или весной, до их распускания.

Немногие декоративные кустарники могут похвастаться яркой листвой, красивым цветением и при этом совершенной неприхотливостью. Это описание в полной мере относится к такому растению как пузыреплодник. Он не доставит владельцам садовых участков особых хлопот, и с его выращиванием смогут справиться даже начинающие садоводы. Культивируют этот кустарник из-за его высоких декоративных качеств. Он имеет листья ярких расцветок и пышную густую крону, которая придает растению эффектный вид и не утрачивает своей декоративности на протяжении всего периода вегетации.

Биологическое описание

Пузыреплодник – декоративный листопадный кустарник, который относится к семейству Розовые. Род Пузыреплодник насчитывает более 10 видов , из которых наибольшее распространение и популярность получил пузыреплодник калинолистный. В высоту кустарник растет от 1 до 3 метров.

Пузыреплодник используется как в одиночных, так и в групповых посадках, а также для создания живых изгородей и озеленения улиц, скверов, парковых зон. Родина этого растения – Восточная Азия и Северная Америка. В США и Канаде он растет в диком виде в смешанных лесах, долинах и по берегам рек.

Описание пузыреплодника:

• Кора бурого или коричневого цвета. С возрастом она имеет свойство отслаиваться
• Листья яйцевидной или эллиптической формы, небольшого размера, примерно 4-10 см длиной. Края листьев пильчато-зубчатые. С верхней стороны листовые пластины имеют темный и насыщенный оттенок, а с нижней стороны они окрашены в более светлые тона
• Цветки белые или розовые, собранные в выпуклые щитковидные соцветия. Зацветает кустарник в июне-июле и цветет в течение двух-трех недель
• Плоды представляют собой миниатюрные пузыри-листовки, собранные в щитки

Необычная форма плодов и дала растению такое непривычное название – пузыреплодник. На латыни оно звучит как Physocarpus. Это название произошло от двух греческих слов: physo, что означает «пузырь» и carpos, что переводится как «плод».

Пузыреплодник: декоративный и неприхотливый кустарник

В России пузыреплодник впервые появился в конце XVIII века в ботаническом саду Санкт-Петербурга. На протяжении XIX века были завезены из Северной Америки еще несколько видов растения.

Этот кустарник:

• является неприхотливым
• имеет высокую зимостойкость
• хорошо переносит условия города
• не слишком требователен к составу почвы
• начинает цвести и плодоносить в возрасте 4 лет
• плохо переносит избыточное увлажнение и застой влаги

Пузыреплодник сохраняет декоративность на протяжении всего периода вегетации. При этом кустарник весьма неприхотлив.

Однако есть два требования, которые нужно соблюдать, чтобы этому растению было комфортно на садовом участке:

1. Отсутствие извести в грунте. На почвах с повышенным содержанием извести кустарник будет плохо развиваться.
2. Наличие дренажа. Пузыреплодник не терпит застоя влаги, и почвы с высоким уровнем грунтовых вод ему не подходят.

Хотя к составу почвы этот кустарник не слишком требователен, на рыхлый, плодородный и удобренный субстрат он будет отзываться хорошим ростом и пышным видом. Растение устойчиво к загрязнению воздуха. По этой причине его можно выращивать рядом с дорогами.

Огромное преимущество пузыреплодника перед другими декоративными кустарниками – это его хорошая зимостойкость. В средней полосе он без проблем зимует, и лишь очень сильные морозы могут повредить кончики его побегов.

Посадка

Пузыреплодник можно выращивать как в тени, так и на освещенных участках. Однако сорта с пурпурными и золотистыми листьями на солнечных участках будут иметь более яркий оттенок листвы. В тени расцветка листьев со временем бледнеет и становится приглушенной.

Вид Калинолистный (Ред Барон)

Поэтому, если вы хотите добиться большего декоративного эффекта от этого растения, для его посадки следует выбрать открытое солнечное место. Для посадки лучше приобрести материал в питомнике, где продают кустарники в специальных контейнерах, готовые к высадке. Такие саженцы с закрытой корневой системой можно высаживать не только весной, но и в любой другой период во время вегетации.

Сажаем пузыреплодник

Как правильно посадить этот кустарник, чтобы он принялся и быстро пошел в рост:

1. Для посадки подготавливают яму, имеющую глубину и диаметр по 0,5 метра. На ее дно следует положить плодородный садовый грунт, торфяной субстрат или перегной.
2. Растение вместе с комом земли нужно осторожно достать из контейнера и поместить в подготовленную посадочную яму. При этом важно не повредить корни и стараться их не расправлять.
3. Яму с растением следует засыпать почвой, желательно плодородной, а саженец углубить на 5 см. Такой прием поможет кустарнику дать дополнительные новые отростки из спящих почек.
4. После посадки кусты пузыреплодника следует полить водой, в которую можно добавить Корневин, а затем необходимо замульчировать приствольный круг.

Молодой кустик сорта Коппертина (Coppertina)

При подобной обработке не будет образовываться поверхностная корка, а корни растения смогут получить достаточное количество воздуха.

Размножение

Этот кустарник размножается несколькими способами. У каждого из них есть свои особенности, на которые нужно обратить внимание.

Размножение семенами

Семена пузыреплодника дают хорошую всхожесть, однако при таком способе размножения нет гарантии сохранения всех сортовых особенностей. Велика вероятность, что у кустов, выращенных из семян, листья будут не красного, а зеленого цвета. По этой причине размножение семенами применяется крайне редко. Чтобы сохранить оригинальный окрас листьев, размножать пузыреплодник следует вегетативным способом.

Черенкование

Это самый простой и достаточно популярный метод, который дает быстрые и традиционно хорошие результаты. Для размножения черенкованием используют зеленые побеги, которые нарезают длиной 10-20 см. Важно, чтобы на каждом черенке было по несколько точек роста.

Черенкование проводят весной или в начале лета, до цветения кустарника:

1. Черенки отделяют, с нижней половины побега листья удаляют, а с верхней – наполовину укорачивают. Можно также поцарапать кожицу у основания черенков: считается, что в этих местах корешки образуются быстрее.
2. Основания полученных черенков замачивают в любом из стимуляторов корнеобразования. Этот этап не является обязательным, поскольку пузыреплодник может успешно укореняться и без стимуляции.
3. Побеги высаживают в речной песок или субстрат, состоящий из песка с торфом.
4. После посадки черенки следует полить и укрыть полиэтиленовой пленкой.
5. Последующий уход до начала зимы заключается в проветривании и систематическом увлажнении. Когда начнут появляться новые листья и побеги, что свидетельствует об успешном укоренении, пленку можно будет снять.
6. На зиму укорененные черенки следует укрыть, лучше всего еловым лапником. Основания стеблей мульчируют листвой, торфом или землей.

Весной молодую поросль можно будет высадить на постоянное место.

Деление куста

Молодые кусты растения

Этот способ менее популярен, чем черенкование, поскольку требует физических усилий, а число молодых растений, полученных в результате деления куста, очень ограничено. Один хорошо развитый взрослый куст можно разделить на 4-6 частей.

Следует проводить деление куста ранней весной, до наступления периода активного роста.

Возможно поведение этой процедуры осенью, после того, как кустарник отцветет, а до морозов останется минимум полтора месяца:

1. Под деленки готовят посадочные ямы, а стебли обрезают на уровне 60-70 см. Это пойдет пузыреплоднику только на пользу и будет дополнительным стимулом для появления новых побегов.
2. Растение аккуратно выкапывают, полностью извлекая из грунта корневую систему.
3. Куст делят таким образом, чтобы каждой части досталось хорошее корневище и одна мощная здоровая ветка длиной более 20 см.
4. Отделенные части нужно высадить на новое место как можно быстрее, чтобы не допустить пересыхания корней.
5. После этого растения поливают и мульчируют почву, чтобы избежать образования корки.

В первый год отделенные молодые растения нуждаются в укрытии на зиму.

Размножение отводками

Это достаточно распространенный способ размножения. Проводят такую процедуру в апреле, после того как на побегах появятся первые листочки, чтобы за период вегетации отводок успел укорениться.

Порядок размножения отводками таков:

1. С побега удаляют практически все листья, кроме тех, которые находятся на самой верхушке.
2. В земле под веткой делают канавку глубиной до 10-15 см.
3. Не отрезая подготовленный побег с куста, укладывают его в канавку, пришпиливают к земле и засыпают плодородным грунтом. Кончик побега необходимо оставить открытым, не засыпая землей.
4. Важно поливать почву в чересчур засушливые периоды, поскольку без увлажнения еще не совсем окрепшие корни могут погибнуть.
5. В конце осени молодые укоренившиеся кусты отделяют от взрослого растения. На зиму их следует укрыть еловым лапником.

Такая закладка отводков дает неплохие результаты, если для них выбрать сильные и здоровые побеги, направленные наружу.

Уход

Несмотря на свою высокую декоративность, пузыреплодник является очень неприхотливым растением. Он не требует какого-то особого ухода, однако нужно соблюдать некоторые условия: проводить регулярную обрезку, поливать растения и производить подкормки. При правильном выращивании кусты практически не будут поражаться болезнями и вредителями.

Куст красивой формы

Обрезка

Кустарник может расти до 30-40 лет, и в период вегетации развиваться достаточно быстрыми темпами. При создании благоприятных условий за один год пузыреплодник может дать прирост до 40 см, как высоту, так и в ширину.

В каких случаях растение нуждается в обрезке:

• для стимуляции активного роста побегов
• если кроне необходимо придать определенную форму

Процедуру обрезки пузыреплодник переносит безболезненно, и в дальнейшем достаточно быстро обрастает молодыми побегами.

Кроме формирующей обрезки проводят также и санитарную процедуру:

• санитарная обрезка проводится ранней весной. Ее цель состоит в удалении сломанных, засохших ветвей и подмерзших зимой побегов
• формирующая обрезка нужна для придания растению требуемой формы. Ее также проводят весной, еще до распускания почек на кустарнике, или осенью, после того как вегетативный период закончится

Существует два типа формирующей обрезки, которые можно применять для пузыреплодника:

• если целью обрезки является получение мощного и широкого куста, имеющего большое количество стволов, то ее проводят на уровне 40-50 см
• для придания растению так называемой «фонтанообразной» формы вырезают все тонкие побеги у основания куста, оставляя до пяти наиболее крепких и сильных ветвей. Эти побеги для стимуляции роста также дополнительно обрезают на высоте 1,5 метра

Полив

Частота полива кустарника зависит от нескольких факторов:

• вида почвы
• возраста растения
• климатической зоны, где оно произрастает

Если почвы в районе выращивания кустарника суглинистые, а летом возможны высокие температуры, то растению необходим регулярный полив (как минимум два раза в неделю). Однако следует избегать перелива и застоя воды. При переувлажнении куст пузыреплодника рискует подвергнуться заражению мучнистой росой. Это может привести к гибели растения.

Подкормка

Удобряя кустарник можно получить красивую и пынную его форму

Удобрение кустарника проводится дважды за сезон, в весенний и осенний период:

1. Ранней весной , при распускании почек, необходимо внести азотосодержащее удобрение.
2. Осенью его следует заменить на минеральную подкормку.

Растения хорошо отзываются на удобрение, формируя пышную густую крону.

Зимовка

К достоинствам этого кустарника относится хорошая зимостойкость. В условиях средней полосы пузыреплодник зимует без укрытия. При этом подмерзание верхушек побегов наблюдается лишь в редких случаях и во время очень морозных зим.

В укрытии на зимний период нуждаются только молодые побеги, укорененные в текущем году. Осенью, после обрезки, почву вокруг растений следует замульчировать слоем торфа высотой не менее 8 см. После этого молодые растения необходимо накрыть лапником.

Виды

Существует более 10 видов этого растения, однако в культуре на территории европейской части страны распространение получили всего два вида:

• (Physocarpus amurensis)
• (Physocarpus opulifolius)

Неприхотливые, декоративные и быстрорастущие пузыреплодники – прекрасный материал для живых изгородей. Они хорошо переносят обрезку, при помощи которой кустам можно легко придать желаемую форму. Пузыреплодник амурский используется в озеленении реже, а самое широкое применение находит в ландшафтном дизайне пузыреплодник калинолистный.

Амурский

Родина этого кустарника – смешанные леса Дальнего Востока, Северной Кореи и северной части Китая. Кусты растут в высоту до 3 метров. Крона имеет широкую шаровидную форму, зеленые листья и цветет небольшими белыми цветками, собранными в щитковидные соцветия.

Плоды представляют собой вздутые листовки, которые краснеют по мере созревания и придают растению привлекательный вид и декоративность осенью. Этот вид зимостоек.

Побеги полностью одревесневают. Растение используется как в одиночных, так и в групповых посадках, а также в качестве живых изгородей.

Это растение родом из Северной Америки, где произрастает в диком виде. Свое название кустарник получил из-за листьев, которые похожи на листья калины. Для декоративного украшения садового участка используют в основном две группы сортов пузыреплодника калинолистного: растения с красными листьями и с желтой листвой. В каждой из групп селекционерами выведено множество сортов, на которых стоит остановиться подробнее.

Самые популярные краснолистные сорта

Эта группа особо ценится садоводами и дизайнерами за высокие декоративные качества. Листва этих пузыреплодников, окрашенная в разные оттенки красных и пурпурных тонов, выглядит очень празднично. На фоне листьев эффектно смотрятся бело-розовые соцветия летом и гроздья ягод осенью.

Краснолистные сорта предпочитают открытые солнечные участки. В тени они теряют свою «изюминку», поскольку из-за недостатка солнечного цвета яркая пурпурная окраска листьев довольно быстро превращается в обычную зеленую.

«Дьяболо»

Диаболо

Пузыреплодник калинолистный Diabolo – эффектный сорт с темно-пурпурными глянцевыми листьями равномерной окраски и густой пышной кроной. Мощные кусты растут в высоту до 3 метров и нуждаются в обрезке. С наступлением осени цвет листьев не меняется. В тени листья становятся зелеными с легким пурпурным оттенком. Сорт награжден премией английского Королевского общества садоводов.

Саммер Вайн

Пузыреплодник Summer Wine имеет крону с раскидистыми ветвями и листву глубокого винного цвета с металлическим блеском. Куст растет в высоту на 2 метра. Весной цветет пышно, побеги сплошь покрываются бело-розовыми соцветиями. Этот сорт может хорошо переносить сильные морозы, поэтому пригоден для выращивания практически в любых регионах.

«Леди ин Ред»

Леди ин Ред

Растения этого сорта английской селекции имеют красноватую листву и бледно-розовые цветки. Пузыреплодник Lady in Red не превышает 1,8 метра в высоту. С наступлением осени нарядная листва сорта «Леди в красном» имеет свойство темнеть. Декоративные качества этого кустарника были отмечены наградой английского Королевского общества садоводов.

«Андре»

Андре

Пузыреплодник Andre имеет высоту не более 2 метров и такую же ширину. Листья, оранжево-красные при распускании, ближе к началу лета приобретают бронзово-красный оттенок. Они имеют до 10 см в длину и эллиптическую форму. Цветет этот сорт в июне кремово-белыми или бледно-розовыми цветками, на месте которых образуются ягоды ярко-красного оттенка.

«Шух»

Миднайт

Midnight – самый темный из всех сортов пузыреплодников. Листья взрослого растения имеют практически фиолетово-коричневый цвет. Цветки розово-белые. Куст средних размеров, достигает 1,8 метра в высоту и 1,5 метра в ширину. Осенью листья приобретают оранжево-красную расцветку.

«Литл Джокер»

Пузыреплодник Little Joker, выведенный селекционерами Нидерландов, относится к карликовым сортам. Высота куста от 50 см до 1 метра. Листья мелкие, бордово-пурпурные. С наступлением осени листва приобретает темный пурпурно-коричневый оттенок. Цветки розовато-белые, появляются в июне. При желании растения этого сорта можно выращивать в контейнерах.

Везикулы: определение и функция — видео и расшифровка урока

Функции и типы везикул

Везикулы выполняют множество функций внутри клетки. Поскольку везикулы состоят из двойного липидного слоя, они могут иметь полностью автономную среду, отличную от внутренней среды клетки. По существу, клетки используют четыре типа везикул. Это вакуоли, лизосомы, транспортные везикулы и секреторные везикулы.

Вакуоли — это пузырьки, содержащие в основном воду. Они способны регулировать давление и уровень воды в клетке, контролировать условия внутренней среды. Известно, что растительные клетки имеют крупные вакуоли. На этой диаграмме изображена большая вакуоль внутри растительной клетки:

Лизосомы представляют собой клеточные везикулы, содержащие пищеварительные ферменты. Лизосомы используются клетками для расщепления пищевых частиц и избавления от ненужных клеточных материалов.

Транспортные везикулы перемещают молекулы внутри клеток. Все клетки производят белки и требуют, чтобы они функционировали. Белки образуются на рибосомах. Когда белки произведены, они упаковываются в транспортные везикулы и перемещаются в аппарат Гольджи, где их можно модифицировать и сортировать перед отправкой в ​​конечный пункт назначения в клетке.

Секреторные везикулы содержат материалы, которые должны секретироваться в клетку. Многие клетки производят химические вещества, а затем хранят их в секреторных пузырьках.Когда приходит время, эти пузырьки выделяют химическое вещество в клетку.

Итоги урока

Давайте повторим.

Везикулы представляют собой небольшие клеточные контейнеры, выполняющие различные функции. Их можно использовать для перемещения молекул, выделения веществ, переваривания материалов или регулирования давления в клетке. Поскольку везикулы состоят из двойного липидного слоя, они могут иметь полностью автономную среду, отличную от внутренней среды клетки.

Существует четыре основных типа везикул, используемых клетками.Это вакуолей , везикулы, содержащие в основном воду; лизосомы клеточные везикулы, содержащие пищеварительные ферменты; транспортные везикулы , которые перемещают молекулы внутри клетки; и секреторных везикул , содержащих вещества, которые должны секретироваться в клетку.

Типы везикул

Вакуоли	Лизосомы	Транспорт	Секретарь
Содержат в основном воду и регулируют давление воды в камере	Содержат пищеварительные ферменты для избавления от клеточных отходов и расщепления пищевых частиц	Перемещать молекулы внутри клетки	Содержат химические вещества для выделения в клетку при необходимости

Результаты обучения

Когда вы закончите, вы сможете:

• Вспомнить, что такое везикулы, их строение и функции
• Перечислите четыре типа пузырьков, используемых клетками, и укажите их назначение

Везикулы

Везикулы могут различаться по типу и функциям в зависимости от их структуры и окружающей среды.Везикулы образуются естественным образом во время различных процессов, таких как секреция, поглощение или транспортировка материалов. Приведенные ниже вопросы помогут вам лучше понять везикулы и их функции. Раздел обсуждения содержит более подробную информацию для проверки вашего ответа на вопросы.

Вопросы

1. Как везикулы транспортируют вещества?

2. Какой тип везикул участвует в расщеплении токсического соединения, такого как перекись водорода?

3.Везикулы какого типа содержат в основном воду? Почему?

4. Везикулы могут образовываться в ответ на такие события, как аллергические реакции или воздействие ядовитого плюща. Какова функция пузырьков в этих случаях?

Обсуждение

1. Везикулы способны сливаться с материалом мембраны, поскольку они состоят из фосфолипидов. Это позволяет им перемещать вещества по клетке и к мембране.

2. Пероксисомы представляют собой везикулы, расщепляющие токсичные соединения внутри клетки с помощью кислорода.Перекись водорода будет разбита на молекулы воды и кислорода. Интересно отметить, что перекись водорода вырабатывается пероксисомами, когда они расщепляют другие токсичные соединения.

3. Вакуоли содержат в основном воду. Это используется для регулирования осмотического давления и помогает в хранении питательных веществ.

4. Функция в этих случаях больше похожа на реакцию на триггер, такой как воздействие яда. Это ответ, который будет метаболизировать вещество, образующееся в результате реакции, а также может отвечать за транспортировку других соединений в пораженный участок.

Доставка РНК внеклеточными везикулами в клетки млекопитающих и ее применение

1.

Danielson, K.M. et al. Плазменные циркулирующие внеклеточные РНК при ремоделировании левого желудочка после инфаркта миокарда. EBioMedicine https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2018.05.013 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

2.

Varcianna, A. et al. Микро-РНК, секретируемые внеклеточными везикулами, происходящими из астроцитов, вызывают дегенерацию нейронной сети при БАС C9orf72. EBioMedicine https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2018.11.067 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

3.

Abels, E. R. et al. Связанное с глиобластомой перепрограммирование микроглии опосредуется функциональным переносом внеклеточной миР-21. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2019.08.036 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

4.

Хосино, А. и др. Интегрины экзосом опухоли определяют органотропное метастазирование. Природа https://doi.org/10.1038/nature15756 (2015). В этой статье показано, что внеклеточные везикулы, полученные из опухолевых клеток, поглощаются специфическими клетками-реципиентами в отдаленных органах, посредством чего они подготавливают нишу, которая способствует метастазированию опухолевых клеток .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

5.

Матье, М., Мартин-Жолар, Л., Лавье, Г. и Тери, К. Особенности секреции и поглощения экзосом и других внеклеточных везикул для межклеточной коммуникации. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/s41556-018-0250-9 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

6.

Тери, К. и др. Минимальная информация для исследований внеклеточных везикул 2018 (MISEV2018): заявление о позиции международного сообщества по внеклеточным везикулам и обновление рекомендаций MISEV2014. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2018.1535750 (2018). Это обширный обзор современных методов выделения, очистки и анализа внеклеточных везикул .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

7.

Van Deun, J. & Hendrix, A. Отслеживается ли ваша статья EV-TRACK? Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2017.1379835 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

8.

Lee, K. et al. Мультиплексное профилирование одиночных внеклеточных везикул. СКД Nano https://doi.org/10.1021/acsnano.7b07060 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

9.

Kowal, J. et al. Протеомное сравнение определяет новые маркеры для характеристики гетерогенных популяций подтипов внеклеточных везикул. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1521230113 (2016 г.). В этом исследовании различные подтипы внеклеточных везикул разделяют путем фракционирования кондиционированной среды из культур дендритных клеток человека путем дифференциального центрифугирования с последующим ультрацентрифугированием в градиенте плотности, а также иммуноаффинной изоляцией с помощью протеомного анализа, показывая, что эндосомальные белки обогащены небольшими внеклеточными везикулами, которые также несут тетраспанин CD9 с CD81 и CD63 или без них, что указывает на подтипы экзосом .

Артикул пабмед Google Scholar

10.

Jeppesen, D.K. et al. Переоценка состава экзосом. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.02.029 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

11.

Murillo, O.D. et al. Анализ атласа exRNA выявляет различные типы внеклеточных РНК-грузов и их носителей, присутствующих в биологических жидкостях человека. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.02.018 (2019). Неконтролируемый деконволюционный анализ более 2000 профилей секвенирования малых РНК, полученных из образцов эксРНК из пяти биологических жидкостей человека (спинномозговая жидкость, плазма, слюна, сыворотка и моча), выявил шесть типов грузов со значительными различиями между образцами, которые разрешаются с помощью деконволюции. .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

12.

Вей, З., Батагов, А. О., Картер, Д. Р. Ф. и Кричевский, А. М. РНК эмбриональной бычьей сыворотки взаимодействует с внеклеточной культурой клеток. РНК. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep31175 (2016 г.). Это исследование подтверждает наличие кодирующих и малых некодирующих РНК, таких как микроРНК, фрагменты рРНК и мяРНК, во внеклеточных везикулах эмбриональной бычьей сыворотки, используемой в клеточной культуре .

Артикул пабмед Google Scholar

13.

Lehrich, B.M., Liang, Y. & Fiandaca, M.S. Ответ на «Технические подходы к уменьшению интерференции РНК, полученной из эмбриональной телячьей сыворотки, при анализе внеклеточной везикулярной РНК из культивируемых клеток». Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2019.1599681 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

14.

Шринивасан, С. и др. Секвенирование малых РНК в различных биологических жидкостях определяет оптимальные методы выделения exRNA. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.03.024 (2019). Систематическое профилирование секвенирования малых РНК, выполненное на эксРНК, выделенных десятью методами выделения РНК в пяти биологических жидкостях человека, показывает существенные различия между методами и биологическими жидкостями, при этом различия в относительной доле профилей этих компонентов вносят основной вклад к варианту .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

15.

Карттунен, Дж. и др. Выделение внеклеточных везикул на основе преципитации из плазмы крысы с соосаждением микроРНК без везикул. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2018.1555410 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

16.

Van Deun, J. et al. Влияние различных методов выделения внеклеточных везикул на профилирование нижестоящей РНК. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v3.24858 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

17.

Vickers, K.C., Palmisano, B.T., Shoucri, B.M., Shamburek, R.D. & Remaley, A.T. МикроРНК транспортируются в плазме и доставляются в клетки-реципиенты с помощью липопротеинов высокой плотности. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/ncb2210 (2011 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

18.

Арройо, Дж. Д. и др. Комплексы Argonaute2 несут популяцию циркулирующих микроРНК, не зависящую от везикул в плазме человека. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.10108 (2011 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

19.

Guerreiro, E.M. et al. Эффективное выделение внеклеточных везикул путем сочетания модификаций клеточных сред, ультрафильтрации и эксклюзионной хроматографии. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0204276 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

20.

Zhang, H. et al. Идентификация отдельных наночастиц и подмножеств внеклеточных везикул с помощью фракционирования асимметричного потока в полевом потоке. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/s41556-018-0040-4 (2018 г.). В этом исследовании идентифицирована популяция секретируемых немембранных наночастиц, называемых «экзомерами» (примерно 35 нм), которые обладают различными биологическими функциями по сравнению с другими типами внеклеточных везикул .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

21.

Zhang, Q. et al. Перенос функционального груза в экзомерах. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2019.01.009 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

22.

Шах, Р., Патель, Т. и Фридман, Дж. Э. Циркулирующие внеклеточные везикулы при заболеваниях человека. Н. англ. Дж. Мед. https://doi.org/10.1056/NEJMra1704286 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

23.

Valadi, H. et al. Опосредованный экзосомами перенос мРНК и микроРНК представляет собой новый механизм генетического обмена между клетками. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/ncb1596 (2007 г.). Показано, что внеклеточные везикулы доставляют функциональную мРНК и микроРНК в клетки-реципиенты .

Артикул пабмед Google Scholar

24.

Skog, J. et al. Микровезикулы глиобластомы транспортируют РНК и белки, которые способствуют росту опухоли и обеспечивают диагностические биомаркеры. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/ncb1800 (2008 г.). Показано, что внеклеточные везикулы доставляют функциональную мРНК в клетки-реципиенты и содержат мутантную РНК из опухолей головного мозга в сыворотке .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

25.

Экстрем, К. и др. Характеристика мРНК и микроРНК в экзосомах, полученных из тучных клеток человека, и их перенос в другие тучные клетки и клетки-предшественники CD34 крови. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v1i0.18389 (2012).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

26.

Huang, X. et al. Характеристика экзосомальных РНК, полученных из плазмы человека, путем глубокого секвенирования. BMC Genomics https://doi.org/10.1186/1471-2164-14-319 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

27.

Van Balkom, BWM, Eisele, AS, Michiel Pegtel, D., Bervoets, S. & Verhaar, MC Количественный и качественный анализ малых РНК в эндотелиальных клетках и экзосомах человека дает представление о локализованном процессинге и деградации РНК. и сортировка. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v4.26760 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

28.

Chakrabortty, S.K., Prakash, A., Nechooshtan, G., Hearn, S. & Gingeras, T.R. Опосредованный внеклеточными везикулами перенос обработанной и функциональной РНК RNY5. РНК https://doi.org/10.1261/rna.053629.115 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

29.

Clancy, J.W., Zhang, Y., Sheehan, C. & D’Souza-Schorey, C. Ось ARF6-exportin-5 доставляет груз пре-миРНК в опухолевые микровезикулы. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/s41556-019-0345-y (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

30.

Melo, S.A. et al. Раковые экзосомы осуществляют клеточно-независимый биогенез микроРНК и способствуют онкогенезу. Раковая ячейка https://doi.org/10.1016/j.ccell.2014.09.005 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

31.

Squadrito, M.L. et al. Эндогенные РНК модулируют сортировку микроРНК в экзосомы и перенос к акцепторным клеткам. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2014.07.035 (2014).

Артикул пабмед Google Scholar

32.

Карими Н.и другие. Детальный анализ протеома внеклеточных везикул плазмы после отделения от липопротеинов. Сотовый. Мол. Жизнь наук. https://doi.org/10.1007/s00018-018-2773-4 (2018 г.). Это исследование демонстрирует, что путем сочетания ультрацентрифугирования в градиенте плотности и эксклюзионной хроматографии можно разделить внеклеточные везикулы и липопротеиновые частицы .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

33.

Xu, R., Greening, D.W., Rai, A., Ji, H. & Simpson, R.J. Высокоочищенные экзосомы и пролитые микровезикулы, выделенные из линии клеток рака толстой кишки человека LIM1863 путем последовательной центрифужной ультрафильтрации, отличаются биохимически и функционально. Методы https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2015.04.008 (2015).

Артикул пабмед Google Scholar

34.

McKenzie, A.J. et al. Передача сигналов KRAS-MEK контролирует сортировку Ago2 в экзосомы. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2016.03.085 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

35.

Ли, М. и др. Анализ содержания РНК в экзосомах, полученных из сыворотки крови и мочи, и ее потенциала в качестве биомаркеров. Филос. Транс. Р. Соц. Б биол. науч. https://doi.org/10.1098/rstb.2013.0502 (2014 г.).

Артикул Google Scholar

36.

Ван, Дж. и др. Экспрессия кольцевой РНК в экзосомах, полученных из клеток рака молочной железы и пациентов. Эпигеномика https://doi.org/10.2217/epi-2018-0111 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

37.

Zhang, H. et al. ЦирРНК экзосом, секретируемая из адипоцитов, способствует росту гепатоцеллюлярной карциномы путем нацеливания на USP7, связанный с деубиквитинированием. Онкоген https://doi.org/10.1038/s41388-018-0619-z (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

38.

Zhang, H. et al. Экзосомальная circRNA, полученная из опухоли желудка, способствует потемнению белой жировой ткани путем нацеливания на путь miR-133/PRDM16. Междунар. J. Рак https://doi.org/10.1002/ijc.31977 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

39.

He, J. et al. Экзосомальная кольцевая РНК как биомаркерная платформа для ранней диагностики иммуноопосредованного демиелинизирующего заболевания. Перед. Жене. https://doi.org/10.3389/fgene.2019.00860 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

40.

Fanale, D., Taverna, S., Russo, A. & Bazan, V. Циркулярная РНК в экзосомах. Доп. Эксп. Мед. биол. https://doi.org/10.1007/978-981-13-1426-1_9 (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

41.

Сорк Х. и др. Гетерогенность и взаимодействие транскриптома и протеома малых РНК внеклеточных везикул. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-018-28485-9 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

42.

Baglio, S. R. et al. Человеческие костномозговые и жировые мезенхимальные стволовые клетки секретируют экзосомы, обогащенные различными видами микроРНК и тРНК. Рез. стволовых клеток. тер. https://doi.org/10.1186/s13287-015-0116-z (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

43.

Guduric-Fuchs, J. et al. Селективный экспорт, опосредованный внеклеточными везикулами, перекрывающегося набора микроРНК из нескольких типов клеток. BMC Genomics https://doi.org/10.1186/1471-2164-13-357 (2012).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

44.

Миттельбрунн, М. и др. Однонаправленный перенос экзосом, нагруженных микроРНК, от Т-клеток к антигенпрезентирующим клеткам. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms1285 (2011 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

45.

Pigati, L. et al. Селективное высвобождение видов микроРНК из нормальных и злокачественных эпителиальных клеток молочной железы. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0013515 (2010 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

46.

Nolte’T Hoen, E. N. M. et al. Глубокое секвенирование РНК из везикул, происходящих из иммунных клеток, обнаруживает селективное включение биотипов малых некодирующих РНК с потенциальными регуляторными функциями. Рез. нуклеиновых кислот. https://doi.org/10.1093/nar/gks658 (2012 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

47.

Chiou, N. T., Kageyama, R. & Ansel, K. M. Избирательный экспорт во внеклеточные везикулы и функция фрагментов тРНК во время активации Т-клеток. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.11.073 (2018). Специфические фрагменты тРНК обнаружены во внеклеточных везикулах, которые влияют на активацию Т-клеток .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

48.

Мацудзаки Дж. и Очия Т.Внеклеточные микроРНК и окислительный стресс при повреждении печени: систематический мини-обзор. Дж. Клин. Биохим. Нутр. https://doi.org/10.3164/jcbn.17-123 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

49.

Beninson, L.A. et al. Воздействие острого стрессора модифицирует белок теплового шока 72 (Hsp72) и микроРНК (миР-142-5p и миР-203), ассоциированный с экзосомами плазмы. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0108748 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

50.

млн лет, К. и др. Умеренные физические нагрузки усиливают высвобождение и функцию экзосом эндотелиальных клеток-предшественников. Мед. науч. Спортивное упражнение. https://doi.org/10.1249/MSS.0000000000001672 (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

51.

Д’Суза, Р. Ф.и другие. Циркуляторная экзосомальная микроРНК после интенсивных упражнений не связана с количеством микроРНК в мышцах и плазме. утра. Дж. Физиол. Эндокринол. Метаб. https://doi.org/10.1152/ajpendo.00138.2018 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

52.

Aoi, W. et al. Обогащенная мышцами микроРНК миР-486 снижается в кровотоке в ответ на физические упражнения у молодых мужчин. Перед. Физиол. https://doi.org/10.3389/fphys.2013.00080 (2013).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

53.

Van Niel, G., D’Angelo, G. & Raposo, G. Проливая свет на клеточную биологию внеклеточных везикул. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/nrm.2017.125 (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

54.

Поллет Х., Конрард Л., Клоос А.S. & Tyteca, D. Липидные домены плазматической мембраны как платформы для биогенеза и выделения пузырьков? Биомолекулы https://doi.org/10.3390/biom8030094 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

55.

Миттельбрунн, М., Висенте-Мансанарес, М. и Санчес-Мадрид, Ф. Организация поляризованной доставки экзосом в синапсы. Трафик https://doi.org/10.1111/tra.12258 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

56.

Синха, С. и др. Кортактин способствует секреции экзосом, контролируя динамику разветвленного актина. J. Cell Biol. https://doi.org/10.1083/jcb.201601025 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

57.

Hoshino, D. et al. Секреция экзосом усиливается за счет инвадоподии и вызывает инвазивное поведение. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2013.10.050 (2013).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

58.

Minciacchi, V.R., Freeman, M.R. & Di Vizio, D. Внеклеточные везикулы при раке: экзосомы, микровезикулы и новая роль крупных онкосом. Семин. Сотовый Дев. биол. https://doi.org/10.1016/j.semcdb.2015.02.010 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

59.

Михан, Б., Рак, Дж. и Ди Визио, Д. Онкосомы — большие и малые: что это такое, откуда они взялись? Дж.Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v5.33109 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

60.

Карузо С. и Пун И. К. Х. Внеклеточные везикулы апоптотического происхождения: больше, чем просто мусор. Перед. Иммунол. https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01486 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

61.

Дас, С. и др. Консорциум по взаимодействию с внеклеточной РНК: создание фундаментальных знаний и технологий для исследования внеклеточной РНК. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.03.023 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

62.

Di Liegro, C.M., Schiera, G. & Di Liegro, I. Регуляция транспорта мРНК, локализация и трансляция в нервной системе млекопитающих (обзор). Междунар. Дж. Мол. Мед. https://doi.org/10.3892/ijmm.2014.1629 (2014).

Артикул пабмед Google Scholar

63.

Элискович К., Буксбаум А. Р., Кац З. Б. и Сингер Р. Х. мРНК в движении: путь к своей биологической судьбе. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.R113.452094 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

64.

Герстбергер С., Хафнер М., Аскано М. и Тушл Т. Эволюционная консервация и экспрессия РНК-связывающих белков человека и их роль в генетических заболеваниях человека. Доп. Эксп. Мед. биол. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-1221-6_1 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

65.

Ragusa, M. et al. Распределение асимметричной РНК среди клеток и их секретируемых экзосом: биомедицинское значение и соображения по диагностическим применениям. Перед. Мол. Бионауч. https://doi.org/10.3389/fmolb.2017.00066 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

66.

Матеску, Б. и др. Препятствия и возможности в функциональном анализе РНК внеклеточных везикул — документ с изложением позиции ISEV. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2017.1286095 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

67.

Косака Н. и др. Секреторные механизмы и межклеточный перенос микроРНК в живых клетках. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.107821 (2010 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

68.

Хворова А., Квак Ю. Г., Тамкун М., Майерфельд И., Ярус М. РНК, связывающие и изменяющие проницаемость фосфолипидных мембран. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.96.19.10649 (1999).

Артикул пабмед Google Scholar

69.

Янас Т., Янас М.М., Сапон К. и Янас Т. Механизмы загрузки РНК в экзосомы. ФЭБС Письмо. https://doi.org/10.1016/j.febslet.2015.04.036 (2015 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

70.

Явелло, А. и др. Роль Alix в упаковке микроРНК во время биогенеза внеклеточных везикул. Междунар. Дж. Мол. Мед. https://doi.org/10.3892/ijmm.2016.2488 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

71.

Хагивара, К., Кацуда, Т., Гэйлхауст, Л., Косака, Н. и Очия, Т. Участие аннексина А2 в привлечении микроРНК во внеклеточные везикулы. ФЭБС Письмо. https://doi.org/10.1016/j.febslet.2015.11.036 (2015 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

72.

Отаке К., Камигути Х. и Хирозане Ю. Идентификация биомаркеров бокового амиотрофического склероза путем комплексного анализа экзосомальных мРНК в спинномозговой жидкости человека. БМС Мед. Геномика https://doi.org/10.1186/s12920-019-0473-z (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

73.

Teng, Y. et al. Опосредованная MVP экзосомальная сортировка миР-193a способствует прогрессированию рака толстой кишки. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms14448 (2017 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

74.

Statello, L. et al. Идентификация РНК-связывающих белков в экзосомах, способных взаимодействовать с различными типами РНК: RBP-облегченный транспорт РНК в экзосомы. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0195969 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

75.

Мукерджи, К. и др. Обратимое связывание HuR-микроРНК контролирует внеклеточный экспорт miR-122 и усиливает реакцию на стресс. EMBO Rep. https://doi.org/10.15252/embr.201541930 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

76.

Villarroya-Beltri, C. et al. Сумоилированный hnRNPA2B1 контролирует сортировку микроРНК в экзосомы посредством связывания со специфическими мотивами. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms3980 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

77.

Shurtleff, MJ, Temoche-Diaz, MM, Karfilis, KV, Ri, S. & Schekman, R. Y-box белок 1 необходим для сортировки микроРНК в экзосомы в клетках и в бесклеточной реакции . Элиф https://doi.org/10.7554/eLife.19276 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

78.

Яншина Д.Д. и соавт. Структурные особенности взаимодействия 3′-нетранслируемой области мРНК, содержащей экзосомальные РНК-специфические мотивы, с YB-1, потенциальным медиатором сортировки мРНК. Biochimie https://doi.org/10.1016/j.biochi.2017.11.007 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

79.

Косинова О.А. и др. Цитозольные YB-1 и NSUN2 являются единственными белками, распознающими специфические мотивы, присутствующие в мРНК, обогащенных экзосомами. Биохим. Биофиз. Acta https://doi.org/10.1016/j.bbapap.2017.03.010 (2017).

Артикул Google Scholar

80.

Сантанджело, Л. и др. РНК-связывающий белок SYNCRIP является компонентом экзосомального механизма гепатоцитов, контролирующего сортировку микроРНК. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2016.09.031 (2016).

Артикул пабмед Google Scholar

81.

Хобор, Ф. и др. Скрытый РНК-связывающий домен обеспечивает распознавание Syncrip и экзосомальное разделение miRNA-мишеней. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-018-03182-3 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

82.

Temoche-Diaz, M.M. et al. Различные механизмы сортировки микроРНК на подтипы внеклеточных везикул, происходящих из раковых клеток. Элиф https://doi.org/10.7554/eLife.47544 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

83.

Эшли, Дж. и др. Gag-белок Arc1, подобный ретровирусу, связывает РНК и перемещается через синаптические бутоны. Cell https://doi.org/10.1016/j.cell.2017.12.022 (2018). В этой статье показано, что Arc1 мухи образует капсидоподобные структуры, которые могут связывать ее мРНК и функционально переносить ее в клетки-реципиенты, играя роль в синаптической пластичности .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

84.

Leidal, A.M. et al. Механизм конъюгации LC3 определяет загрузку РНК-связывающих белков во внеклеточные везикулы. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/s41556-019-0450-y (2020).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

85.

Болукбаши, М.Ф. и др. миР-1289 и последовательность, подобная «зипкоду», обогащают мРНК в микровезикулах. Мол. тер. Нуклеиновые кислоты https://doi.org/10.1038/mtna.2011.2 (2012).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

86.

Shurtleff, M.J. et al. Широкая роль YBX1 в определении состава малых некодирующих РНК экзосом. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1712108114 (2017 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

87.

Ахади, А., Бреннан, С., Кеннеди, П. Дж., Хутвагнер, Г. и Тран, Н. Длинные некодирующие РНК, содержащие исходные области микроРНК, обогащены экзосомами рака предстательной железы. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep24922 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

88.

Liu, X. et al. Система наблюдения за предшественниками микроРНК в контроле качества синтеза микроРНК. Мол. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.molcel.2014.07.017 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

89.

Gibbings, D.J., Ciaudo, C., Erhardt, M. & Voinnet, O. Мультивезикулярные тельца связаны с компонентами эффекторных комплексов миРНК и модулируют активность миРНК. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/ncb1929 (2009 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

90.

Мерфи, Д. Э. и др. Терапевтические средства на основе внеклеточных везикул: естественное и искусственное нацеливание и транспортировка. Экспл. Мол. Мед. https://doi.org/10.1038/s12276-019-0223-5 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

91.

György, B., Hung, M.E., Breakefield, X.O. & Leonard, J.N. Терапевтическое применение внеклеточных везикул: клинические перспективы и открытые вопросы. год.Преподобный Фармакол. Токсикол. https://doi.org/10.1146/annurev-pharmtox-010814-124630 (2015).

Артикул пабмед Google Scholar

92.

Малкахи, Л. А., Пинк, Р. К. и Картер, Д. Р. Ф. Пути и механизмы захвата внеклеточных везикул. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v3.24641 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

93.

Панасюк М., Рыхловски М., Деревонко Н. и Беньковска-Шевчик К. Туннелирование нанотрубок как новый путь межклеточного распространения вирусов герпеса. Дж. Вирол. https://doi.org/10.1128/jvi.00090-18 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

94.

Rustom, A., Saffrich, R., Markovic, I., Walther, P. & Gerdes, H.H. Нанотрубчатые магистрали для межклеточного транспорта органелл. Наука https://doi.org/10.1126/science.10

(2004). В этой статье показано, что нанотубулярные структуры формируются между клетками и облегчают перенос внеклеточных везикул, демонстрируя другой метод межклеточной коммуникации .

Артикул пабмед Google Scholar

95.

Хаймович Г. и др. Межклеточный перенос мРНК через мембранные нанотрубкообразные расширения в клетках млекопитающих. Проц.Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1706365114 (2017 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

96.

Шукла Д. и др. Новая роль 3-O-сульфатированного гепарансульфата в проникновении вируса простого герпеса 1. Cell https://doi.org/10.1016/S0092-8674(00)80058-6 (1999).

Артикул пабмед Google Scholar

97.

Кристиансон, Х.C., Svensson, KJ, Van Kuppevelt, TH, Li, JP и Belting, M. Экзосомы раковых клеток зависят от протеогликанов гепарансульфата клеточной поверхности для их интернализации и функциональной активности. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1304266110 (2013 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

98.

Hurwitz, S.N. & Meckes, D.G. Интегрины внеклеточных везикул различают уникальные виды рака. Протеомы https://doi.org/10.3390/proteomes7020014 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

99.

Miyanishi, M. et al. Идентификация Tim4 как рецептора фосфатидилсерина. Природа https://doi.org/10.1038/nature06307 (2007).

Артикул пабмед Google Scholar

100.

Иверсен, Т. Г., Скотланд, Т.и Сандвиг, К. Эндоцитоз и внутриклеточный транспорт наночастиц: современные знания и необходимость будущих исследований. Nano Today https://doi.org/10.1016/j.nantod.2011.02.003 (2011).

Артикул Google Scholar

101.

Хунг, М. Э. и Леонард, Дж. Н. Платформа для активной загрузки грузовой РНК для выяснения ограничивающих шагов в доставке, опосредованной EV. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v5.31027 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

102.

Торибио, В. и др. Разработка количественного метода измерения потребления ЭВ. науч. Респ. 9 , 10522 (2019).

Артикул Google Scholar

103.

Bala, S. et al. Биораспределение и функция внеклеточной микроРНК-155 у мышей. науч. Респ. https://doi.org/10.1038/srep10721 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

104.

Mannerström, B. et al. Примеси внеклеточной малой некодирующей РНК в эмбриональной бычьей сыворотке и бессывороточных средах. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-019-41772-3 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

105.

Gaurivaud, P. et al. Микоплазмы не являются исключением при высвобождении внеклеточных везикул: пересмотр старых концепций. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0208160 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

106.

Hardy, M.P. et al. Апоптотические эндотелиальные клетки высвобождают небольшие внеклеточные везикулы, нагруженные иммуностимулирующими вирусоподобными РНК. науч. Респ. https://doi.org/10.1038/s41598-019-43591-y (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

107.

Liu, C.G., Song, J., Zhang, Y.Q. & Wang, P.C. МикроРНК-193b является регулятором белка-предшественника амилоида в крови и спинномозговой жидкости. Экзосомальная микроРНК-193b, полученная из спинномозговой жидкости, является биомаркером болезни Альцгеймера. Мол. Мед. Отчет https://doi.org/10.3892/mmr.2014.2484 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

108.

Морель, Л. и др. Нейрональная экзосомальная mirna-зависимая трансляционная регуляция астроглиального транспортера глутамата glt1. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.M112.410944 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

109.

Zhang, L. et al. Индуцированная микросредой потеря PTEN экзосомальной микроРНК стимулирует рост метастазов в головной мозг. Природа https://doi.org/10.1038/nature15376 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

110.

Chen, C.C. et al. Выяснение миграции экзосом через модель гематоэнцефалического барьера in vitro. Сотовый. Мол. биоинж. https://doi.org/10.1007/s12195-016-0458-3 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

111.

Александр М. и др. МикроРНК, доставляемые экзосомами, модулируют воспалительную реакцию на эндотоксин. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms8321 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

112.

Wei, Z. et al. Кодирующий и некодирующий ландшафт внеклеточной РНК, высвобождаемой стволовыми клетками глиомы человека. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-017-01196-x (2017 г.). Фильтрация по размеру кондиционированной среды из культур стволовых клеток глиобластомы проводится совместно с секвенированием РНК и показывает, что: микровезикулы обогащены мРНК и наиболее точно отражают клеточный транскриптом, экзосомы имеют самую высокую долю микроРНК, а рибонуклеопротеиды обогащены тРНК и Y РНК .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

113.

Hoen, E.N., Cremer, T., Gallo, R.C. & Margolis, L.B. Внеклеточные везикулы и вирусы: близкие родственники? Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1605146113 (2016 г.).

Артикул Google Scholar

114.

Lai, C.P. et al. Визуализация и отслеживание доставки внеклеточных пузырьков опухоли и трансляции РНК с использованием мультиплексированных репортеров. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms8029 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

115.

Ridder, K. et al. Опосредованный внеклеточными везикулами перенос генетической информации между системой кроветворения и мозгом в ответ на воспаление. PLoS Биол. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1001874 (2014 г.). С использованием технологии Cre– loxP in vivo продемонстрирован межклеточный перенос и трансляция мРНК Cre внеклеточных везикул .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

116.

Zomer, A. et al. Визуализация in vivo показывает опосредованное внеклеточными везикулами фенокопирование метастатического поведения. Cell https://doi.org/10.1016/j.cell.2015.04.042 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

117.

Де Ла Куэста, Ф. и др. Взаимодействия внеклеточных везикул между гладкомышечными клетками легочной артерии и эндотелием во время избыточной передачи сигналов TGF-β: значение для ремоделирования сосудов ЛАГ. Сотовый общ. Сигнал. https://doi.org/10.1186/s12964-019-0449-9 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

118.

Maugeri, M. et al. Связь между эндосомальным побегом LNP-мРНК и загрузкой в ​​EV для транспорта в другие клетки. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-019-12275-6 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

119.

Usman, W.M. et al. Эффективная доставка РНК-препаратов с использованием внеклеточных везикул эритроцитов. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-018-04791-8 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

120.

Wang, J. et al. CREB повышает экспрессию длинной некодирующей РНК и HULC посредством взаимодействия с микроРНК-372 при раке печени. Рез. нуклеиновых кислот. https://doi.org/10.1093/nar/gkq285 (2010 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

121.

Wang, Y. et al. Эндогенная губчатая микроРНК lincRNA-RoR регулирует Oct4, Nanog и Sox2 в самообновлении эмбриональных стволовых клеток человека. Дев. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.devcel.2013.03.002 (2013).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

122.

Гонг К. и Макват Л.E. lncRNAs трансактивируют STAU1-опосредованный распад мРНК путем дуплексирования с 39 UTR через Alu-элементы. Природа https://doi.org/10.1038/nature09701 (2011).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

123.

Лонг Ю., Ван Х., Юманс Д. Т. и Чех Т. Р. Как днРНК регулируют транскрипцию? науч. Доп. https://doi.org/10.1126/sciadv.aao2110 (2017 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

124.

Kenneweg, F. et al. Длинные некодирующие РНК-обогащенные везикулы, секретируемые гипоксическими кардиомиоцитами, вызывают сердечный фиброз. Мол. тер. Нуклеиновые кислоты https://doi.org/10.1016/j.omtn.2019.09.003 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

125.

Chen, F. et al. Внеклеточная упаковка везикул, стабилизирующая lncRNA HIF-1α из ассоциированных с опухолью макрофагов, регулирует аэробный гликолиз клеток рака молочной железы. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/s41556-019-0299-0 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

126.

Maute, R.L. et al. МикроРНК, полученная из тРНК, модулирует пролиферацию и реакцию на повреждение ДНК и подавляется при В-клеточной лимфоме. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1206761110 (2013 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

127.

Goodarzi, H. et al. Фрагменты, происходящие из эндогенной тРНК, подавляют прогрессирование рака молочной железы за счет смещения YBX1. Cell https://doi.org/10.1016/j.cell.2015.02.053 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

128.

Drydonks, T.A.P. et al. Иммунные стимулы формируют небольшой некодирующий транскриптом внеклеточных везикул, высвобождаемых дендритными клетками. Сотовый. Мол. Жизнь наук. https://doi.org/10.1007/s00018-018-2842-8 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

129.

Rimer, J.M. et al. Функция дальнего действия секретируемых малых ядрышковых РНК, управляющих 2-О-метилированием. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.RA118.003410 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

130.

Цацаронис Ю.А., Франч-Арройо С., Реш У. и Шарпантье Э. РНК внеклеточных везикул: универсальный медиатор микробной коммуникации? Тенденции микробиол. https://doi.org/10.1016/j.tim.2018.02.009 (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

131.

Schorey, J. & Cheng, Y. Внеклеточные везикулы способствуют иммунитету хозяина во время инфекции M.tuberculosis посредством распознавания РНК. bioRxiv https://doi.org/10.1101/346254 (2018 г.).

Артикул Google Scholar

132.

Baglio, S. R. et al. Обнаружение латентной инфекции EBV посредством экзосомального переноса 5’pppRNA. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1518130113 (2016 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

133.

Nabet, B.Y. et al. Неэкранирование экзосомной РНК связывает активацию стромы с передачей сигналов рецептора распознавания образов при раке. Cell https://doi.org/10.1016/j.cell.2017.06.031 (2017). Показано, что эксРНК индуцирует активацию рецептора распознавания патогенов во внеклеточных везикулярных связях между фибробластами и клетками рака молочной железы .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

134.

Boelens, M.C. et al. Перенос экзосом из стромальных клеток в клетки рака молочной железы регулирует пути резистентности к терапии. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2014.09.051 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

135.

Lässer, C. et al. Две различные сигнатуры внеклеточной РНК, высвобождаемые одним типом клеток, идентифицированные с помощью микрочипа и секвенирования следующего поколения. РНК Биол. https://doi.org/10.1080/15476286.2016.1249092 (2017).

Артикул пабмед Google Scholar

136.

Перссон Х. и др. Некодирующая РНК частицы свода, связанной с множественной лекарственной устойчивостью, кодирует несколько регуляторных малых РНК. Нац. Клеточная биол. https://doi.org/10.1038/ncb1972 (2009 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

137.

Horos, R. et al. Небольшой некодирующий свод РНК1-1 действует как риборегулятор аутофагии. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.01.030 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

138.

Блазиус, А. Л. и Бейтлер, Б. Внутриклеточные толл-подобные рецепторы. Иммунитет https://doi.org/10.1016/j.immuni.2010.03.012 (2010).

Артикул пабмед Google Scholar

139.

Фаббри М. и др. МикроРНК связываются с Toll-подобными рецепторами, вызывая прометастатическую воспалительную реакцию. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.12009 (2012 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

140.

Joerger-Messerli, M.S. et al. Внеклеточные везикулы, полученные из мезенхимальных стволовых клеток Уортонова желе, предотвращают и устраняют запрограммированную гибель клеток, опосредованную перинатальной гипоксией-ишемией в нейрональных клетках. Пересадка клеток. https://doi.org/10.1177/0963689717738256 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

141.

Bayraktar, R., Bertilaccio, M. T. S. & Calin, G. A. Взаимодействие между двумя мирами: микроРНК и Toll-подобные рецепторы. Перед. Иммунол. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01053 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

142.

Lehmann, S.M. et al. Нетрадиционная роль микроРНК: let-7 активирует Toll-подобный рецептор 7 и вызывает нейродегенерацию. Нац. Неврологи. https://doi.org/10.1038/nn.3113 (2012 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

143.

Buonfiglioli, A. et al. МикроРНК let-7 регулируют функцию микроглии и подавляют рост глиомы через Toll-подобный рецептор 7. Cell Rep. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2019.11.029 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

144.

Атайде В.Д. и др. Использование экзосомального пути Leishmania РНК-вирусом Leishmania 1. Nat. микробиол. https://doi.org/10.1038/s41564-018-0352-y (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

145.

Ramakrishniah, V. et al. Опосредованная экзосомами передача вируса гепатита С между клетками гепатомы человека Huh7.5. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1221899110 (2013 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

146.

Feng, Z. et al. Патогенный пикорнавирус приобретает оболочку, захватывая клеточные мембраны. Природа https://doi.org/10.1038/nature12029 (2013).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

147.

Longatti, A., Boyd, B. & Chisari, F.V. Независимый от вирионов перенос РНК вируса гепатита C, способного к репликации, между пермиссивными клетками. Дж. Вирол. https://doi.org/10.1128/jvi.02721-14 (2015 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

148.

Bukong, T. N., Momen-Heravi, F., Kodys, K., Bala, S. & Szabo, G. Экзосомы от пациентов, инфицированных гепатитом C, передают инфекцию HCV и содержат компетентную к репликации вирусную РНК в комплексе с Ago2-miR122-HSP90. PLoS Pathog. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004424 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

149.

Пастузин Е.Д. и др. Дуга нейронального гена кодирует перепрофилированный белок Gag ретротранспозона, который обеспечивает межклеточный перенос РНК. Cell https://doi.org/10.1016/j.cell.2017.12.024 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

150.

Wiklander, O.P.B., Brennan, M., Lötvall, J., Breakefield, X.O. & Andaloussi, S.E.L. Достижения в терапевтическом применении внеклеточных везикул. науч. Перевод Мед. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.aav8521 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

151.

Мартин-Руфино, Дж. Д., Эспиноза-Лара, Н., Осугуи, Л. и Санчес-Гуихо, Ф. Воздействие на иммунную систему внеклеточными везикулами, происходящими из мезенхимальных стромальных клеток: каков механизм действия груза? Перед. биоинж. Биотехнолог. https://doi.org/10.3389/fbioe.2019.00308 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

152.

Куо В. П., Тиггес Дж. К., Токсавидис В. и Гиран И.Эритроциты: источник внеклеточных везикул. Методы Мол. биол. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7253-1_2 (2017 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

153.

Ткач М. и др. Качественные различия в активации Т-клеток подтипами внеклеточных везикул, происходящих из дендритных клеток. EMBO J. https://doi.org/10.15252/embj.201696003 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

154.

Пун, И.К.Х., Грегори, К.Д. и Капаракис-Лиаскос, М. От редакции: иммуномодулирующие свойства внеклеточных везикул патогенов, иммунных и неиммунных клеток. Клетки. Фронт. Иммунол. https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.03024 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

155.

Choi, D. et al. Пути внеклеточной везикулярной коммуникации как регуляторные мишени онкогенной трансформации. Семин. Сотовый Дев. биол. https://doi.org/10.1016/j.semcdb.2017.01.003 (2017 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

156.

Ohno, S.I. et al. Системно вводимые экзосомы, нацеленные на EGFR, доставляют противоопухолевую микроРНК к клеткам рака молочной железы. Мол. тер. https://doi.org/10.1038/mt.2012.180 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

157.

Риддер, К. и др. Внеклеточный везикулярный перенос функциональной РНК в микроокружении опухоли. Онкоиммунология (2015). 10.1080/2162402X2015.1008371

158.

Jang, S.C. et al. Биоинспирированные экзосомомиметические нановезикулы для адресной доставки химиотерапевтических препаратов к злокачественным опухолям. СКД Nano https://doi.org/10.1021/nn402232g (2013 г.). Это исследование демонстрирует, что выход внеклеточных везикул может быть увеличен за счет фильтрации моноцитов и макрофагов через поры для создания однородных частиц, способных нести терапевтический груз .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

159.

Shen, B., Wu, N., Yang, M. & Gould, S.J. Нацеливание белков на экзосомы/микровезикулы с помощью якорей плазматической мембраны. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.208660 (2011 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

160.

Тутуччи, Э. и др. Улучшенная система MS2 для точных отчетов о жизненном цикле мРНК. Нац. Методы https://doi.org/10.1038/nmeth.4502 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

161.

Кодзима Р. и др. Дизайнерские экзосомы, произведенные имплантированными клетками, доставляют внутримозговой терапевтический груз для лечения болезни Паркинсона. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-018-03733-8 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

162.

Ван, К. и др. ARMM как универсальная платформа для внутриклеточной доставки макромолекул. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-018-03390-x (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

163.

Флинн, А. Д. и Инь, Х. Пептидные зонды, нацеленные на липиды, для внеклеточных везикул. Дж. Сотовый. Физиол. https://doi.org/10.1002/jcp.25354 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

164.

Гори А. и др. Мембраносвязывающие пептиды для анализа внеклеточных везикул на чипе. chemRxiv https://doi.org/10.26434/chemrxiv.9885167.v3 (2020).

Артикул Google Scholar

165.

Альварес-Эрвити Л. и др. Доставка siRNA в мозг мыши путем системной инъекции экзосом-мишеней. Нац. Биотехнолог. https://doi.org/10.1038/nbt.1807 (2011 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

166.

Kooijmans, S.A.A. et al. Вызванная электропорацией преципитация siRNA скрывает эффективность загрузки siRNA во внеклеточные везикулы. Дж. Контроль. отн. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2013.08.014 (2013 г.).

Артикул Google Scholar

167.

Pomatto, M. A. C. et al. Улучшенная загрузка внеклеточных везикул, полученных из плазмы, для инкапсуляции противоопухолевых микроРНК. Мол. тер. Методы клин. Дев. https://doi.org/10.1016/j.omtm.2019.01.001 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

168.

Камеркар С. и др. Экзосомы облегчают терапевтическое нацеливание на онкогенный KRAS при раке поджелудочной железы. Природа https://doi.org/10.1038/nature22341 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

169.

Штам Т.А. и др. Экзосомы являются естественными переносчиками экзогенной миРНК в клетки человека in vitro. Сотовый общ. Сигнал . (2013). 10.1186/1478-811X-11-88

170.

Lamichhane, T. N. et al. Нокдаун онкогена путем активной загрузки малых РНК во внеклеточные везикулы с помощью обработки ультразвуком. Сотовый. Мол. биоинж. https://doi.org/10.1007/s12195-016-0457-4 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

171.

Didiot, M.C. et al. Опосредованная экзосомами доставка гидрофобно модифицированной миРНК для сайленсинга мРНК хантингтина. Мол. тер. https://doi.org/10.1038/mt.2016.126 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

172.

Haraszti, R. A. et al. Оптимизированная химия холестерин-миРНК улучшает продуктивную нагрузку на внеклеточные везикулы. Мол. тер. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2018.05.024 (2018). Это исследование демонстрирует, что химически стабилизированная siRNA, конъюгированная с липофильным холестерином, может быть эффективно загружена в изолированные внеклеточные везикулы .

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

173.

Джимона, М., Пахлер, К., Ланер-Пламбергер, С., Шалмозер, К. и Роде, Э. Производство терапевтических средств на основе внеклеточных везикул человека для клинического применения. Междунар.Дж. Мол. науч. https://doi.org/10.3390/ijms18061190 (2017 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

174.

Эдгар, Дж. Р., Манна, П. Т., Нишимура, С., Бантинг, Г. и Робинсон, М. С. Тетерин представляет собой экзосомальную привязь. Элиф https://doi.org/10.7554/eLife.17180 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

175.

Томпсон, К.А., Пурушотаман, А., Рамани, В.К., Влодавский, И. и Сандерсон, Р.Д. Гепараназа регулирует секрецию, состав и функцию экзосом, происходящих из опухолевых клеток. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.C112.444562 (2013 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

176.

Savina, A., Furlán, M., Vidal, M. & Colombo, M.I. Высвобождение экзосом регулируется кальций-зависимым механизмом в клетках K562. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.M301642200 (2003 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

177.

Глебов К. и др. Серотонин стимулирует секрецию экзосом из клеток микроглии. Глия https://doi.org/10.1002/glia.22772 (2015).

Артикул пабмед Google Scholar

178.

Джаббари Н., Наваз М. и Резайе Дж.Ионизирующее излучение увеличивает активность экзосомального секреторного пути в клетках рака молочной железы человека MCF-7: возможный способ передачи резистентности к лучевой терапии. Междунар. Дж. Мол. науч. https://doi.org/10.3390/ijms20153649 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

179.

Кинг, Х.В., Майкл, М.З. и Глидл, Дж.М. Гипоксическое усиление высвобождения экзосом клетками рака молочной железы. Рак BMC https://doi.org/10.1186/1471-2407-12-421 (2012).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

180.

Atienzar-Aroca, S. et al. Окислительный стресс в клетках пигментного эпителия сетчатки увеличивает секрецию экзосом и способствует ангиогенезу в эндотелиальных клетках. Дж. Сотовый. Мол. Мед. https://doi.org/10.1111/jcmm.12834 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

181.

Паролини, И. и др. рН микроокружения является ключевым фактором для движения экзосом в опухолевых клетках. Дж. Биол. хим. https://doi.org/10.1074/jbc.M109.041152 (2009 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

182.

Mangeot, P. E. et al. Перенос белка в клетки человека с помощью нановезикул, индуцированных VSV-G. Мол. тер. https://doi.org/10.1038/mt.2011.138 (2011 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

183.

Мейер, К. и др. Псевдотипирование экзосом для усиленной доставки белка в клетки млекопитающих. Междунар. Дж. Наномед. https://doi.org/10.2147/IJN.S133430 (2017 г.).

Артикул Google Scholar

184.

Jhan, Y.Y. et al. Созданы внеклеточные везикулы с синтетическими липидами посредством слияния мембран для обеспечения эффективной доставки генов. Междунар. Дж. Фарм. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2019.118802 (2020).

Артикул пабмед Google Scholar

185.

Хан, Ф. М. и др. Ингибирование высвобождения экзосом кетотифеном повышает чувствительность раковых клеток к доксорубицину. Рак Биол. тер. https://doi.org/10.1080/15384047.2017.1394544 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

186.

Im, E.J. et al. Сульфизоксазол ингибирует секрецию мелких внеклеточных везикул, воздействуя на рецептор эндотелина А. Nat. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-019-09387-4 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

187.

Датта, А. и др. Высокопроизводительный скрининг идентифицировал селективные ингибиторы биогенеза и секреции экзосом: стратегия перепрофилирования лекарств для лечения прогрессирующего рака. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-018-26411-7 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

188.

Марло, А. М., Чен, К. С., Джойс, Дж. А. и Таллис, Р. Х. Удаление экзосом как терапевтическое вспомогательное средство при раке. Дж. Пер. Мед. https://doi.org/10.1186/1479-5876-10-134 (2012 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

189.

Lai, C.P. et al. Динамическое биораспределение внеклеточных везикул in vivo с использованием мультимодального репортера изображений. СКД Nano https://doi.org/10.1021/nn404945r (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

190.

Gangadaran, P. et al. Новая биолюминесцентная репортерная система для изучения биораспределения систематически введенных биолюминесцентных внеклеточных везикул, полученных из опухоли, у мышей. Oncotarget https://doi.org/10.18632/oncotarget.22493 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

191.

Wiklander, O.P.B. et al. Биораспределение внеклеточных везикул in vivo определяется клеточным источником, путем введения и нацеливанием. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v4.26316 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

192.

Kooijmans, S.A.A. et al. Пегилированные и направленные внеклеточные везикулы демонстрируют повышенную клеточную специфичность и время циркуляции. Дж. Контроль. отн. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2016.01.009 (2016 г.).

Артикул Google Scholar

193.

Армстронг, Дж. П. К., Холм, М. Н. и Стивенс, М. М. Реинжиниринг внеклеточных везикул как интеллектуальных нанотерапевтических средств. ACS Nano https://doi.org/10.1021/acsnano.6b07607 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

194.

Kooijmans, S.A.A. et al. Демонстрация GPI-заякоренных нанотел против EGFR на внеклеточных везикулах способствует нацеливанию на опухолевые клетки. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v5.31053 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

195.

Kooijmans, S.A.A., Gitz-Francois, JJJJM, Schiffelers, R.M. & Vader, P. Рекомбинантные нанотела, связывающие фосфатидилсерин, для нацеливания внеклеточных везикул на опухолевые клетки: подход plug-and-play. Наномасштаб https://doi.org/10.1039/c7nr06966a (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

196.

Zou, X. et al. Внеклеточные везикулы, экспрессирующие одноцепочечный вариабельный фрагмент специфичного к ВИЧ-1 антитела, избирательно нацеливаются на ткани Env ⁺ . Тераностика https://doi.org/10.7150/thno.33925 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

197.

Гао, X. и др. Якорный пептид захватывает, нацеливает и загружает экзосомы различного происхождения для диагностики и терапии. науч. Перевод Мед. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.aat0195 (2018). Этот многогранный подход демонстрирует повышенную эффективность доставки терапевтических антисмысловых олигонуклеотидов через внеклеточные везикулы в скелетные мышцы на мышиной модели мышечной дистрофии Дюшенна .

Артикул пабмед Google Scholar

198.

Антес, Т.Дж. и др. Нацеливание внеклеточных везикул на поврежденную ткань с использованием мембранной маскировки и поверхностного отображения. J. Нанобиотехнологии. https://doi.org/10.1186/s12951-018-0388-4 (2018 г.).

Артикул Google Scholar

199.

Пи, Ф. и др. Ориентация наночастиц для контроля загрузки РНК и отображения лиганда на внеклеточных везикулах для регрессии рака. Нац. нанотехнологии. https://doi.org/10.1038/s41565-017-0012-z (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

200.

Zou, J. et al. Экзосомы, функционализированные аптамерами: выяснение механизма клеточного поглощения и возможности химиотерапии, направленной на рак. Анал. хим. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.8b05204 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

201.

Luo, Z.W. et al.Функционализированные аптамерами экзосомы из стромальных клеток костного мозга нацелены на кость, чтобы способствовать регенерации кости. Наномасштаб https://doi.org/10.1039/c9nr02791b (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

202.

Zaborowski, M.P. et al. Связанная с мембраной люцифераза Gaussia как инструмент для отслеживания выделения мембранных белков с поверхности внеклеточных везикул. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-019-53554-y (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

203.

Rupp, A.K. et al. Потеря экспрессии EpCAM в экзосомах сыворотки, полученных из рака молочной железы: роль протеолитического расщепления. Гинекол. Онкол. https://doi.org/10.1016/j.ygyno.2011.04.035 (2011).

Артикул пабмед Google Scholar

204.

Ройо Ф., Коссио У., Руис де Ангуло А., Llop, J. & Falcon-Perez, JM. Модификация гликозилирования внеклеточных везикул изменяет их биораспределение у мышей. Наномасштаб https://doi.org/10.1039/c8nr03900c (2019 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

205.

Williams, C. et al. Оценка роли поверхностных гликанов внеклеточных везикул в клеточном поглощении. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-019-48499-1 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

206.

Williams, C. et al. Гликозилирование внеклеточных везикул: современные знания, инструменты и клинические перспективы. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2018.1442985 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

207.

Накасе И.& Futaki, S. Комбинированная обработка pH-чувствительным фузогенным пептидом и катионными липидами обеспечивает усиленную доставку экзосом в цитозоль. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep10112 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

208.

Nakase, I. et al. Богатые аргинином проникающие в клетки пептиды, модифицированные внеклеточными везикулами для активной индукции макропиноцитоза и эффективной внутриклеточной доставки. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-017-02014-6 (2017 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

209.

Накасе И., Кобаяши Н.Б., Такатани-Накасе Т. и Йошида Т. Индукция активного макропиноцитоза путем стимуляции рецептора эпидермального фактора роста и онкогенной экспрессии Ras усиливает эффективность клеточного поглощения экзосом. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep10300 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

210.

Prada, I. & Meldolesi, J. Связывание и слияние внеклеточных везикул с плазматической мембраной их клеток-мишеней. Междунар. Дж. Мол. науч. https://doi.org/10.3390/ijms17081296 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

211.

Soares, A. R. et al.Белок щелевого соединения Cx43 участвует в коммуникации между внеклеточными везикулами и клетками млекопитающих. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep13243 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

212.

van Dongen, H.M., Masoumi, N., Witwer, K.W. & Pegtel, DM. Внеклеточные везикулы используют пути проникновения вируса для доставки груза. Микробиолог. Мол. биол. Ред. https://doi.org/10.1128/mmbr.00063-15 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

213.

Гроув, Дж. и Марш, М. Клеточная биология проникновения вируса, опосредованного рецептором. J. Cell Biol. https://doi.org/10.1083/jcb.201108131 (2011 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

214.

Шнелл, Дж. Р. и Чоу, Дж. Дж.Структура и механизм протонного канала М2 вируса гриппа А. Природа https://doi.org/10.1038/nature06531 (2008).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

215.

Монтекальво, А. и др. Механизм переноса функциональных микроРНК между дендритными клетками мыши через экзосомы. Кровь https://doi.org/10.1182/blood-2011-02-338004 (2012).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

216.

Тветен, Р. К. Холестерин-зависимые цитолизины, семейство универсальных порообразующих токсинов. Заразить. Иммун. https://doi.org/10.1128/IAI.73.10.6199-6209.2005 (2005 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

217.

Jiang, J., Pentelute, B.L., Collier, R.J. & Hong Zhou, Z. Атомная структура пор защитного антигена сибирской язвы объясняет транслокацию токсина. Природа https://doi.org/10.1038/nature14247 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

218.

Geoffroy, C., Gaillard, J.L., Alouf, J.E. & Berche, P. Очистка, характеристика и токсичность сульфгидрил-активированного гемолизина listeriolysin O из Listeria monocytogenes. Заразить. Иммун. 55 , 1641–1646 (1987).

КАС Статья Google Scholar

219.

Хит, Н. и др. Соединения, усиливающие эндосомальное ускользание, облегчают функциональную доставку груза внеклеточных везикул. Наномедицина https://doi.org/10.2217/nnm-2019-0061 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

220.

Ragelle, H. et al. Наночастицы хитозана для доставки миРНК: оптимизация состава для повышения стабильности и эффективности. Дж. Контроль. отн. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2013.12.026 (2014).

Артикул Google Scholar

221.

Antimisiaris, S.G., Mourtas, S. & Marazioti, A. Экзосомы и вдохновленные экзосомами везикулы для адресной доставки лекарств. Фармацевтика https://doi.org/10.3390/pharmaceutics10040218 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

222.

Quinn, J. F. et al. Внеклеточные РНК: развитие как биомаркеры болезней человека. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v4.27495 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

223.

Садик Н. и др. Внеклеточные РНК: новое осознание старых перспектив. Методы Мол. биол. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7652-2_1 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

224.

Реатеги, Э. и др. Разработаны наноинтерфейсы для микрожидкостной изоляции и молекулярного профилирования опухолеспецифических внеклеточных везикул. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-017-02261-1 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

225.

Шао Х. и др. Новые технологии анализа внеклеточных везикул. Хим. Ред. https://doi.org/10.1021/acs.chemrev.7b00534 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

226.

Akers, J.C. et al. Сигнатура микроРНК спинномозговой жидкости как биомаркер глиобластомы. Oncotarget https://doi.org/10.18632/oncotarget.18332 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

227.

Burgos, K. et al. Профили внеклеточной микроРНК в спинномозговой жидкости и сыворотке крови пациентов с болезнями Альцгеймера и Паркинсона коррелируют со статусом заболевания и особенностями патологии. PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094839 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

228.

Hannafon, B.N. et al. МикроРНК экзосомы плазмы указывают на рак молочной железы. Рак молочной железы Res. https://doi.org/10.1186/s13058-016-0753-x (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

229.

Антури, Л. и др. Анализ внеклеточной мРНК в моче человека выявляет сплайс-вариантные биомаркеры мышечной дистрофии. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-018-06206-0 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

230.

Де Гонсало-Кальво, Д. и др. Циркулирующие длинные некодирующие РНК как биомаркеры диастолической функции и ремоделирования левого желудочка у пациентов с хорошо контролируемым диабетом 2 типа. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep37354 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

231.

Giles, F.J. & Albitar, M. Тестирование на основе плазмы как новая парадигма клинического тестирования гематологических заболеваний. Эксперт. Преподобный Мол. Диагностика https://doi.org/10.1586/14737159.7.5.615 (2007 г.).

Артикул Google Scholar

232.

Маккирнан, Дж. и др. Проспективное адаптивное исследование полезности для проверки эффективности нового анализа экспрессии генов экзосом мочи для прогнозирования рака предстательной железы высокой степени у пациентов с простат-специфическим антигеном 2–10 нг/мл при первоначальной биопсии. евро. Урол. https://doi.org/10.1016/j.eururo.2018.08.019 (2018).

Артикул пабмед Google Scholar

233.

Tao, Y. et al. Исследование сывороточной экзосомальной LncRNA TBILA и AGAP2-AS1 в качестве перспективных биомаркеров для диагностики немелкоклеточного рака легкого. Интервал . Дж. Биол. науч. https://doi.org/10.7150/ijbs.39123 (2020).

Артикул Google Scholar

234.

Роде, Э., Пахлер, К. и Джимона, М. Производство и характеристика внеклеточных везикул из мезенхимальных стромальных клеток, полученных из пуповины, для клинических испытаний. Цитотерапия https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2018.12.006 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

235.

Witwer, K.W. et al. Определение небольших внеклеточных везикул, происходящих из мезенхимальных стромальных клеток (МСК), для терапевтического применения. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2019.1609206 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

236.

Отеро-Ортега Л. и др. Экзосомы способствуют восстановлению после экспериментальной модели внутримозгового кровоизлияния на животных. Дж. Цереб.Кровоток. Метаб . (2018). 10.1177/0271678X17708917

237.

Grange, C. et al. Биораспределение внеклеточных везикул, происходящих из мезенхимальных стволовых клеток, в модели острой почечной недостаточности под наблюдением с помощью оптической визуализации. Междунар. Дж. Мол. Мед. https://doi.org/10.3892/ijmm.2014.1663 (2014).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

238.

Инь К., Ван С. и Чжао Р. К.Экзосомы из мезенхимальных стволовых/стромальных клеток: новая терапевтическая парадигма. Биомаркер Res. https://doi.org/10.1186/s40364-019-0159-x (2019).

Артикул Google Scholar

239.

Mendt, M. et al. Создание и тестирование экзосом клинического класса для рака поджелудочной железы. JCI Insight https://doi.org/10.1172/jci.insight.99263 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

240.

Чжан Д. Х., Киомурцис Т., Лам С. К. и Ле М. Т. Н. Биология и терапевтическое применение внеклеточных везикул эритроцитов. Эритроцит https://doi.org/10.5772/intechopen.81758 (2019).

Артикул Google Scholar

241.

Zhu, X. et al. Комплексные исследования токсичности и иммуногенности выявили минимальные эффекты у мышей после длительного введения внеклеточных везикул, полученных из клеток HEK293T. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2017.1324730 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

242.

Мунагала Р., Акил Ф., Джеябалан Дж. и Гупта Р. К. Экзосомы, полученные из коровьего молока, для доставки лекарств. Рак Летт. https://doi.org/10.1016/j.canlet.2015.10.020 (2016 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

243.

Ван, К. и др. Нановекторы, полученные из грейпфрута, используют активированный путь доставки лейкоцитов для доставки терапевтических агентов к воспалительным участкам опухоли. Рак Res. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-14-3095 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

244.

Quesenberry, P. J. et al. Потенциальные функциональные применения внеклеточных везикул: отчет консорциума по внеклеточной РНК общего фонда NIH. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v4.27575 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

245.

Granchi, D. et al. Биомаркеры заживления кости, индуцированного регенеративным подходом, основанным на размножении мезенхимальных стромальных клеток, полученных из костного мозга. Цитотерапия https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2019.06.002 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

246.

Бхаскаран, В. и др. Функциональный синергизм кластеризации микроРНК обеспечивает терапевтически значимую эпигенетическую интерференцию при глиобластоме. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-019-08390-z (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

247.

Салех, А. Ф. и др. Внеклеточные везикулы вызывают минимальную гепатотоксичность и иммуногенность. Наномасштаб https://doi.org/10.1039/c8nr08720b (2019 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

248.

Heusermann, W. et al. Экзосомы путешествуют по филоподиям, чтобы проникнуть в клетки в эндоцитарных горячих точках, перемещаться внутри эндосом и нацеливаются на ER. J. Cell Biol. https://doi.org/10.1083/jcb.201506084 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

249.

Дьердь Б. и др. Спасение слуха путем доставки генов в волосковые клетки внутреннего уха с использованием экзосом-ассоциированного AAV. Мол. тер. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2016.12.010 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

250.

Kim, S.M. et al. Раковые экзосомы в качестве платформы доставки CRISPR/Cas9 обеспечивают нацеливание на раковые клетки, зависящее от тропизма. Дж. Контроль. отн. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2017.09.013 (2017 г.).

Артикул Google Scholar

251.

Лин Ю. и др. Гибридные наночастицы экзосома-липосома доставляют систему CRISPR/Cas9 в МСК. Доп. науч. https://doi.org/10.1002/advs.201700611 (2018 г.).

Артикул Google Scholar

252.

Escudier, B. et al. Вакцинация пациентов с метастатической меланомой экзосомами, полученными из аутологичных дендритных клеток (ДК): результаты первой фазы клинических испытаний. Дж. Пер. Мед. https://doi.org/10.1186/1479-5876-3-10 (2005 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

253.

Van Craenenbroeck, A.H. et al. Индукция цитомегаловирус-специфических Т-клеточных ответов у здоровых добровольцев и реципиентов аллогенных стволовых клеток с помощью вакцинации дендритными клетками, трансфицированными матричной РНК. Трансплантация https://doi.org/10.1097/TP.0000000000000272 (2015).

Артикул пабмед Google Scholar

254.

Марков О., Ощепкова А., Миронова Н. Иммунотерапия на основе внеклеточных везикул, направленных на дендритные клетки, — новая стратегия усиления противоопухолевого иммунного ответа. Перед. Фармакол. https://doi.org/10.3389/fphar.2019.01152 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

255.

Сонг, П. и др. Замалчивание гена IL-1β, опосредованное наночастицами липидоид-миРНК, для терапии системного артрита на мышиной модели. Мол. тер. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2019.05.002 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

256.

Liu, J. et al. Быстрое и эффективное редактирование генома CRISPR/Cas9 in vivo с помощью биоразлагаемых липидов и наночастиц матричной РНК. Доп. Матер. https://doi.org/10.1002/adma.201

5 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

257.

Haraszti, R. A. et al. Лишение сыворотки мезенхимальных стволовых клеток улучшает активность экзосом и изменяет состав липидов и белков. iScience https://doi.org/10.1016/j.isci.2019.05.029 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

258.

Гамлуш, Ф. и др. Онкоген PAX3-FOXO1 изменяет содержание экзосомальной миРНК и приводит к паракринным эффектам, опосредованным экзосомальной миР-486. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/s41598-019-50592-4 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

259.

Lucero, R. et al. Полученные из глиомы микроРНК-содержащие внеклеточные везикулы индуцируют ангиогенез путем перепрограммирования эндотелиальных клеток головного мозга. Сотовый представитель https://doi.org/10.1016/j.celrep.2020.01.073 (2020).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

260.

Лю, К., Пэн, Ф. и Чен, Дж. Роль экзосомальных микроРНК в опухолевом микроокружении рака молочной железы. Междунар. Дж. Мол. науч. https://doi.org/10.3390/ijms20163884 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

261.

Шен, М. и др. Индуцированные химиотерапией микроРНК внеклеточных везикул способствуют стволовости рака молочной железы путем нацеливания на OneCUT2. Рак Res. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-18-4055 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

262.

Wang, L. et al. Роль опосредованной экзосомами микроРНК-210, происходящей из клеток-предшественников сердца, в сердечно-сосудистых заболеваниях. Дж. Сотовый. Мол. Мед. https://doi.org/10.1111/jcmm.14562 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

263.

Yu, H. & Wang, Z. Экзосомы, полученные из кардиомиоцитов: биологические функции и потенциальное терапевтическое значение. Перед. Физиол. https://doi.org/10.3389/fphys.2019.01049 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

264.

Ма, Ю. и др. Экзосомы, высвобождаемые из нейральных клеток-предшественников, и индуцированные нейральные клетки-предшественники регулируют нейрогенез посредством miR-21a. Сотовый общ. Сигнал. https://doi.org/10.1186/s12964-019-0418-3 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

265.

Ying, W. et al. Экзосомальные микроРНК, происходящие из макрофагов жировой ткани, могут модулировать чувствительность к инсулину in vivo и in vitro. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.cell.2017.08.035 (2017 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

266.

Chen, S. et al. Экзосомы, полученные из сверхэкспрессирующих миР-375 жировых мезенхимальных стволовых клеток человека, способствуют регенерации костей. Клеточный пролиф. https://doi.org/10.1111/cpr.12669 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

267.

Thomou, T. et al. Циркулирующие микроРНК жирового происхождения регулируют экспрессию генов в других тканях. Природа https://doi.org/10.1038/nature21365 (2017).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

268.

Мияучи К., Ким Ю., Латинович О., Морозов В., Меликян Г.Б. ВИЧ проникает в клетки путем эндоцитоза и динамин-зависимого слияния с эндосомами. Сотовый https://doi.org/10.1016/j.кл.2009.02.046 (2009).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

269.

Tian, ​​T., Wang, Y., Wang, H., Zhu, Z. & Xiao, Z. Визуализация клеточного поглощения и внутриклеточного переноса экзосом с помощью микроскопии живых клеток. Дж. Сотовый. Биохим. https://doi.org/10.1002/jcb.22733 (2010 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

270.

Кога, К. и др. Очистка, характеристика и биологическое значение экзосом опухолевого происхождения. Противораковый рез. 25 , 3703–3707 (2005).

КАС пабмед Google Scholar

271.

Мондал А., Ашик К. А., Пхулпагар П., Сингх Д. К. и Ширас А. Эффективная визуализация и простое отслеживание внеклеточных везикул в клетках глиомы. биол. Обработано Онлайн https://doi.org/10.1186/s12575-019-0092-2 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

272.

Planchon, D. et al. Нацеливание MT1-MMP на эндолизосомы опосредуется активацией флотилинов. J. Cell Sci. https://doi.org/10.1242/jcs.218925 (2018 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

273.

Эскревенте, К., Келлер, С., Альтефогт, П.и Коста, Дж. Взаимодействие и поглощение экзосом клетками рака яичников. Рак BMC https://doi.org/10.1186/1471-2407-11-108 (2011).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

274.

Gray, W.D., Mitchell, A.J. & Searles, C.D. Точный и точный метод общей маркировки внеклеточных везикул. MethodsX https://doi.org/10.1016/j.mex.2015.08.002 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

275.

Моралес-Кастресана, А. и др. Высокоточное обнаружение и сортировка наноразмерных везикул при вирусных заболеваниях и раке. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.1080/20013078.2019.1597603 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

276.

Wittrup, A. et al. Визуализация липидного высвобождения siRNA из эндосом и нокдауна гена-мишени. Нац. Биотехнолог. https://doi.org/10.1038/nbt.3298 (2015 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

277.

Да Поян, А. Т., Андре, А. М. и Коэльо-Сампайо, Т. Кинетика внутриклеточной разборки вируса и процессинга, исследованная с помощью дегашения флуоресценции Bodipy. Дж. Вирол. Методы https://doi.org/10.1016/S0166-0934(97)00166-3 (1998).

Артикул пабмед Google Scholar

278.

Струк, Д. К., Хекстра, Д. и Пагано, Р. Э. Использование резонансной передачи энергии для контроля слияния мембран. Биохимия https://doi.org/10.1021/bi00517a023 (1981).

Артикул пабмед Google Scholar

279.

Herrmann, A. et al. Влияние трансбислойного распределения фосфолипидов эритроцитов на слияние с вирусом везикулярного стоматита. Биохимия https://doi.org/10.1021/bi00469a005 (1990).

Артикул пабмед Google Scholar

280.

Уолберг Дж. М., Брон Р., Уилшут Дж. и Гарофф Х. Слияние мембран вируса леса Семлики включает гомотримеры слитого белка. Дж. Вирол. 66 , 7309–7318 (1992).

КАС Статья Google Scholar

281.

Сунг, Б. Х., Пеллетье, Р. и Уивер, А. М. pHluo_M153R-CD63, яркий, универсальный живой клеточный репортер секреции и поглощения экзосом, раскрывает поведение мигрирующих клеток в поисках пути. bioRxiv https://doi.org/10.1101/577346 (2019).

Артикул Google Scholar

282.

Yuhua, H. et al. Цитозольная доставка мембранонепроницаемых молекул в дендритные клетки с использованием наночастиц сердцевина-оболочка, чувствительных к рН. Нано Летт. https://doi.org/10.1021/nl071542i (2007 г.).

Артикул Google Scholar

283.

Джонс, Д. М. и Падилья-Парра, С.Анализ β-лактамазы: использование биосенсора FRET для анализа механизмов слияния вирусов. Датчики https://doi.org/10.3390/s16070950 (2016).

Артикул пабмед Google Scholar

284.

Lönn, P. et al. Усиление эндосомального побега для внутриклеточной доставки макромолекулярных биологических терапевтических средств. науч. Отчет https://doi.org/10.1038/srep32301 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

285.

Godoy, P.M. et al. Большие различия в составе малых РНК между биологическими жидкостями человека. ССРН Электрон. J. https://doi.org/10.2139/ssrn.3155656 (2018).

Артикул Google Scholar

286.

Freedman, J.E. et al. Разнообразные внеклеточные РНК человека широко обнаруживаются в плазме человека. Нац. коммун. https://doi.org/10.1038/ncomms11106 (2016 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

287.

Giraldez, M.D. et al. Всесторонняя многоцентровая оценка методов малых РНК-секвенций для количественного профилирования микроРНК. Нац. Биотехнолог. https://doi.org/10.1038/nbt.4183 (2018 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

288.

Godoy, P.M. et al. Сравнение воспроизводимости, точности, чувствительности и специфичности платформ количественного определения микроРНК. Мобильный представитель https://doi.org/10.1016/j.celrep.2019.11.078 (2019 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

289.

Йери, А. и др. Оценка имеющихся в продаже наборов для подготовки небольших библиотек RNASeq с использованием РНК с низким уровнем ввода. BMC Genomics https://doi.org/10.1186/s12864-018-4726-6 (2018).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

290.

Crescitelli, R. et al. Различные профили РНК в субпопуляциях внеклеточных везикул: апоптотических тельцах, микровезикулах и экзосомах. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v2i0.20677 (2013).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

291.

Гамбаро, Ф. и др. Стабильные половины тРНК могут быть отсортированы во внеклеточные везикулы и доставлены в клетки-реципиенты в зависимости от концентрации. РНК Биол. https://doi.org/10.1080/15476286.2019.1708548 (2019).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

292.

Chevillet, J.R. et al. Количественный и стехиометрический анализ содержания микроРНК экзосом. Проц. Натл акад. науч. США https://doi.org/10.1073/pnas.1408301111 (2014 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

293.

Грабарек, А. Д., Вайнбух, Д., Джискот, В. и Хаве, А. Критическая оценка микрофлюидного резистивного импульсного датчика для количественного определения и определения размера частиц нанометрового и микрометрового размера в биофармацевтических продуктах. Дж. Фарм. науч. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2018.08.020 (2019).

Артикул пабмед Google Scholar

294.

Akers, J.C. et al. Сравнительный анализ технологий количественного определения внеклеточных везикул (ВВ) в клинической спинномозговой жидкости (ЦСЖ). PLoS One https://doi.org/10.1371/journal.pone.0149866 (2016).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

295.

van der Pol, E. et al. Распределение размеров частиц экзосом и микровезикул, определенное с помощью просвечивающей электронной микроскопии, проточной цитометрии, анализа отслеживания наночастиц и резистивного импульсного зондирования. Дж. Тромб. Гемост. https://doi.org/10.1111/jth.12602 (2014 г.).

Артикул пабмед Google Scholar

296.

Олексюк О. и др. Микроскопия локализации одиночной молекулы позволяет анализировать специфичное для метастазирования рака распределение миРНК в наномасштабе. Oncotarget https://doi.org/10.18632/oncotarget.6297 (2015).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

Микродомены формируются на просветной поверхности мембран внеклеточных везикул нейронов

1.

Frühbeis, C., Fröhlich, D. & Krämer-Albers, E.-М. Новые роли экзосом в коммуникации нейронов и глии. Перед. Физиол. 3 , 119 (2012).

Артикул Google Scholar

2.

Стол А., Йоханссон К., Моссберг М., Кан Р. и Карпман Д. Экзосомы и микровезикулы в нормальной физиологии, патофизиологии и заболеваниях почек. Педиатр. Нефрол. 34 , 11–30 (2019).

Артикул Google Scholar

3.

Саиди С., Исраэль С., Надь С. и Турецки Г. Новая роль экзосом в психических расстройствах. Перевод. Психиатрия 9 , 122 (2019).

Артикул Google Scholar

4.

Изола А. Л. и Чен С. Экзосомы: вестники здоровья и болезней. Курс. Нейрофармакол. 15 , 157–165 (2017).

КАС Статья Google Scholar

5.

Шах, Р., Патель, Т. и Фридман, Дж. Э. Циркулирующие внеклеточные везикулы при заболеваниях человека. Н. англ. Дж. Мед. 379 , 958–966 (2018).

КАС Статья Google Scholar

6.

Raposo, G. & Stoorvogel, W. Внеклеточные везикулы: экзосомы, микровезикулы и др. J. Cell Biol. 200 , 373–383 (2013).

КАС Статья Google Scholar

7.

Марголис Л. и Садовский Ю. Биология внеклеточных везикул: известные неизвестные. ПЛОС Биол. 17 , 1–12 (2019).

Артикул Google Scholar

8.

Томпсон, Р. Ф., Уокер, М., Зиберт, К. А., Мюнх, С. П. и Рэнсон, Н. А. Введение в подготовку образцов и визуализацию с помощью криоэлектронной микроскопии для структурной биологии. Методы 100 , 3–15 (2016).

КАС Статья Google Scholar

9.

van Niel, G., D’Angelo, G. & Raposo, G. Проливая свет на клеточную биологию внеклеточных везикул. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 19 , 213 (2018).

Артикул Google Scholar

10.

Тери, К. и др. Минимальная информация для исследований внеклеточных везикул 2018 г. (MISEV2018): заявление о позиции Международного общества внеклеточных везикул и обновление рекомендаций MISEV2014. Дж. Экстраселл. Везикулы 7 , 1535750 (2018).

Артикул Google Scholar

11.

Забео, Д. и др. Экзосомы, очищенные из клеток одного типа, имеют разнообразную морфологию. Дж. Экстраселл. Везикулы 6 , 1329476 (2017).

Артикул Google Scholar

12.

Арро, Н. и др. Внеклеточные везикулы из плазмы крови: определение их морфологии, размера, фенотипа и концентрации. Дж. Тромб. Гемост. 12 , 614–627 (2014).

КАС Статья Google Scholar

13.

Чжоу В., Вудсон М., Шерман М. Б., Нилаканта Г. и Султана Х. Экзосомы опосредуют передачу вируса Зика через нейтральную сфингомиелиназу SMPD3 в корковых нейронах. Аварийный. микробы заражают. 8 , 307–326 (2019).

Артикул Google Scholar

14.

Höög, J. L. & Lötvall, J. Разнообразие внеклеточных везикул в эякулятах человека, выявленное с помощью криоэлектронной микроскопии. Дж. Экстраселл. Везикулы 4 , 28680 (2015).

Артикул Google Scholar

15.

Linares, R., Tan, S., Gounou, C., Arraud, N. & Brisson, A. R. Высокоскоростное центрифугирование вызывает агрегацию внеклеточных везикул. Дж. Экстраселл. Везикулы 4 , 29509 (2015).

Артикул Google Scholar

16.

Бодуан, Г. М. Дж. III. и др. Культивирование пирамидных нейронов гиппокампа и коры головного мозга мышей раннего постнатального периода. Нац. протокол 7 , 1741 (2012).

КАС Статья Google Scholar

17.

Итикава М., Мурамото К., Кобаяши К., Кавахара М. и Курода Ю. Формирование и созревание синапсов в первичных культурах клеток коры головного мозга крыс: электронно-микроскопическое исследование. Неврологи. Рез. 16 , 95–103 (1993).

КАС Статья Google Scholar

18.

Chiappalone, M., Bove, M., Vato, A., Tedesco, M. & Martinoia, S. Диссоциированные корковые сети демонстрируют спонтанно коррелированные модели активности во время развития in vitro. Мозг Res. 1093 , 41–53 (2006).

КАС Статья Google Scholar

19.

Мусанте, Л., Сарасват, М., Равида, А., Бирн, Б. и Холтхофер, Х. Извлечение мочевых нановезикул из супернатантов ультрацентрифугирования. Нефрол. Набирать номер. Транспл. 28 , 1425–1433 (2012).

Артикул Google Scholar

20.

Цветкович А., Летвалл Дж. и Лэссер С. Влияние типа ротора и времени центрифугирования на выход и чистоту внеклеточных везикул. Дж. Экстраселл. Везикулы https://doi.org/10.3402/jev.v3.23111 (2014 г.).

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

21.

Baietti, M. F. et al. Синдекан-синтенин-ALIX регулирует биогенез экзосом. Нац. Клеточная биол. 14 , 677–685 (2012).

КАС Статья Google Scholar

22.

Коваль, Дж. и др. Сравнение протеомов определяет новые маркеры для характеристики гетерогенных популяций подтипов внеклеточных везикул. Проц. Натл. акад. науч. 113 , E968–E977 (2016 г.).

КАС Статья Google Scholar

23.

Crescitelli, R. et al. Различные профили РНК в субпопуляциях внеклеточных везикул: апоптотических тельцах, микровезикулах и экзосомах. Дж. Экстраселл. Везикулы 2 , 20677 (2013).

Артикул Google Scholar

24.

Surman, M., Stępień, E. & Przybyło, M. Внеклеточные везикулы, полученные из меланомы: фокус на их протеоме. Протеомы 7 , 21 (2019).

КАС Статья Google Scholar

25.

Monguió-Tortajada, M., Gálvez-Montón, C., Bayes-Genis, A., Roura, S. & Borràs, F.E. Методы выделения внеклеточных везикул: растущее влияние эксклюзионной хроматографии. Сотовый. Мол. Жизнь наук. 76 , 2369–2382 (2019).

Артикул Google Scholar

26.

Геррейро, Э. М. и др. Эффективное выделение внеклеточных везикул путем сочетания модификаций клеточных сред, ультрафильтрации и эксклюзионной хроматографии. PLoS ONE 13 , e0204276 (2018).

Артикул Google Scholar

27.

Comolli, L. R. & Downing, K. H. Допустимая доза при температурах гелия и азота для электронной томографии целых клеток. Дж. Структура. биол. 152 , 149–156 (2005).

КАС Статья Google Scholar

28.

Ян, Дж. Э. и др. Сложность и ультраструктура инфекционных внеклеточных везикул из клеток, инфицированных безоболочечным вирусом. bioRxiv https://doi.org/10.1101/618306 (2019).

Артикул Google Scholar

29.

Янас А.М., Сапон К., Янас Т., Стоуэлл М. Х. Б. и Янас Т. Экзосомы и другие внеклеточные везикулы в нервных клетках и нейродегенеративные заболевания. Биохим. Биофиз. Акта Биомембр. 1858 , 1139–1151 (2016).

КАС Статья Google Scholar

30.

Cocucci, E., Racchetti, G. & Meldolesi, J. Выпадающие микровезикулы: артефактов больше нет. Trends Cell Biol. 19 , 43–51 (2009).

КАС Статья Google Scholar

31.

Сенгупта, П. и др. Механизм разделения на основе липидов для селективного включения белков в мембраны частиц ВИЧ. Нац. Клеточная биол. 21 , 452–461 (2019).

КАС Статья Google Scholar

32.

Greenberg, ME et al. Взаимодействия окисленного фосфатидилсерина с CD36 играют существенную роль в зависимом от макрофагов фагоцитозе апоптотических клеток. Дж. Экспл. Мед. 203 , 2613–2625 (2006 г.).

КАС Статья Google Scholar

33.

Frühbeis, C. и др. Запускаемый нейротрансмиттерами перенос экзосом опосредует связь между олигодендроцитами и нейронами. ПЛОС Биол. 11 , e1001604 (2013).

Артикул Google Scholar

34.

Rajendran, L. et al. Новая роль внеклеточных везикул в нервной системе. J. Neurosci. 34 , 15482–15489 (2014).

Артикул Google Scholar

35.

Иоанну, М. С. и др. Метаболическая связь нейронов и астроцитов защищает от индуцированной активностью токсичности жирных кислот. Сотовый 177 , 1522e14-1535e14 (2019).

Артикул Google Scholar

36.

Хаген, В. Дж. Х., Ван, В. и Бриггс, Дж. А. Г. Реализация схемы криоэлектронной томографии с наклоном, оптимизированной для усреднения субтомограмм с высоким разрешением. Дж. Структура. биол. 197 , 191–198 (2017).

Артикул Google Scholar

37.

Грант Т., Рохоу А. и Григорьев Н. cisTEM, удобное программное обеспечение для обработки изображений отдельных частиц. Elife 7 , e35383 (2018).

Артикул Google Scholar

38.

Мастронард, Д. Н. и Хелд, С. Р. Автоматическое выравнивание серии наклонов и томографическая реконструкция в IMOD. Дж. Структура. биол. 197 , 102–113 (2017).

Артикул Google Scholar

39.

Кремер, Дж. Р., Мастронард, Д. Н. и Макинтош, Дж. Р. Компьютерная визуализация данных трехмерного изображения с использованием IMOD. Дж. Структура. биол. 116 , 71–76 (1996).

КАС Статья Google Scholar

40.

Van Deun, J. et al. EV-TRACK: прозрачная отчетность и централизация знаний об исследованиях внеклеточных везикул. Нац. Методы 14 , 228–232 (2017).

Артикул Google Scholar

Функции везикул | Типы везикул

Структура везикулы (Источник: Wikimedia)

Функции везикул : Анатомически клетка состоит из различных органелл, функционирующих организованным образом для осуществления метаболических процессов.Среди этих органелл есть крошечная внутри- или внеклеточная структура, окруженная липидной мембраной, обычно несущая жидкость; называется Везикула .

Везикулы, как правило, представляют собой временные структуры, образующиеся во время секреции или поглощения молекул из клетки или внутрь нее соответственно. Везикулы помогают транспортировать вещества в клетке.

Везикулы образуются при отщипывании клеточной мембраны эндоплазматического ретикулума или аппарата Гольджи , или при попадании внеклеточного вещества в клеточную мембрану.В образовании везикул участвует набор белков оболочки , которые формируют округлую форму везикулы. Эти белки помогают поглощать материал, который необходимо транспортировать, внутри пузырька.

Другой тип белка, называемый белками SNARE , представлен как на везикуле, так и на мембране-мишени и способствует слиянию везикулы с мембраной.

Везикулы могут сливаться с клеточной мембраной, а также с мембранами органелл, поскольку они окружены липидным бислоем .Благодаря этому они могут перемещаться внутрь и наружу клетки, а также между такими органеллами, как тельца Гольджи и эндоплазматический ретикулум.

Везикулы имеют жизненно важное значение, поскольку они выполняют широкий спектр функций, которые способствуют правильному функционированию клетки, таких как упаковка, хранение, пищеварение , транспорт, клеточная связь, метаболические пути и другие. Среди них его наиболее важной функцией является транспортная.

Более пристальный взгляд на типы везикул дает представление об их разнообразных функциях и значении.Давайте рассмотрим их ниже:

Типы везикул

Внутри клетки обнаруживаются различные типы везикул, выполняющих самые разнообразные функции.

• Вакуоли : Это крошечные структуры, окруженные липидами, которые обычно содержат воду и в основном наблюдаются у растений и некоторых бактерий . Они используются для регулирования осмотического давления в клетке.
• Лизосомы : Лизосомы представляют собой тип пузырьков, которые участвуют в клеточном пищеварении.Лизосома содержит протеолитические ферменты, способные расщеплять молекулы пищи.
• Пероксисомы : Подобно лизосомам, пероксисомы представляют собой специализированные везикулы, содержащие перекись водорода. Эти везикулы в первую очередь участвуют в реакциях клеточного окисления.
• Транспортные везикулы : Как следует из названия, это крошечные мешочки, окруженные двойным липидным слоем, которые активно участвуют в транспортировке материалов из клетки и в клетку, а также между органеллами.
• Секреторные пузырьки : Тип специализированных пузырьков, выносящих вещества из клетки.Обычно они образуются из аппарата Гольджи.
• Синаптические везикулы : Тип специализированных везикул, обнаруженных в типах нейронов , которые хранят и транспортируют молекулы нейротрансмиттеров.
• Внеклеточные везикулы : Внеклеточные везикулы находятся вне клетки и используются для транспорта внутрь клетки. Везикулы этого типа встречаются как в эукариотических, так и в прокариотических клетках .
• Газовые везикулы : Встречаются у бактерий и обеспечивают плавучесть клетки.

Функции везикул

1. Транспорт

Основная цель везикул — транспортировка материалов между органеллами и внутрь клетки. Обнаружены различные типы транспортных везикул, отпочковывающихся и транспортирующих вещества из гладкого эндоплазматического ретикулума в шероховатый эндоплазматический ретикулум для процессинга, а также из аппарата Гольджи.

Везикулы также помогают переносить вещества в ядро ​​через ядерную мембрану.Белки, требующие процессинга, транспортируются по всей клетке от одной органеллы к другой в везикулах. Существует два основных типа транспортных механизмов, в которых используются везикулы.

Эндоцитоз

Типы эндоцитоза (Источник: Викимедиа)

• Эндоцитоз — это процесс, при котором вещества и молекулы транспортируются в клетку из внеклеточной среды. Этот процесс использует везикулы в качестве основного средства транспорта. Существует три типа эндоцитоза — фагоцитоз, пиноцитоз и рецептор-опосредованный фагоцитоз.
• Фагоцитоз включает образование пищевых пузырьков после поглощения пищевых частиц или целых клеток, таких как бактериальные клетки. Это приводит к образованию пузырька, известного как фагосома. Затем фагоцитарный везикул сливается с лизосомой, чтобы переварить и расщепить содержимое.
• Пиноцитоз — аналогичный процесс, но он включает молекулы жидкости или воды, поглощаемые крошечными пузырьками в клетку.
• Рецепторно-опосредованный эндоцитоз — это тип эндоцитоза, который позволяет поглощать определенные молекулы клеткой на основе присутствия рецепторов, специфичных для этой молекулы, на клеточной мембране.Как только молекула выбрана, она транспортируется в везикулах.

Экзоцитоз

Типы экзоцитоза (Источник: Wikimedia)

• Экзоцитоз — это процесс, при котором вещества выходят из клетки. Секреторные везикулы, отпочковавшиеся от аппарата Гольджи, перемещаются к клеточной мембране, где сливаются и высвобождают содержимое наружу клетки.

2. Хранение

Везикулы играют роль в хранении макромолекул, таких как крахмал или ферменты, необходимые для метаболических и клеточных процессов в цитоплазме .

• Некоторые транспортные молекулы, необходимые для транспорта глюкозы, также хранятся в везикулах. Ацетилхолин , нейротрансмиттер хранится в везикулах хранения в нейронах.
• При получении сигнала эта везикула сливается с клеточной мембраной, высвобождая ацетилхолин в синаптическую щель, чтобы этот сигнал передавался в следующую клетку.

3. Пищеварение

Как обсуждалось ранее, в процессе фагоцитоза и пиноцитоза везикулы помогают в переваривании и расщеплении пищевых макромолекул и жидкостей, которые попадают в клетку.

4. Метаболизм

Лизосомы — это везикулы, содержащие метаболические протеолитические ферменты, помогающие в расщеплении и метаболизме пищевых частиц.

5. Осмотическое давление

Небольшие везикулы (также известные как газовые вакуоли) присутствуют у некоторых видов бактерий и планктона, которые помогают им оставаться на плаву и обеспечивают плавучесть клетки.

6. Окисление

Пероксисомы представляют собой небольшие везикулы, содержащие гидролитические ферменты, такие как пероксидаза водорода, которые осуществляют реакции окисления в клетке.

7. Удаление отходов

Везикулы используются клеткой для удаления продуктов жизнедеятельности наружу. Секреторные везикулы сливаются с клеточной мембраной, высвобождая продукты жизнедеятельности и токсичные молекулы за пределы клетки.

8. Выброс химикатов и гормонов

Некоторые везикулы хранят гормоны и другие небольшие химические мессенджеры, которые высвобождаются в определенное время при получении сигнала.Высвобождение этих веществ из везикулы вызывает желаемую реакцию только при получении сигнала.

9. Межсотовая связь

Функция везикул в клеточной коммуникации наблюдается у некоторых типов бактерий . Эти бактерии производят небольшие молекулы или токсины, которые хранятся в мембранных везикулах. Мембранные везикулы выбрасываются в окружающую среду и вызывают процессы, способствующие бактериальной инвазии в клетку-мишень.

Другим примером межклеточной коммуникации являются нейронные клетки, где везикулы высвобождают нейротрансмиттеры в межнейронное пространство или синапс. Этот процесс вызывает передачу сигнала по нервному волокну. Аналогичный механизм наблюдается в сердечных клетках, где везикулы используются для передачи сигнала от одной клетки к другой в сердечной ткани.

Изучение образования, структуры и функции везикул позволило ученым произвести искусственные везикулы, называемые липосомами , которые широко используются в процессах переноса генов или доставки лекарств для терапии.Липосома имеет по крайней мере один липидный слой, окружающий доставляемое лекарство или ген, чтобы обеспечить слияние везикулы с мембраной клетки-мишени.

Дальнейшие исследования в этой области могут открыть новые возможности терапии многих заболеваний и состояний.

Процитировать эту страницу

Ключевые ссылки

• «Везикулы и вакуоли (Читать) | Биология | Фонд СК-12» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Клетка — везикулы — клетки, пища, лизосомы и самостоятельная — статьи JRank» .По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Структура и функции клеток, везикул, лизосом, пероксисом, Сара Свенсон на Prezi» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «DEFINE_ME_WA» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Отдельный класс внутриклеточных запасающих везикул, идентифицируемых по экспрессии переносчика глюкозы GLUT4». . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Запас ацетилхолина в везикулах» .По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Внеклеточные везикулы в ангиогенезе» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.
• «Липосомы: классификация, получение и применение» . По состоянию на 05 марта 2018 г. Ссылка.

Внеклеточные везикулы и их конвергенция с вирусными путями

Внеклеточные везикулы (микровезикулы), такие как экзосомы и сброшенные микровезикулы, содержат различные молекулы, включая белки, липиды и нуклеиновые кислоты.Микровезикулы, по-видимому, в основном происходят из мультивезикулярных телец или отпочковываются от плазматической мембраны. Здесь мы рассматриваем конвергенцию биогенеза микровезикул и аспекты путей сборки и высвобождения вирусов. Герпесвирусы и ретровирусы, среди прочего, рекрутируют несколько элементов из путей биогенеза микровезикул для функционального высвобождения вируса. Кроме того, могут выделяться неинфекционные плейотропные вирусоподобные везикулы, содержащие вирусные и клеточные компоненты. Мы подчеркиваем неоднородность функции микровезикул во время вирусной инфекции, обращаясь к микровезикулам, которые могут либо блокировать или усиливать инфекцию, либо вызывать иммунную дисрегуляцию за счет побочного действия в иммунной системе.Наконец, эндогенные элементы ретровирусов и ретротранспозонов, депонированные в наших геномах миллионы лет назад, могут высвобождаться из клеток внутри микровезикул, что указывает на вирусное происхождение системы микровезикул или, возможно, на эволюционно законсервированную систему созависимости вирус-везикулы. Необходимы дополнительные исследования для дальнейшего выяснения сложной функции различных микровезикул, образующихся во время вирусной инфекции, что, возможно, позволит выявить новые стратегии терапевтического вмешательства.

Из живых клеток во внеклеточное пространство активно выделяется широкий спектр везикул, содержимое которых отражает клеточный состав и физиологическое состояние (обзор см. в [1–3]).На протяжении многих лет различным типам внеклеточных везикул давали различные названия, включая экзосомы, сбрасываемые микровезикулы, эктосомы, микрочастицы, виросомы, вирусоподобные частицы и онкосомы. Отличительные черты каждого из подтипов везикул и правильная номенклатура в настоящее время интенсивно изучаются. Здесь мы будем называть их общим термином микровезикулы. Микровезикулы несут РНК [мРНК, микроРНК (миРНК) и некодирующие последовательности], кДНК и геномные последовательности, большую часть белков и липидов (см. обзоры выше, а также [4, 5]).После высвобождения эти микровезикулы могут перемещаться во внеклеточном пространстве и либо поглощаться соседними клетками, либо разрушаться. Они также могут проникать в соседние жидкости организма, например, в большой круг кровообращения, и перемещаться в отдаленные места. Фактически, они были обнаружены в большом количестве в крови (сыворотке и плазме), моче, грудном молоке, поте, слюне, асцитической жидкости и спинномозговой жидкости (ЦСЖ) [3–7]. По крайней мере, два различных механизма высвобождения микровезикул были описаны для двух подтипов: (1) экзосомы, происходящие из мультивезикулярного тела (MVB), и (2) сбрасываемые микровезикулы, происходящие из плазматической мембраны.Интересно, что оба механизма в значительной степени перекрываются с высвобождением вируса и биогенезом (обобщенные на рисунке 1 и более подробно обсуждаются ниже).

Экзосомы имеют диаметр от 30 до 100 нм и образуются путем отпочковывания внутрь просвета внутренних везикулярных компартментов, происходящих из эндосом [8]. Поскольку везикулы накапливаются в этих компартментах, происходящих из эндосом, их собирательно называют MVB. Эти MVB могут быть либо нацелены на деградацию по лизосомному пути, либо они могут сливаться с плазматической мембраной, высвобождая свои внутренние везикулы во внеклеточное пространство.Точный механизм и кинетика этих событий слияния и высвобождения полностью не выяснены и могут различаться у разных типов клеток [9]. Например, истощение Hrs (компонент ESCRT-0) приводило к снижению секреции экзосом в дендритных клетках, высвобождение которых стимулировали овальбумином и ионофором кальция [10]. С другой стороны, олигодендроциты, по-видимому, секретируют экзосомы по механизму, который не зависит от ESCRT и зависит от церамидов [11]. Было обнаружено, что высвобождение экзосом клетками HeLa включает Rab27a/b [12], а р53, как сообщается, играет роль в высвобождении экзосом в клеточной линии немелкоклеточного рака легкого [13].Также было показано, что Rab11 участвует в высвобождении экзосом из MVBs, действуя на связывание/стыковку MVBs с плазматической мембраной, чтобы способствовать гомотипическому слиянию в присутствии кальция [14]. Кроме того, TBC1D10A-C, ингибитор Rab35, приводил к внутриклеточному накоплению эндосомальных везикул и нарушению секреции экзосом [15].

Сброшенные микровезикулы высвобождаются путем отпочковывания наружу непосредственно от плазматической мембраны и имеют тенденцию быть больше (> 100  нм в диаметре) и более гетерогенны по размеру [16, 17].Более того, этот процесс высвобождения, вероятно, контролируется локализованной динамикой цитоскелета, при этом небольшие выпячивания, покрытые цитоплазматической мембраной, отделяются и высвобождаются во внеклеточное пространство [18] с помощью активированной GTPase, ARF6 [19]. Интересно, что недавние наблюдения показывают, что вирус-независимое отпочкование от плазматической мембраны может быть опосредовано перемещением эндосомы в плазматическую мембрану TSG101, видного члена комплекса ESCRT-I, часто отмечаемого как маркер экзосомы [20]. Этот тип почкования топологически идентичен как внутреннему почкованию ограничивающей мембраны MVB, так и сборке вируса на плазматической мембране, поскольку внешняя поверхность плазматической мембраны находится на внешней поверхности микровезикулы.Фактически, некоторые опухолевые клетки выделяют ретровирусоподобные везикулы, которых может быть много из-за повышенной транскрипции эндогенных ретровирусных последовательностей [17, 21], что является результатом общего гипометилирования генома [22]. В целом кажется, что четкие различия между вирусами и микровезикулами, основанные на составе и функции, стираются, хотя их можно отделить от везикул, высвобождаемых на более поздних стадиях запрограммированной клеточной гибели, поскольку эти последние везикулы, называемые апоптотическими пузырьками [2], даже крупнее [23].

В настоящее время большое внимание уделяется роли микровезикул в межклеточной коммуникации. После высвобождения из донорской клетки микровезикулы могут либо поглощаться соседними клетками, либо перемещаться через жидкости организма для доставки груза в клетки-реципиенты в отдаленных местах. Хотя многие детали отсутствуют, клеточное поглощение некоторых микровезикул, по-видимому, зависит, по крайней мере частично, от специфического распознавания лиганда-рецептора [24] и может быть опосредовано прямым слиянием микровезикул с плазматической мембраной или эндоцитотическим поглощением микровезикул. микровезикулы.Например, Куах и др. [25] показали, что наивные В-клетки-свидетели быстро активируются путем приобретения антигена от активированных В-клеток посредством мембранного переноса, опосредованного микровезикулами. Аналогичным образом CD41 переносится из тромбоцитов в эндотелиальные и опухолевые клетки, что приводит к повышению проадгезивных свойств клеток-реципиентов [26, 27]. Микровезикулы также перемещают мРНК между клетками и влияют на физиологическое состояние клетки-реципиента, а также на клеточный ответ на внешние стрессовые стимулы [28].Кроме того, микроРНК переносятся экзосомами [6, 29, 30]. Например, было показано, что miR-146a переносится в реципиентные клетки рака предстательной железы, что приводит к ингибированию их пролиферации [31], а недавно miRNAs, которые могут модулировать иммунный ответ, были обнаружены в экзосомах грудного молока [32]. Кроме того, последовательности ретротранспозонов особенно богаты в опухолевых микровезикулах, а последовательности опухолевого эндогенного ретровируса человека (HERV) могут быть перенесены в нормальные эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) через микровезикулы, что приводит к длительному увеличению уровней мРНК HERV-K [17]. ].Это свидетельствует о том, что опухолевые клетки переносят эти мобильные генетические элементы через микровезикулы в соседние нормальные клетки, тем самым модулируя их генотип и фенотип.

2. Вирусы и микровезикулы

Микровезикулярное выделение компонентов клеточной мембраны и высвобождение внутренних эндосомальных экзосом важны для клеточной коммуникации и модуляции иммунных ответов [9, 54–57] (таблица 1). В то время как высвобождение микровезикул было тщательно исследовано, в последнее время задача состояла в том, чтобы раскрыть специфические механизмы, которые направляют сортировку белков и комплексообразование в сбрасываемые микровезикулы и экзосомы в различных типах клеток.Сообщалось, что клетки секретируют высокоспецифичные микровезикулы после инфекционного воздействия или при различных условиях активации клеток [5, 54, 56, 58]. Было обнаружено, что благодаря упаковке и переносу функциональных белков, мРНК/миРНК и других цитозольных компонентов микровезикулы полезны как для клетки-хозяина, так и для инфекционного агента [37, 43]. Вирус-инфицированные клетки оказались полезными в ранних исследованиях для выяснения роли микровезикулярного шелдинга в межклеточной коммуникации [55, 56].К числу наиболее широко изученных вирусов в отношении микровезикул относятся вирус простого герпеса (ВПГ), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) и онкогенный вирус герпеса, вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ). Каждый вирус обладает уникальными свойствами, обеспечивающими защиту от иммунной атаки. Здесь мы описываем важные иммуномодулирующие этапы, участвующие в сортировке и высвобождении микровезикул, вызванных вирусом, у этих и других родственных вирусов. Сохранение вируса зависит от высвобождения микровезикул из инфицированных клеток.Микровезикулы, выделяемые инфицированными клетками, содержат специфические компоненты клетки и вируса, многие из которых способствуют способности вирионов сохраняться во враждебной противовирусной иммунной среде [44, 55, 56, 58]. В зависимости от типа вируса и, в некоторых случаях, стадии вирусного цикла, межклеточные процессы хорошо организованы для получения специфических клеточных и иммунных результатов [56]: (1) уклонение от иммунной системы хозяина, (2) инвазия, ( 3) репликация и (4) постоянство (частично резюмированные на рисунке 2 и более подробно обсуждаются ниже).

[44-47]

9 [43] Вирус иммунного статуса везикул Происхождение Ссылка ВИЧ Активация CD8 + Т-клеток [33] HIV Activation MegakaryoCyte Activation Dendritic Cell [36] ВИЧ Уклонение от 40006 [37-42 CMV Evasion Уклонение [43]	Уклонение от клетки
HSV	Уклонение от 40006		[37, 48–53]

930 66 2.1. Уклонение от иммунной системы хозяина

Во время первичной вирусной инфекции гуморальные и клеточно-опосредованные иммунные реакции хозяина, такие как выработка нейтрализующих антител и атака цитотоксических Т-клеток на инфицированные клетки, способствуют разрушению вируса. Стратегии раннего уклонения, принятые вирусами, мешают полной ликвидации вируса, позволяя ему сохраняться. Во время инфекции ВПГ-1 высвобождение микровезикул, ранее известных как L-частицы, содержащие белки вирусного тегумента и гликопротеины, может активировать окружающие клетки для продуктивной инфекции и снижать иммунное отторжение [48–50].Такие вирусоподобные везикулы лишены как вирусного капсида, так и ДНК и, таким образом, не способны самостоятельно продуцировать репликационно-инфекционный цикл в клетках [49-51]. Однако некоторые из белков вирусного тегумента, содержащихся в них, являются немедленными факторами ранней транскрипции, которые могут вызывать быструю транскрипционную активацию позже прибывающих интактных вирионов [48, 52]. Другой стратегией уклонения, наблюдаемой для HSV-1, является нацеливание на путь процессинга молекулы MHCII с помощью гликопротеина B вирусной оболочки (gB) [37].Антигенпрезентирующие клетки (APC) обычно сортируют HLA-DR поверхностного рецептора MHCII в компартменты MHCII для процессинга. Основная роль этого пути заключается в представлении пептидных антигенов иммунной системе для того, чтобы вызвать или подавить ответы Т-клеток (хелперов), которые стимулируют продукцию антиген-специфических антител В-клетками [37]. gB HSV-1 связывается с HLA-DR, вызывая сортировку по экзосомальному пути, а не презентацию на клеточной поверхности. Комплексообразование gB-DR эффективно захватывает механизм представления клеточного антигена, предотвращая дальнейшую загрузку пептидами и, кроме того, увеличивая продукцию микровезикул [37, 53].Этот последний этап высвобождает дополнительные комплексы gB-DR в иммунную микросреду хозяина, способствуя устойчивости вирусов к иммунной атаке и в некоторых случаях вызывая толерантность или анергию Т-клеток-наблюдателей [37, 53]. В случае ВИЧ упаковка микровезикул и распространение кодируемого вирусом белка Nef нарушают правильный эндоцитоз незрелой MHCII/инвариантной цепи, переключение класса антител и лизосомную деградацию вирусных пептидов, позволяя вирусу ВИЧ уклоняться от распознавания иммунной системой [37, 38]. . ВЭБ, цитомегаловирус человека (ЦМВ) и вирус гепатита С (ВГС) также нашли средства уклонения от иммунного ответа за счет использования микровезикул, как обсуждается ниже.

2.2. Инвазия и репликация в клетке-хозяине

Экзосомы и сбрасываемые микровезикулы могут включать элементы как из клетки, так и из внедряющегося вириона [54]. При циркуляции этих микровезикул они сталкиваются с восприимчивыми клетками и проникают в них и могут сделать их чувствительными к вирусной инфекции, тем самым увеличивая системное распространение вируса на наивные клетки. В случае ЦМВ человека микровезикулы, высвобождаемые инфицированными клетками, представляют собой молекулу семейства лектинов С-типа, экспрессируемую на дендритных клетках, которая используется для захвата и интернализации патогенов, в комплексе с гликопротеином В ЦМВ.Этот комплекс может впоследствии распространяться микровезикулами на другие клетки, тем самым повышая восприимчивость этих клеток к ЦМВ [59]. Аналогичный механизм обнаруживается и в случае HCV. У HCV-положительных пациентов белок клеточной мембраны CD81 связывается с одним из гликопротеинов оболочки HCV, E2. Внеклеточное высвобождение комплексов E2-CD81 внутри микровезикул обеспечивает повышенную способность к слиянию с вирусом и инфекционность ранее наивных клеток [60]. Микровезикулы, несущие комплекс E2-CD81 и содержащие РНК ВГС, имеют большое значение, поскольку сообщалось, что они являются инфекционными даже в присутствии нейтрализующих антител [60].Интересно, что было показано, что ВГС высвобождает три фенотипически различных типа микровезикул, обладающих различной инфекционностью от высокой до низкой [60]. Однако дифференциальное высвобождение этих микровезикул во время патогенеза ВГС еще предстоит выяснить.

2.3. Микровезикулы способствуют иммунитету хозяина против вирусной инфекции

И наоборот, высвобождение микровезикул может способствовать вирусной атаке со стороны иммунной системы хозяина. Например, на ранних стадиях инвазии ЦМВ антигены ЦМВ переносятся из инфицированных эпителиальных клеток (ЭК) через микровезикулы, происходящие из ЭК, в АПК [43].Эти APC не обнаруживаются как инфицированные клетки, но становятся более восприимчивыми к инфекции при последующих контактах с вирусом [43]. Хотя это первичная инфекционная вирусная стратегия инвазии и репликации, непреднамеренно перенесенные APC, несущие антигены CMV в трансплантированных органах, служат маркерами для иммунной системы хозяина для нацеливания на чужеродные ткани. Наличие этих чувствительных АПК у хозяина с ослабленным иммунитетом и продолжающееся выделение микровезикул увеличивает надзор и приток Т-клеток в ткани трансплантата, тем самым усугубляя отторжение аллотрансплантата [43].Микровезикулы также могут способствовать врожденному иммунному ответу на вирусы, например, как это наблюдается для ВИЧ, когда перенос определенной противовирусной цитидиндезаминазы через экзосомы ингибирует репликацию ВИЧ [61]. Кроме того, вирусоподобные везикулы можно использовать в качестве стратегии вакцинации, а недавно были созданы химерные вирусоподобные везикулы с использованием смеси белков коронавируса и гриппа, функционирующих в качестве потенциальной вакцины против вируса тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС) [62].

2.4. Дальнейшие применения

Вирусы могут использовать различные механизмы транспорта микровезикул в качестве стратегии выживания, в то время как в других случаях иммунная система хозяина может использовать микровезикулы для передачи клеточных сигналов и защиты хозяина.Микровезикулы могут напрямую активировать или подавлять клеточные реакции, индуцировать или способствовать инфицированию, а также переносить материал для улучшения или подавления иммунного распознавания хозяина [9]. Эти же стратегии можно использовать при разработке методов лечения на основе вирусов. В настоящее время проводится оценка безопасности и эффективности онколитических вирусов, вооруженных терапевтическими генами, для лечения рака [63–65]. Было бы интересно определить, могут ли микровезикулы изменять эффективность онколитических вирусов и других типов векторов доставки вирусных генов.Недавняя работа показывает, что микровезикулы могут быть загружены векторами аденоассоциированных вирусов (AAV) для более эффективной доставки генов [66], открывая новое окно в области терапии микровезикул.

3. ВЭБ и микровезикулы

Некоторые патогенные вирусы человека известны своей способностью бездействовать в иммунной системе хозяина, наиболее известными примерами которых, возможно, являются ВПГ и ВЭБ. В случае ВПГ это связано со способностью вируса входить в латентное состояние в ядрах сенсорных нейронов, во время которого он не экспрессирует вирусные антигены и не нарушает физиологию нейронов.В латентном периоде генерируется один транскрипт, который кодирует предшественник четырех различных HSV, микроРНК, которые подавляют репликацию вируса [67]. Для вируса герпеса человека 4 (HHV4), более известного как EBV, это во многом связано с неполной эрадикацией вируса после ранней первичной инфекции.

Гамма-герпесвирусы, включая EBV, разработали множество стратегий для использования регуляторных путей клетки-хозяина, которые приводят к необратимому заражению хозяина. Когда эти пути не регулируются, то, что обычно представляет собой неповреждающую герпетическую инфекцию, может предрасполагать к заболеваниям, включая энцефалит, аутоиммунитет и рак [68].Недавно было продемонстрировано, что ВЭБ использует эндосомально-экзосомальный путь, уравновешивая внутриклеточную передачу сигналов в инфицированных В-клетках [69] и контролируя эпигенетические изменения в неинфицированных соседних клетках через микровезикулы [30]. Оболочечные вирусы семейства герпесвирусов, такие как человеческий CMV (HCMV/HHV5) и EBV, зависят от взаимодействия с системами клеточных эндосомальных мембран для репликации [70]. Интересно, что зрелые вирионы HHV-6 высвобождаются вместе с внутренними везикулами через MVB по клеточному эндосомально-экзосомальному пути [71].Таким образом, многие герпесвирусы обычно используют эндосомальные пути и микровезикулы для продукции вируса, высвобождения и уклонения от иммунитета. Однако открытие того, что такие вирусы, как EBV, модулируют клеточные пути хозяина, которые не участвуют непосредственно в продукции вируса, требует дальнейшего изучения.

Будучи первым идентифицированным опухолевым вирусом человека, ВЭБ во многих аспектах является чрезвычайно доброкачественным патогеном и наиболее известен как возбудитель «болезни поцелуев» или инфекционного мононуклеоза.Подсчитано, что более 90% населения мира персистентно инфицированы ВЭБ. Жизненный цикл ВЭБ начинается с обмена через слюну и вирионы ВЭБ, которые, по-видимому, преимущественно инфицируют наивные покоящиеся В-клетки во вторичных лимфоидных органах, таких как миндалины. Иногда изолированные эпителиальные клетки также инфицируются и, по-видимому, поддерживают литическую репликацию [72], которая необходима для выделения вируса в слюну для передачи новым хозяевам [73]. Чтобы достичь своей почти универсальной распространенности, не причиняя вреда хозяину, ВЭБ и родственные персистирующие вирусы герпеса развили сложные стратегии, поощряющие иммунное распознавание на пролиферативных (потенциально онкогенных) стадиях своего жизненного цикла, в то же время изящно избегая иммунного распознавания на других стадиях, «уходя в подполье». [74].При начальной инфекции в мантийной зоне зародышевых центров (ГЦ) вновь инфицированные наивные В-клетки претерпевают несколько стадий дифференцировки и тесно взаимодействуют с окружающей стромой и Т-клетками [75]. Интересно, что EBV способствует этим важным взаимодействиям для созревания В-клеток, например, за счет активации важнейших белков, связанных с реакцией GC, таких как GP183 [76]. Эта неотъемлемая часть жизненного цикла ВЭБ (т. е. имитация реакции типа GC) требует жесткой регуляции роста в специфической программе экспрессии латентного гена ВЭБ (латентность III) и способствует быстрому росту и пролиферации этих инфицированных клеток посредством NF κ B. активация.Эта стратегия расширения инфицированного пула В-клеток без необходимости литической репликации может быть выгодной в нормальных условиях, но повышает шансы включения злокачественного роста, если программы вирусной латентности не контролируются должным образом. Действительно, если эти клетки не перейдут дальше в клетки памяти, отключив эту программу роста, они могут остаться в пролиферативной фазе и дать начало EBV-положительным лимфомам, которые могут убить хозяина, тем самым ограничивая дальнейшее размножение и распространение вируса [77]. ].Кроме того, инфекция EBV на этой стадии может также предрасполагать к аутоиммунитету, поскольку неадекватные сигналы выживания могут мешать негативному отбору аутореактивных В-клеток. Следует отметить, что люди с подавленным иммунитетом подвержены повышенному риску развития лимфомы, вызванной ВЭБ, что отражает важность мощного Т-клеточного ответа против ВЭБ на протяжении всей жизни [78]. Способность ВЭБ сохраняться, несмотря на такие энергичные ответы Т-клеток, указывает на то, что ВЭБ может ускользать от адаптивной иммунной системы и может делать это частично за счет использования эндосомно-экзосомального пути посредством секреции экзосом, ингибирующих Т-клетки [44–46]. .При секреции EBV-позитивными опухолями эти экзосомы несут иммуноускользающие белки, включая вирусный белок LMP1 [79] и большое количество галектина 9, которые вызывают массивный апоптоз EBV-специфических CD4+ Т-клеток посредством специфического взаимодействия с Т-клеточным иммуноглобулином муцином. -3 (Tim-3), который может негативно регулировать активацию Т-клеток Th2 и макрофагов. Считается, что ингибирование иммунного ответа против EBV способствует прогрессированию EBV-положительных злокачественных новообразований, таких как болезнь Ходжкина (БХ) [46] и карцинома носоглотки (РНГ) [80].

Валлхов и др. [81] изучали взаимодействие между экзосомами, секретируемыми EBV-управляемыми лимфобластоидными клеточными линиями (LCL), и В-клетками периферической крови, пролиферирующими in vitro . LCL латентны на 95%, но небольшая часть клеток находится в литической стадии. Взаимодействия экзосома-клетка могут быть ингибированы специфическими антителами против gp350, основного белка оболочки EBV или CD21 на В-клетках, что указывает на взаимодействие между CD21 на В-клетках и gp350 на экзосомах [81]. Эти специфические экзосомно-клеточные взаимодействия могут быть использованы для основанной на экзосомах противоопухолевой терапии, например, для доставки белка CD154 в лейкемические В-бластные клетки, делая их иммуногенными по отношению к Т-клеткам [82].В дополнение к белкам теперь ясно, что микровезикулы многих типов клеток несут и транспортируют функциональные молекулы РНК. ВЭБ был первым обнаруженным вирусом, кодирующим свои собственные малые регуляторные миРНК [83]. ВЭБ кодирует ошеломляющие 44 вида вирусных микроРНК, происходящих из двух основных кластеров генов в вирусном геноме, которые играют важную роль в персистенции ВЭБ [84]. Секвенирование следующего поколения показывает, что эти EBV-кодируемые miRNAs составляют большую долю (20–25%) от общего количества клеточных miRNA в EBV-инфицированных клетках, охватывая более 300 различных видов miRNA [85].Сходные результаты были обнаружены в профиле микроРНК экзосом из клеток LCL, управляемых EBV (Pegtel et al., неопубликованные результаты). Это согласуется с идеей, что вирусные miRNAs манипулируют регуляцией генов в клеточных путях хозяина, а также используют экзосомальные пути коммуникации miRNA.

Действительно, открытие кодируемых EBV регуляторных миРНК (EBV-миРНК), находящихся в просвете экзосом, указывает на новый механизм, с помощью которого экзосомы могут оказывать ингибирующее действие, а именно путем репрессии трансляции генов-мишеней в неинфицированных реципиентных клетках посредством экзосомального EBV. микроРНК [30].Более ранние исследования на мышах показали, что интактные экзосомы из клеток, инфицированных EBV, обладают сильными физиологическими эффектами 90–128 in vivo 90–129, что согласуется с идеей о том, что люминальное содержимое экзосом является биологически значимым, помимо белков и липидов, составляющих их поверхность [86]. ]. Последующие исследования показали, что EBV-инфицированные раковые ECs также секретируют EBV-miRNAs, предположительно, внутри экзосом [87]. Из-за отсутствия точной модели in vivo для инфекции ВЭБ человека трудно исследовать механизм, контролирующий высвобождение EBV-миРНК через экзосомы, и определить, способствует ли это персистенции вируса у здоровых инфицированных людей.Однако микроРНК, кодируемые EBV, транспортируются из инфицированных В-клеток в неинфицированные (EBV-ДНК-отрицательные) Т-клетки и моноциты, что подтверждает идею горизонтального переноса микроРНК у людей. Таким образом, вирусные микроРНК в экзосомах могут способствовать поддержанию персистирующей вирусной инфекции путем доставки таких микроРНК в неинфицированные реагирующие Т-клетки, что приводит к их инактивации (анергии) [45] или разрушению [44]. Это согласуется с недавними данными, предполагающими, что экзосомы эффективно транспортируют микроРНК через иммунологический синапс во время взаимодействия Т-клеток с АПК [47], аналогично тому, что известно об обмене антигенами [88].В настоящее время проводятся исследования, чтобы установить, использует ли ВЭБ эти специализированные межклеточные контакты для эффективного посттранскрипционного контроля в соседних реагирующих иммунных клетках в качестве возможного механизма ускользания от иммунного ответа.

4. ВИЧ и микровезикулы

ВИЧ [56, 89–91] уже много лет является предметом дискуссий в области микровезикул. Было выдвинуто не только предположение, что сам ВИЧ может иметь свойства микровезикул, но также было описано, что микровезикулы обладают иммуномодулирующими функциями в отношении ВИЧ-инфицированных клеток и увеличивают инфекционность ВИЧ.

В 2003 г. Gould et al. [92] предположили, что ВИЧ — ретровирус с оболочкой — захватывает систему микровезикул, чтобы способствовать своей собственной сборке и последующему выходу. Интересно, что были идентифицированы ингибиторы, которые блокировали почкование как сброшенных микровезикул, так и частиц ВИЧ [93]. Кроме того, были идентифицированы пептиды, которые предотвращали взаимодействие белка Nef ВИЧ — ключевого белка жизненного цикла ВИЧ — с морталином, клеточным белком теплового шока, и приводили к ингибированию высвобождения ВИЧ и микровезикул, содержащих Nef [94].Тщательный анализ, однако, показал, что, хотя ВИЧ использует определенные белки, которые также играют роль в формировании экзосом через MVB [95], сборка ВИЧ не обязательно использует ту же систему логистики, что и экзосомы. Важно отметить, что было установлено, что почкование ВИЧ происходит в основном на плазматической мембране, а не внутри МВБ [96–99]. Интересно, что ВИЧ рекрутирует членов комплекса MVB ​​ESCRT для правильного отпочкования ВИЧ от плазматической мембраны [98-102]. В то время как в CD4+ Т-клетках высвобождение ВИЧ, по-видимому, не зависит от экзосом [103], в происходящих из моноцитов макрофагах ВИЧ может внедряться в эндосомы [102, 104].Однако в нескольких исследованиях подчеркивается, что отпочкование ВИЧ-1 также в макрофагах происходит преимущественно на плазматической мембране [105–107]. Таким образом, полемика о месте продуктивной сборки вируса в макрофагах в основном идет в пользу плазматической мембраны. Высвобождение ВИЧ в дендритных клетках может запускаться сигналами, подобными сигналам для высвобождения экзосом [102, 108, 109], а секреция ВИЧ из эндоцитарных компартментов в дендритных клетках может приводить к высвобождению ВИЧ при взаимодействии с Т-клетками [110, 111]. Однако было также описано, что эти эндоцитарные компартменты связаны с внеклеточным пространством [112, 113] и предполагается, что они представляют собой инвагинированные домены, отличные от классических эндоцитарных везикул [114].Более того, такое лечение не влияло на высвобождение микровезикул из Т-клеток, обработанных ингибиторами церамидов [111], как сообщалось ранее для ВИЧ-1 [115]. Однако ни вирусы, ни микровезикулы, полученные из клеток с дефицитом церамидов, не захватываются зрелыми дендритными клетками [111]. Следовательно, необходимы дополнительные исследования конкретных мест сборки ВИЧ в определенных типах клеток и того, в какой степени эндосомальные компартменты играют роль в жизненном цикле ВИЧ, а также возможной конвергенции путей ВИЧ и выделения микровезикул.

Вполне вероятно, что ВИЧ просто адаптировался к использованию определенных факторов хозяина для различных способов выхода, и что они могут различаться у разных типов клеток, а также в разных условиях. Будет представлять постоянный интерес дальнейшее изучение семейства ретровирусов, включая эндогенные ретровирусы, чтобы определить, не являются ли грузовые системы микровезикул остатком предыдущих ретровирусных инфекций, которые произошли ранее в эволюции и элементы которых теперь используются в оппортунистическая установка ретровирусами, такими как ВИЧ [56, 89–91, 102].Это перекрытие путей и последствия использования перекрывающихся механизмов для высвобождения могут привести к фенотипическому сходству между микровезикулами и ретровирусами и потенциально помешать стратегии борьбы с ВИЧ. Например, ВИЧ, высвобождаемый из Т-клеток, имеет сходные свойства гликома с Т-клеточными микровезикулами, что свидетельствует об общем происхождении и указывает на фенотипическое сходство [116]. Дополнительные исследования конвергенции путей микровезикул и ВИЧ могут улучшить наше понимание этих процессов и способствовать разработке новых противовирусных препаратов, направленных против ВИЧ.

Роль микровезикул при ВИЧ-инфекции еще недостаточно изучена, но, по-видимому, они участвуют как в усилении инфекционности ВИЧ, так и в повышении резистентности в зависимости от исходных клеток. Сообщалось, что микровезикулы, полученные из ВИЧ-инфицированных клеток, содержат корецепторы ВИЧ CCR5, что позволяет усилить ВИЧ-инфекцию других клеток [34]. Более того, микровезикулы из мегакариоцитов и тромбоцитов содержат CXCR4 и при переносе придают восприимчивость клеткам, в норме устойчивым к ВИЧ-инфекции [35, 117].Кроме того, во время репликации ВИЧ белок Nef ВИЧ может изменять экзосомальный путь за счет увеличения количества внутриклеточных везикул и MVB [118–121]. Высвобождение микровезикул ВИЧ Nef из инфицированных и неинфицированных клеток [39, 40] может индуцировать апоптоз в CD4+ Т-клетках [41] и передавать устойчивость к ВИЧ-инфекции [61]. Перенос Nef или других вирусных компонентов через микровезикулы может представлять собой важный механизм уклонения вирусов от иммунитета. Кроме того, экзосомы могут содержать APOBEC3G, цитидиндезаминазу, входящую в состав клеточной противовирусной системы против ретровирусов, которая при переносе в клетки-реципиенты через экзосомы может ингибировать репликацию ВИЧ [61].В то время как молекулы CD45, CD86 и MHC класса II были обнаружены в микровезикулах из ВИЧ-инфицированных клеток [42], возможно, они служат для подавления иммунного ответа, микровезикулы, полученные из CD8+ Т-клеток, могут подавлять репликацию ВИЧ [33]. Более того, экзосомы в ассоциации с ВИЧ, полученные из дендритных клеток, значительно усиливают ВИЧ-инфекцию CD4+ Т-клеток [36]. Таким образом, микровезикулы из ВИЧ-инфицированных клеток, а также из неинфицированных клеток играют важную роль в репликации и распространении ВИЧ.Следовательно, вмешательство в передачу сигналов, опосредованную микровезикулами, возможно, может быть использовано для остановки ВИЧ-инфекции.

5. Элементы ретротранспозонов и микровезикулы

Элементы ретротранспозонов, такие как LINE, Alu и эндогенные ретровирусы человека (HERV), составляют около 45% генома человека и сыграли важную роль в эволюции генома [122]. Эти вирусоподобные элементы заразили зародышевые клетки в геноме человека миллионы лет назад, а затем стали стабильной частью унаследованного генетического материала.Хотя большинство LINE-элементов неактивны, ряд активных остается и способен «перескакивать» на новые места в геноме, способствуя нестабильности генома [123]. Эти события могут оказывать важное влияние на наш геном, например, путем инактивации генов, изменения экспрессии генов и облегчения случайной вставки новых копий кДНК в геном, как при интеграции псевдогенов [124]. Многие опухолевые клетки также выделяют микровезикулы, подобные ретровирусам, которые содержат активные последовательности ретротранспозонов, такие как HERV-K [125].

Недавно было показано, что микровезикулы опухолевого происхождения обогащены ретротранспозонными элементами, такими как LINE1, Alu и HERV-K [17]. Кроме того, HERV-K был перенесен через микровезикулы в нормальные HUVEC, которые затем показали увеличение уровней HERV-K через 12 часов после воздействия опухолевых микровезикул. Кроме того, мышиная ретровирусная РНК VL30 упаковывается в ретровирусные векторы с помощью мышиных упаковывающих клеточных линий и переносится в клетки человека, инфицированные этими векторами [126]. Мышиный VL30 имеет несколько стоп-кодонов в областях, кодирующих такие гены, как gag , pol и env , тем самым ингибируя его способность кодировать функциональные белки [126].Однако перенос мРНК VL30 вместе с тканевым фактором (TF) в клетки меланомы человека индуцировал их метастатический потенциал. Это изменение фенотипа, по-видимому, происходит за счет образования комплекса с белком белок-ассоциированного фактора сплайсинга (PSF), который подавляет транскрипцию гена, индуцируемого инсулиноподобным фактором роста-1 (IGF-1). продолжайте [126]. Три из 11 генов человека, затронутых мРНК VL30, были онкогенными, что позволяет предположить, что перенос последовательностей ретровирусной РНК может иметь катастрофические последствия для клеток-реципиентов.Сонг и др. [126] идентифицировали последовательности ретротранспозонов человека, которые более чем на 90% идентичны мышиным VL-30, что позволяет предположить, что человеческий VL-30, переносимый через микровезикулы, может оказывать сходное влияние на транскрипцию [126].

Длинные вкрапленные элементы (LINE), особенно L1, составляют около 17% генома человека. Несколько исследований показывают, что подмножество элементов L1 все еще активно расширяется по количеству последовательностей в геноме человека за счет ретротранспозиции. Этой активной субпопуляции, называемой транскрипционно активной (Та), около 2 миллионов лет, и она имеет высокий уровень инсерционного полиморфизма в человеческой популяции [127, 128].Некоторые из этих новых вставок могут быть невыносимыми и смертельными, и поэтому их следует исключить; другие могут приводить к фенотипически переносимому заболеванию, такому как синдром Коффина-Лоури и хороидеремия [129-131], в то время как третьи связаны с индукцией рака, например, рака легкого [132]. Высокий уровень полиморфизма элементов L1 указывает на то, что они продолжают оказывать сильное влияние на геном человека, а недавние данные свидетельствуют о том, что микровезикулы могут быть потенциальным путем доставки этих элементов [17].Этот опосредованный микровезикулами перенос транспозонов, подобный троянскому коню [92], возможно, может обеспечить скрытое распространение ретротранспозонов, особенно в условиях опухоли, избегая иммунного распознавания и обеспечивая доставку «на большие расстояния».

HERV также проникли в геном человека миллионы лет назад и составляют около 8% генома человека. Они состоят из последовательностей gag , pol, и env , окруженных двумя длинными концевыми повторами [133]. Большинство этих последовательностей в настоящее время молчат из-за приобретенных мутаций и делеций в ходе эволюции, но HERV-K113 может продуцировать интактные, хотя и неинфекционные, ретровирусные частицы [134].Некоторые из этих последовательностей все еще транскрипционно активны и связаны с такими заболеваниями, как лимфома и рак молочной железы [21, 135]. При раке гипометилирование генома, по-видимому, преимущественно влияет на последовательности ретротранспозонов (возможно, потому, что они очень распространены в геноме человека), что приводит к усилению транскрипции, особенно в случае самых недавних абитуриентов, которые также являются элементами с наибольшим интактный кодирующий потенциал [136]. Действительно, ретровирусоподобные микровезикулы были обнаружены у онкологических больных, особенно у больных с лимфомами [21], раком молочной железы [137] и тератомами [138].Как и ожидалось, у этих пациентов также были высокие уровни обратной транскриптазы, вирусных белков gag и env и РНК в опухолевых клетках и ретровирусоподобных микровезикулах, высвобождаемых из них в кровоток [21]. Также было показано, что опухолевые микровезикулы из культивируемых опухолевых клеток обогащены ретротранспозонной РНК, ДНК и обратной транскриптазой, что позволяет предположить, что субпопуляция этих микровезикул действительно может иметь ретровирусное происхождение [19].

Таким образом, этот обзор касается того, как внеклеточные везикулы, такие как экзосомы и микровезикулы, разделяют пути сборки и высвобождения элементов ретротранспозонов и вирусов.На рисунке 1 мы резюмируем, как герпесвирусы, такие как EBV и HSV, происходят из ядра и могут сливаться с путями микровезикул. Несколько белков, используемых для производства экзосом, используются вирусами герпеса для функционального высвобождения. Кроме того, конвергенция этих путей может объяснить обнаружение вирусоподобных частиц, которые могут быть экзосомами или сброшенными микровезикулами, содержащими вирусные белки или нуклеиновые кислоты. Аналогичные наблюдения были сделаны для ретровирусов и элементов ретротранспозонов с циркулирующими микровезикулами, содержащими РНК ретротранспозонов, обнаруженных у некоторых больных раком.Остается выяснить, в какой степени экзосомы и сброшенные микровезикулы являются остатками предыдущей ретровирусной колонизации. В этом обзоре мы отмечаем наблюдения ретровирусных, а также ретротранспозонных элементов в микровезикулах, что, возможно, делает возможным дальнейшее распространение таких последовательностей нуклеиновых кислот. Использование элементов пути микровезикул вирусами, такими как ВИЧ, может указывать на сложную коэволюцию различных эндогенных и экзогенных (ретро)подтипов вирусов. Вирусы не только используют пути микровезикул для собственной сборки и высвобождения, но также способны использовать очень сложную систему связи микровезикул в межклеточной среде, как это упрощено показано на рисунке 2.Во время вирусной инфекции микровезикулы могут оказывать различное воздействие на разные типы клеток, либо ограничивая вирусную инфекцию, либо усиливая ее. Таким образом, складывается картина, что вирусы и микровезикулы являются созависимыми плейотропными образованиями. Необходимы дополнительные исследования дифференциальных функций различных подтипов микровезикул и их перекрестного влияния на иммунный ответ и исход вирусной инфекции.

Благодарности

Авторы благодарят Сюзанну Макдэвитт за помощь в процессе редактирования.Т. Вурдингер финансируется NWO-VIDI, DM Pegtel — NWO-VENI, X. O. Breakefield — грантами NIH / NCI CA069246 и CA141150, а L. Balaj — стипендией Huygens Scholarship NL.

Секреторные везикулы – обзор

Регистрация секреторных событий

Во время секреции секреторные везикулы сливаются с плазматической мембраной, расширяя ее поверхность на некоторое время, прежде чем они рециркулируются. Изменения поверхности мембраны сопровождаются изменениями проводимости мембраны и емкости мембраны, которые в тучных клетках составляют порядка 10 фФ (1 фФ = 10 ^-15 Ф) за событие.Хотя метод, описанный в главе 4, можно использовать для получения грубой оценки емкости мембраны, он слишком неточен для определения отдельных секреторных событий. Вместо этого часто используются методы, в которых используется синусоидальное напряжение малой амплитуды. Эти методы основаны на электрической модели, как показано на рис. 8.16.

Рисунок 8.16. Запись секреторных событий.

В этой модели R _s — последовательное сопротивление или сопротивление пипетки, G _s (=1/Rs) — последовательная проводимость, R _m — сопротивление мембраны, G _m (=1/R _m ) — проводимость мембраны, C _m — емкость мембраны, В _p — потенциал пипетки или потенциал фиксации напряжения, 9297 В 9297 _m — реальный мембранный потенциал.Тогда мембранный ток при фиксации напряжения равен:

i=Vm·Gm+CmdVmdt

, что равно:

i=(Vp−Vm)Gs

и, следовательно,

Vm=Vp−iGs

Замена V _m в первом уравнении дает:

VpGmGs−i(Gm+Gs)+Cmd(VpGs−i)dt=0

= E ^{-JΩT и I = I (Ω) E -JΩT дает:}

GMGSEJωT- (GM + GS) I (Ω) E-JωT + CMD (GSE- jωt−I(ω)e−jωt)dt=0

и, таким образом:

GmGs−(Gm+Gs)I(ω)+jωCmI(ω)−jωGsGm=0

на действительную и мнимую части: I(ω)  = A+ j B дает:

(8.1)A=GsGm2+GmGs−ω2Cm2(Gm+Gs)2+ω2Cm2

(8.2)B=GsωGmGs+2ωCm(Gm+Gs)2+ω2Cm2

Действительная часть A обращается в нуль для определенной комбинации C _m и ω .

A = 0 для Gm2+GmGs=ω2Cm2

Следовательно, при определенной частоте стимуляции небольшие изменения емкости мембраны могут быть измерены без загрязнения изменениями проводимости мембраны. На практике тестовая частота ω фиксируется на значении от 1 до 5 кГц, а Cm регулируется путем «обмана» с компенсацией емкости усилителя с ограничением напряжения для получения A = 0.Во время этой компенсации мнимый выход должен быть устранен. Это делается путем прерывания выходного тока фиксации напряжения с помощью синхронного усилителя (это усилитель, который инвертирует сигнал в течение половины периода синуса) и усреднения по ±10 периодам. После компенсации фазовый угол между синусоидальным сигналом и входом синхронного усилителя сдвигается на 90 градусов для измерения мнимой части выходного тока, которая теперь отражает изменения емкости. ^13,14 Нынешнее поколение управляемых компьютером усилителей с ограничением напряжения в качестве стандартной опции содержит измерение емкости мембраны.

Если секреторные гранулы относительно велики, например, в тучных клетках и хромаффинных клетках, ¹⁵ единичные события могут быть разрешены, проявляясь в виде незначительного ступенчатого увеличения емкости на рис. 8.17. Для других типов клеток альтернативным, вторым способом измерения высвобождения веществ из клеток электрически является восстановление или окисление высвобождаемого вещества.

Рисунок 8.17. (A) Мембранная емкость тучной клетки была измерена в режиме цельной клетки. (B) После внутриклеточного диализа с GTPγS произошла дегрануляция, что привело к увеличению емкости мембраны.(C) Отдельные события слияния можно было различить в режиме прикрепления к клетке.

Адаптировано из Angleson JK, Betz WJ. Мониторинг секреции в режиме реального времени: сравнение емкости, амперометрии и флуоресценции. Тенденции Neurosci 1997; 20 (7): 281–87, разрешение Elsevier.

Молекулы, такие как нейротрансмиттеры ацетилхолин, адреналин и серотонин, могут быть окислены электродом, удерживаемым при напряжении 700 мВ с помощью схемы ограничения напряжения. Обычно электрод изготавливается из платины или углерода. В последнем случае углеродное волокно 5 мкМ вставляется в стеклянную или пластиковую пипетку, а затем запечатывается эпоксидной смолой или нагревается (в случае пластиковой пипетки).Часто после запечатывания наконечника углеродное волокно отламывается или полируется, чтобы обнажить чистую поверхность. Кроме того, перед экспериментом наконечник замачивают в этаноле, бутаноле или пропаноле на 15 мин. Затем угольный электрод подносят очень близко к ячейке и фиксируют на уровне 700 мВ. Каждый высвобождаемый квант генерирует всплеск тока в диапазоне от 10 до 100 пА, в зависимости от расстояния между местом высвобождения и электродом. Вместо использования классического оборудования для фиксации напряжения можно использовать интегральные схемы (рис.8.18).

Рисунок 8.18. Окисление серотонина, выделяемого тучными клетками, на поверхности угольного электрода проводится при 700 мВ. Каждый всплеск в (A) представляет собой секреторное событие. Время стимуляции указано отрезком линии под кривой. Кривая зависимости тока от напряжения на (B) была получена путем изменения потенциала рабочего электрода, начиная с 0,2 В, до 1,4 В и обратно во время события. Максимальный ток был получен при потенциале окисления серотонина.

Адаптировано из Marquis BJ, Haynes CL.Влияние совместного культивирования фибробластов на характеристики экзоцитозного высвобождения тучных клеток, оцененное с помощью амперометрии с микроэлектродом из углеродного волокна. Биофиз Хим 2008; 137 (1):63–69, разрешение Elsevier.

Экспериментальная матрица 10 × 10 платиновых рабочих электродов на чипе и один заземляющий электрод Ag/AgCl была разработана для одновременного измерения кратковременного выброса адреналина и норадреналина из нескольких хромаффинных клеток. ¹⁷ Рабочие электроды поддерживают напряжение 700 мВ.Платина была выбрана в качестве материала для рабочих электродов, потому что они являются почти идеальными поляризуемыми электродами. Это означает, что постоянный ток практически не течет, а проходят только емкостные токи (см. главу 5 о поляризованных электродах, рис. 5.3 и 5.4). Чип также содержит усилители и логические схемы для передачи данных со 100 электродов на компьютер.

Конструкция схемы, которая по существу такая же, как у двухэлектродной схемы ограничения напряжения, может быть улучшена за счет использования трехэлектродной схемы, как показано на рис.4.12 и 4.13.

Амперометрическое определение других веществ, кроме катехоламинов, может быть более сложным. Например, для обнаружения инсулина (путем окисления серных мостиков) требуются специальные угольные электроды, на которые нанесена пленка оксида/цианорутената рутения и которые работают при напряжении 850 мВ. Эти электроды быстро изнашиваются, и часто ищутся другие варианты. Одним из таких вариантов является зарядка, например, β-клеток (которые секретируют инсулин) серотонином, который затем секретируется совместно с инсулином.Второй вариант — совместное культивирование с клетками, которые реагируют на секретируемые вещества. Следовательно, второй тип клеток служит детектором.

Третий вариант заключается в использовании того факта, что содержимое секреторных везикул является кислым (pH от 5 до 6). Как мы видели в главе 2, ISFET чувствительны к заряженным молекулам, в частности к протонам. При выращивании клеток на ИСПТ выход протонов на поверхность кремниевого слоя, отделяющего затвор полевого транзистора от инкубационной среды, изменяет поверхностный заряд кремниевого слоя, что влияет на ток исток-сток.На рис. 8.19 показан пример такого подхода. Секреция катехоламинов из хромаффинных клеток, выращенных на массиве ISFET, может быть вызвана вдыханием BaCl ₂ . Высвобождение сбоку клетки в B регистрировали амперометрией с использованием углеродного волокна, а секрецию в основании клетки регистрировали одним из ISFET. Несмотря на то, что места записи полевого транзистора и волокна находились на некотором расстоянии друг от друга, было обнаружено несколько совпадающих событий (С). Эта корреляция, вероятно, связана с событиями, которые произошли вблизи дна и сбоку от ячейки, где располагалось углеродное волокно.Таким образом, эти события были зарегистрированы обоими методами. ¹⁸

Рисунок 8.19. Хромаффинная ячейка на транзисторе. (A) Схематическое поперечное сечение. Везикулы выбрасываются в узкое внеклеточное пространство между клеткой и транзистором. Углеродное волокно используется для амперометрии. Экзоцитоз вызывается нанесением BaCl2 пипеткой. (B) Микрофотография кремниевого чипа с линейной транзисторной матрицей. Исток, сток и затвор (черная рамка) отмечены на верхнем транзисторе. Хромаффинная клетка покрывает примерно половину площади открытых ворот.Ячейка касается углеродного волокна справа. (C) Одновременное обнаружение высвобождения пузырьков с помощью транзисторной записи и амперометрии. Распределение событий во времени для сигнала транзистора (вверху) и амперометрии (внизу). Стимуляция импульсом 5 мМ BaCl2 отмечена стрелкой. Полоса вертикальных полос между двумя записями отмечает события, обнаруженные транзистором и углеродным волокном во временном окне 5 мс.

Адаптировано из Lichtenberger J, Fromherz P. Синапс клетка-полупроводник: транзисторная запись высвобождения пузырьков в хромаффинных клетках.Биофиз J 2007; 92 (6): 2262–68, разрешение Elsevier.

Четвертый (оптический) вариант также использует кислотную природу секреторных пузырьков. Флуоресценция усиленного зеленого флуоресцентного белка (EGFP) зависит от pH и имеет pK 6 (что означает полумаксимальную флуоресценцию при pH 6). PHluorin представляет собой мутантный вариант, имеющий более физиологически ориентированный pK, равный 7. Трансфекция клеток плазмидами, кодирующими слитый белок одного из этих двух флуорофоров, и белок, ассоциированный с везикулами, приводит к тому, что везикулы становятся флуоресцентными.Поскольку рН везикул низкий, флуоресценция также низкая. Флуоресценция в значительной степени увеличивается при слиянии секреторного пузырька с плазматической мембраной, так как затем рН резко возрастает до 7,4. Таким образом, секрецию можно наблюдать с помощью флуоресцентной микроскопии.

Пятый вариант — оптическое измерение секреции с использованием флуоресцентных красителей, таких как TMA-DPH (1-(4-триметиламмоний)-6-фенил-1,3,5-гексатриен). TMA-DPH является гидрофобным соединением, которое, тем не менее, может быть растворено в воде в микромолярных концентрациях.При контакте с клеточной мембраной быстро растворяется в липидной фазе, одновременно становясь флуоресцентным (возбуждение 340 нм, эмиссия 430 нм). Когда клетка стимулируется, секреторные гранулы сливаются с мембраной, поглощают ТМА-ДФГ и впоследствии интернализуются, делая внутреннюю часть клетки флуоресцентной. Затем внеклеточный раствор заменяют раствором, лишенным ТМА-ДФГ, который также удаляет краситель с внеклеточного листка плазматической мембраны за счет разделения между водной и липидной фазами.Затем клетку можно снова стимулировать, и теперь внутриклеточная флуоресценция снижается при слиянии секреторных пузырьков с плазматической мембраной. ^19,20

Анализ образования везикул in vitro выявляет клиентов грузов и факторы, опосредующие везикулярный транспорт

Эукариотический секреторный путь играет важную роль в доставке множества вновь синтезированных белков в их специфические резидентные компартменты. Точность транспорта белков по секреторному пути зависит от точной сортировки специфических грузовых белков в транспортные везикулы.Дефекты в сортировке грузов вызывают неправильное нацеливание белков и вызывают дефекты в установлении клеточной полярности, иммунитета, а также других физиологических процессов (1).

Различные цитозольные белки присоединяются к мембране и играют важную роль в процессе сортировки белков. Эти цитозольные белки включают малые ГТФазы семейства Arf и карго-адаптеры (1, 2). ГТФазы семейства Arf циклически переключаются между цитозольным состоянием, связанным с GDP, и состоянием, связанным с GTP. После связывания GTP белки Arf претерпевают конформационные изменения, при которых N-концевая амфипатическая спираль подвергается воздействию связывающих мембран, а домены-переключатели изменяют свою конформацию для рекрутирования различных цитозольных адапторов грузов.После рекрутирования на мембраны эти адаптеры грузов распознают мотивы сортировки на белках грузов. Этот этап распознавания важен для эффективного захвата грузовых белков в везикулы.

Белок семейства Arf, Sar1, регулирует упаковку грузовых белков в везикулы эндоплазматического ретикулума (ER). GTP-связанный Sar1 опосредует рекрутирование мембраны комплекса белков оболочки II (COPII) для захвата грузовых белков (2). Растворимые грузовые белки в просвете ER не могут быть непосредственно распознаны оболочкой COPII, и считается, что такие белки связаны с механизмом сортировки грузов на цитозольной стороне с помощью трансмембранных грузовых рецепторов.Один грузовой рецептор в клетках млекопитающих, ERGIC53, представляет собой лектин маннозы и функционирует при захвате специфических N-связанных гликопротеинов в просвете ER (3). ERGIC53 регулирует экспорт в ЭР факторов свертывания крови V и VIII, белка, родственного катепсину-Z, и альфа1-антитрипсина (4⇓⇓–7). Другой грузовой рецептор, SURF4, связывает амино-концевые трипептидные мотивы растворимых грузовых белков и регулирует экспорт растворимых грузовых белков в ЭР, включая белок желтка VIT-2 у Caenorhabditis elegans (8), а также PCSK9 и аполипопротеин B в клетках млекопитающих (8). 9⇓–11).

Хотя был достигнут значительный прогресс в понимании общих этапов сортировки грузов, спектр грузовых клиентов конкретного члена семейства Arf, грузового адаптера или грузового приемника остается в значительной степени недостаточно изученным. Чтобы углубить наше понимание сортировки белков в секреторном пути, важно разработать надежный подход для систематического выявления грузовых белков, которые зависят от специфического фактора для эффективной упаковки в везикулы. Выявление этого даст существенное представление о функциях и специфике сортировки грузов.Поскольку различные цитозольные белки рекрутируются на мембраны с помощью различных GTP-связанных белков семейства Arf, необходимы систематические подходы для характеристики событий почкования, связанных со специфическим GTP-связанным белком семейства Arf.

Метод клеточной визуализации, парный анализ грузовых рецепторов (PAIRS), был использован для идентификации спектра грузовых белков, которые зависят от конкретного грузового рецептора для экспорта ER у дрожжей. Этот анализ был сосредоточен примерно на 150 молекулах груза, помеченных флуоресцентными метками (12).Анализ in vitro, который восстанавливает упаковку грузовых белков в везикулы, был использован для выявления белковых профилей везикул, связанных с очищенными белками COPII или COPI (13). Однако этот анализ не выявил каких-либо трансмембранных или секреторных белков, не являющихся резидентами ER (13). Возможно, это связано с недооцененной потребностью в других цитозольных факторах в дополнение к оболочкам COP. Аффинная хроматография использовалась для выявления цитозольных белков, которые специфически взаимодействуют с GTP-связанными белками Arf или Rab (14⇓–16).При таком подходе мембраны разрушаются, что может препятствовать идентификации ассоциированных с мембраной эффекторов. Таким образом, важно разработать дополнительные подходы для выявления новых цитозольных белков, которые связываются с GTP-связанными белками Arf на мембранах.

Здесь мы использовали анализ in vitro для восстановления упаковки грузовых белков в транспортные везикулы с использованием цитозоля печени крысы (RLC) в качестве источника цитозольных белков. Анализ фракций везикул с помощью количественной масс-спектрометрии (МС) выявил цитозольные белки, которые связаны с везикулами, зависящими от GTP или связанного с GTP Sar1A, и которые регулируют транспортировку белков.Один из идентифицированных белков, PRRC1, регулирует ассоциацию с мембраной оболочки COPII и облегчает транспортировку ER в Golgi. Мы также обнаружили, что грузовые белки, которые зависят от специфических грузовых рецепторов, ERGIC53 или SURF4, эффективно упаковываются в везикулы. Наше исследование показывает, что анализ образования везикул является надежным инструментом для выявления функциональной роли специфических факторов в сортировке белков и для выявления новых факторов, которые регулируют везикулярный транспорт в секреторном пути.

Результаты

Анализ образования воспроизведенных везикул in vitro для протеомного анализа.

Анализ образования везикул in vitro для восстановления упаковки грузовых белков в везикулы из клеток млекопитающих хорошо зарекомендовал себя (17⇓⇓⇓–21). Мы стремились провести этот анализ в клетках HEK293T в больших масштабах, а затем выполнить протеомный анализ изолированных везикул. Общие процедуры анализа образования пузырьков показаны на рис. 1 A . Вкратце, клетки HEK293T пермеабилизировали дигитонином, после чего полуинтактные клетки промывали буфером для удаления цитозольных белков.Затем промытые полуинтактные клетки инкубировали при 30 °C с RLC, GTP и системой регенерации АТФ (ATPrS). Небольшие везикулы, высвободившиеся во время этой инкубации, отделяли от тяжелых донорских мембран центрифугированием на средней скорости. Супернатант, содержащий фракцию везикул, доводили до 35% Opti-Prep и покрывали слоями 30% Opti-Prep и реакционного буфера. Затем образцы центрифугировали для отделения везикул от цитозольных белков, не связанных с мембранами.Было проведено два контрольных эксперимента: один в отсутствие ГТФ и АТФрС, а другой в присутствии негидролизуемого аналога ГТФ, ГМФФНП.

Рис. 1.

Крупномасштабный анализ образования пузырьков in vitro для протеомного анализа. ( A ) Диаграмма, демонстрирующая экспериментальные процедуры анализа образования пузырьков. ( B – D ) Визуализация морфологии плавучих мембранных структур, образующихся в результате реакции почкования. Плавучие мембраны выделяли флотацией в градиенте плотности и анализировали с помощью ПЭМ с отрицательным окрашиванием.( C’ и D’ ) Увеличенные изображения обвиняемых участков в C и D . (Масштабная линейка, 100 нм.) ( E ) Количественное определение диаметра структур в форме пончика из трех биологических повторов (среднее значение ± SD ***** P <0,00001). ( F–H ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Фракции везикул анализировали с помощью иммуноблота ( F и G ) или окрашивания кумасси синим ( H ).ATPrS: система регенерации АТФ. ( I и J ). Анализ образования везикул проводили в присутствии GTP ( I ) или GMPPNP ( J ). Фракции везикул оценивали флотацией в градиенте плотности. ( K и L ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Фракцию везикул анализировали методом иммуноблоттинга с использованием указанных антител. Данные, показанные в F , G и K , являются репрезентативным примером трех биологических повторов.

Мы выполнили электронную микроскопию с негативным окрашиванием, чтобы визуализировать морфологию плавучих мембранных структур, образующихся в реакции почкования везикул. Мы обнаружили многочисленные мелкие мембранные структуры со средним диаметром 67 нм (рис. 1 C и E ). Когда мы проводили реакцию почкования везикул в отсутствие GTP и ATPrS или в присутствии GMPPNP, количество везикул значительно уменьшалось (рис. 1 B и D ). Средний диаметр мембранных структур, полученных в присутствии GMPPNP, значительно уменьшился до 54 нм (рис.1 E , увеличенные изображения на рис. 1 C’ и D’ ). Эти анализы согласуются с медленно оседающими мембранами в реакции почкования, представляющими скорее транспортные везикулы, чем фрагменты ER или Golgi.

Плавучие мембраны анализировали с помощью иммуноблоттинга с антителами против стандартных грузовых белков в везикулах COPII, Sec22B (tSNARE) и ERGIC53. Захват ERGIC53 и Sec22B фракцией везикул усиливался ATPrS и GTP (рис.1 F , сравните дорожки 1 и 2) и снижается в присутствии GMPPNP (рис. 1 F , сравните дорожки 2 и 3), что позволяет предположить, что гидролиз GTP важен для эффективной упаковки грузовых белков в транспортные везикулы. Напротив, белки оболочки везикул, включая γ- и μ-субъединицы адаптерного комплекса 1 (AP1γ1 и AP1μ1) и внутреннюю субъединицу COPII Sec23A/B, были более прочно связаны с фракцией везикул в присутствии GMPPNP (рис. 1 F , сравните дорожки 2 и 3).Резидентный белок ER, кальретикулин, не был обнаружен во фракции везикул во всех экспериментальных группах (рис. 1 G ). Эти результаты подтверждают, что гидролиз GTP позволяет высвобождать AP-1 и COPII из мембран (1, 2) и что эта рециркуляция важна для поддержания эффективного образования везикул. Затем мы проанализировали белки во фракциях плавучих везикул с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и окрашивания кумасси синим (рис. 1 H ), отметив различные белковые композиции для различных условий реакции.Опять же, картина восстановления белка согласуется с белками оболочки, стабилизированными в присутствии GMPPNP, и более сильным высвобождением везикул в контексте ATPrS и GTP. Наконец, мы оценили распределение грузов и белков оболочки в градиенте OptiPrep, обнаружив, что Sec22B и ERGIC53 обогащены верхней фракцией (рис. 1 I и J ). Мы обнаружили Sec23A/B во флотировавшей фракции только тогда, когда анализ образования везикул проводили в присутствии GMPPNP (рис.1 I и J ).

Поскольку в этих экспериментах в качестве источника белков оболочки использовали цитозоль, могут образовываться везикулы нескольких типов. Sec22B и ERGIC53 были упакованы во фракцию везикул с очищенным COPII, хотя и с меньшей эффективностью по сравнению с реакциями с цитозолем (фиг. 1 K , сравните дорожки 1 и 4). Ранее было показано, что очищенные белки COPII способствуют везикулярному высвобождению грузовых белков ER-Golgi (17, 22). Соответственно, когда RLC в низкой концентрации был дополнен очищенным COPII, высвобождение Sec22B и ERGIC53 в везикулы усиливалось (рис.1 K , сравните дорожку 5 с дорожками 3 и 4), тогда как кальретикулин не был обнаружен (рис. 1 L ). Эти анализы показывают, что некоторые белки в RLC работают вместе с очищенным COPII, способствуя упаковке грузовых белков в везикулы. Поэтому мы использовали цитозоль, приготовленный из печени крысы, в качестве источника цитозольных белков в анализе образования пузырьков для нашего последующего количественного анализа.

Идентификация цитозольных белков, связанных с везикулами в зависимости от GTP.

Эксперименты по мечению Immunogold показали, что многие везикулярные структуры, образующиеся в присутствии GMPPNP, были помечены антителами против AP1γ1 или внешней субъединицы COPII, Sec31A (рис. 2 A ). Напротив, мы не обнаружили везикулярных структур, образующихся в присутствии GTP, которые были помечены этими антителами. Интересно, что средний диаметр везикулярных структур, помеченных AP1γ1, был значительно меньше, чем помеченных Sec31A (66 нм против 77 нм, рис.2 B ), предполагая, что везикулы, покрытые AP-1, меньше, чем везикулы, покрытые COPII.

Рис. 2.

Идентификация цитозольных белков, которые связаны с везикулами GTP-зависимым образом, и грузовых белков, которые упакованы в везикулы зависимым от GTP-гидролиза образом. ( A ) ПЭМ Immunogold выполняли с использованием антител AP1γ1 и Sec31A для маркировки структур в форме пончика, полученных в присутствии GMPPNP. (Масштабная линейка, 50 нм.) ( B ) Количественное определение диаметра структур в форме пончика, помеченных антителами против AP1γ1 и Sec31A (среднее ± SD * P <0.05, из двух биологических повторов). ( C ) Анализ образования везикул проводили в присутствии GTP или GMPPNP. Выделенные везикулы в каждой экспериментальной группе ресуспендировали в сурфактанте RapiGest SF. Белки во фракциях везикул расщепляли трипсином и анализировали масс-спектрометрией без метки. Всего в обеих экспериментальных группах было идентифицировано 1285 белков. Отношение log2 количества каждого идентифицированного белка в везикулах, приготовленных в присутствии GMPPNP, к таковому в везикулах, приготовленных в присутствии GTP, было нанесено на ось x , а значение разницы –log10 P было построен по оси y .( D и E ) Гистограмма log2 содержания человеческих белков, идентифицированных во фракции везикул, образованной в присутствии GMPPNP ( D ) или GTP ( E ). ( F ) Список 20 самых распространенных человеческих белков в группе GMPPNP или в группе GTP. ( G ) Количество белков, классифицированных на основе прогнозов Uniprot.

Чтобы получить всестороннее представление о цитозольных белках, которые связаны с мембранами везикул GTP-зависимым образом, мы провели количественную масс-спектрометрию без меток, чтобы сравнить белковые профили фракций везикул в GTP и GTP.Условия обработки GMPPNP основаны на трех биологических повторах. В общей сложности было идентифицировано и количественно определено 1285 белков, каждый из которых имел два или более уникальных пептида с коэффициентом ложного обнаружения (FDR) <0,01 и был успешно количественно определен во всех трех биологических повторах ( SI Приложение , Таблица S1, лист 1). Количественно определяли кратность изменений идентифицированных белков в группе GMPPNP по сравнению с группой GTP. На основе содержания белка было рассчитано значение P и нанесено на график в зависимости от среднего логарифмического 2-кратного изменения.Белки с кратностью изменения >2 и значением P <0,05 считаются значительными совпадениями. С помощью этого подхода было идентифицировано 54 белка, имеющих более чем двукратное обогащение в группе GMPPNP по сравнению с группой GTP ( P < 0,05, рис. 2 C , область B; белки, идентифицированные с использованием базы данных белковых последовательностей Homo sapiens). обозначены круглыми фигурами, а дополнительные белки, идентифицированные с использованием базы данных Rattus norvegicus , обозначены треугольниками; SI Приложение , таблица S1, лист 2).Кроме того, был рассчитан FDR на основе перестановок (значение q ) (23). Большинство идентифицированных попаданий (за исключением двух белков) показали q значение <0,05 ( Приложение SI , таблица S1, лист 2). Всего 36 белков (67%) были известными белками семейства Arf, белками Rab и адаптерами грузов (рис. 2 C , область B, отмечена розовым цветом).

Стехиометрический анализ грузовых белков и грузовых адаптеров показан на рис. 2 D и E . Грузовые адаптеры, белки Arf и Rab, были значительно обогащены в группе GMPPNP по сравнению с группой GTP ( P < 0.01) (рис. 2 D , отмечены розовым цветом) и составляли 65% 20 наиболее распространенных белков (13 из 20 белков) в группе GMPPNP (рис. 2 F , отмечены розовым цветом). Мы идентифицировали несколько цитозольных белков в дополнение к Arf, Rab и известным транспортным белкам-адапторам, которые связаны с везикулами GTP-зависимым образом (рис. 2 C , область B, отмечена синим цветом и SI Приложение , таблица S1). , лист 4). Мы предполагаем, что эти белки могут быть адаптерами грузов или белками, связанными с оболочками везикул.Белки, выделенные двойными звездочками, являются теми белками, которые впервые были предсказаны настоящим исследованием как ассоциированные с покрытыми везикулами. В предыдущих исследованиях было предсказано, что белки, отмеченные одной звездочкой, связаны с везикулами, покрытыми клатрином (24⇓–26). Клеточные функции большинства этих белков неясны.

Идентификация белков-карго, обогащенных везикулами, в зависимости от GTP-гидролиза.

Затем мы охарактеризовали грузовые белки, которые упакованы в везикулы, в анализе образования везикул.Мы определили грузовые белки как растворимые секреторные белки или трансмембранные белки, локализованные в аппарате Гольджи, эндосомах, лизосомах или плазматической мембране. Для упрощения мы классифицировали трансмембранные грузовые рецепторы как грузовые белки. Грузовые белки, в отличие от грузовых адаптерных белков, были обогащены в группе GTP ( P < 0,01) (рис. 2 E , отмечены зеленым цветом) и составляли 55% первых 20 наиболее распространенных белков (11 из 20). белки) в группе GTP (рис. 2 F , отмечены зеленым цветом).Дальнейший анализ показывает, что 4% (51 белок) белков, идентифицированных во фракции везикул, были предсказаны аннотацией Uniprot как белки растворимого секреторного груза (рис. 2 G и SI Приложение , таблица S1, лист 5). Было предсказано, что в общей сложности 37% (482 белка, SI Приложение , таблица S1, лист 5) белков, идентифицированных во фракции везикул, являются трансмембранными белками. Предполагается, что среди предсказанных трансмембранных белков 179 проявляют локализацию по методу Гольджи, 21 белок может секретироваться предположительно во внеклеточные везикулы, 123 белка, как предполагается, проявляют локализацию в плазматической мембране, а 62 белка обнаруживают эндосомальную и лизосомальную локализацию (рис.2 G и SI Приложение , таблица S1, лист 5). Мы также обнаружили несколько трансмембранных белков, которые, как предполагается, расположены в митохондриях или пероксисомах во фракции везикул (рис. 2 G и SI Приложение , таблица S1, лист 5). Эти белки могут быть связаны с везикулами, происходящими из митохондрий или пероксисом.

Наши анализы показывают, что содержание определенных грузовых белков в большей степени увеличивается во фракции везикул, когда анализ образования везикул проводится в присутствии GTP, чем в присутствии GMPPNP.Мы обнаружили, что 216 белков продемонстрировали более чем двукратное обогащение в группе GTP по сравнению с группой GMPPNP ( P <0,05, рис. 2, C , область A и SI, Приложение , таблица S1, лист 3). Значения q для большинства идентифицированных попаданий (за исключением одного белка) составляют <0,05 ( SI, Приложение , Таблица S1, лист 3). В общей сложности 72% (всего 156) белков среди 216 идентифицированных белков в области А, по прогнозам Uniprot, являются трансмембранными белками: 110 из них, по прогнозам, показывают локализацию Гольджи, 11 из предсказанных трансмембранных белков могут быть секретированы, 21 предполагается, что белки обнаруживают локализацию в плазматической мембране, а 8 демонстрируют эндосомальную и лизосомальную локализацию (рис.2 G и SI Приложение , таблица S1, лист 6). Шесть из идентифицированных белков в области А являются растворимыми белками секреторного груза (рис. 2 G ). Мы предполагаем, что эти трансмембранные белки и растворимые секреторные белки являются грузовыми белками, которые упакованы в везикулы зависимым от GTP-гидролиза образом.

FAM84B/LRATD2 связывается с везикулами GTP-зависимым образом и регулирует транспорт EGFR от ER к аппарату Гольджи.

Затем мы попытались провести эксперименты для проверки одного из идентифицированных попаданий, FAM84B или домена LRAT 2 (LRATD2), который связывается с мембранами везикул GTP-зависимым образом (рис.2 С ). Предполагается, что FAM84B/LRATD2 обнаруживается в везикулах, покрытых клатрином, и частично локализуется совместно с AP1γ1 (24, 25). Вестерн-блоттинг подтвердил, что FAM84B/LRATD2 значительно усиливался во фракции везикул, когда инкубацию проводили в присутствии GMPPNP (фиг. 3 —, сравните дорожки 2 и 3). HA-меченый FAM84B/LRATD2 (FAM84B-HA) был частично локализован в цитоплазме и частично расположен в околоядерной области Гольджи, колокализованной с TGN46 ( SI Приложение , рис.S1 А ). После обработки клеток дигитонином для удаления цитозольного пула FAM84B/LRATD2 частично располагался в околоядерной области Гольджи и частично располагался в мембранных структурах на периферии клетки, предположительно в ЭР ( SI Приложение , рис. S1 B ). и С ). FAM84B-HA коиммунопреципитировался с AP1γ1 и Sec23A/B, но не с Sar1A в присутствии сшивающего агента (фиг. 3 B ).

Рис. 3.

FAM84B/LRATD2 рекрутируется на мембраны везикул GTP-зависимым образом, взаимодействует с AP1γ1 и Sec23A/B и регулирует транспорт EGFR от ER к аппарату Гольджи, но не ShhN или IGF2.( A ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Белки во фракции везикул анализировали вестерн-блоттингом. ( B ) Клетки HEK293T, экспрессирующие FAM84B-HA, обрабатывали 2 мМ дитиобис(сукцинимидилпропионатом) (DSP) и клеточные лизаты инкубировали с шариками, конъюгированными с антителами HA. После инкубации связанные белки анализировали вестерн-блоттингом с использованием указанных антител. ( C ) Клетки HEK293T трансфицировали контрольной миРНК или миРНК против FAM84B/LRATD2.На 3-й день после трансфекции клетки лизировали и анализировали с помощью вестерн-блоттинга. ( D , F и H ) клетки HEK293T трансфицировали контрольной миРНК или миРНК против FAM84B/LRATD2. Через 24 часа после трансфекции клетки трансфицировали плазмидами, кодирующими указанные конструкции. На 3-й день после нокдауна клетки инкубировали с биотином и циклогексимидом в течение 15 мин и анализировали локализацию грузовых белков с помощью флуоресцентного микроскопа. (Шкала, 10 мкм.) ( E , G и I ) Количественное определение процента клеток, показывающих локализованные по Гольджи грузовые белки в каждой экспериментальной группе (среднее значение ± стандартное отклонение; n = 3; >100 клеток подсчитано для каждого эксперимента) . **** Р < 0,0001; ***** P < 0,00001; н.с., не имеет значения. Данные, показанные в A – C , являются репрезентативными примерами трех биологических повторов.

Мы проанализировали роль FAM84B/LRATD2 в антероградном переносе.Мы выбрали трансмембранный грузовой белок, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) и два растворимых секреторных грузовых белка, инсулиноподобный фактор роста II (IGF2) и N-концевой фрагмент звукового ежа (ShhN) (27). Мы проанализировали перенос EGFR, ShhN и IGF2 посредством удержания с использованием анализа транспорта селективного крючка (RUSH) (28, 29). В анализе RUSH клетки HEK293T трансфицировали плазмидой, кодирующей человеческий EGFR или мышиный ShhN, или человеческий IGF2, меченный EGFP и пептидом, связывающим стрептавидин (SBP) (SBP-EGFP-EGFR или SBP-EGFP-ShhN, или SBP-EGFP-IGF2). -ХА).Эта плазмида также кодирует стрептавидин, слитый с С-концевым сигналом удержания ER (Lys-Asp-Glu-Leu; Str-KDEL) ( SI Приложение , рис. S2 A , H и O ). Из-за связывания между стрептавидином и SBP эти грузовые белки сохранялись в ER, совместно локализованном с локализованным в ER белком, мутантом Vangl2 с петлевым хвостом (HA-Vangl2 ^D255E ) (17) ( SI Приложение , рис. S2 B-D и I-K ), или с локализованным в ЭР белком Myc-atlastin-1 ( SI Приложение , рис.S2 P-R ). В этом состоянии SBP-EGFP-ShhN был в значительной степени колокализован с периферическими мембранными структурами, отмеченными FAM84B-HA в присутствии дигитонина ( SI Приложение , рис. S1 D ). Когда клетки инкубировали с биотином, SBP высвобождается из стрептавидина, тем самым высвобождая белки-карго из ER ( SI Приложение , рис. S2 A , H и O ). Через тридцать минут после обработки биотином SBP-EGFP-EGFR, SBP-EGFP-ShhN и SBP-EGFP-IGF2-HA были доставлены в околоядерную область, колокализованную с маркером TGN, TGN46 ( SI Приложение , рис.S2 E – G , L – N и S – U ). Нокдаун FAM84B/LRATD2 вызвал значительную задержку транспорта EGFR из ER в Golgi в ​​транспортной системе RUSH (рис. 3 C и SI Приложение , рис. S3 A и B ). Дефекты устраняли путем экспрессии устойчивой к миРНК конструкции FAM84B-HA (фиг. 3 D и E ). Напротив, нокдаун FAM84B/LRATD2 не вызывал дефектов в транспорте SBP-EGFP-ShhN и SBP-EGFP-IGF2-HA от ER к аппарату Гольджи (рис.3 F–I ). Эти анализы показывают, что FAM84B/LRATD2 важен для транспорта EGFR от ER к аппарату Гольджи, но не ShhN и IGF2.

Идентификация белков-карго и цитозольных белков, которые зависят от Sar1A для их ассоциации с транспортными везикулами.

Эксперимент, проведенный в присутствии GTP или GMPPNP, показал, что белки, которые в значительной степени зависят от группы GTP-связывающих белков, таких как белки семейства Arf и белки Rab, связаны с везикулами.Затем мы стремились использовать этот анализ для идентификации цитозольных белков и грузовых белков, которые зависят от специфического GTP-связывающего белка, который должен быть включен в транспортные везикулы. Мы сосредоточили наш анализ на члене семейства Arf, Sar1, который инициирует сборку покрытия COPII в ER (2). Sar1 имеет две изоформы в клетках млекопитающих: Sar1A и Sar1B (2). Мутация H79G блокирует Sar1A в его GTP-связанной форме и ингибирует COPII-зависимый экспорт ER (30). В соответствии с предыдущими сообщениями, Sar1A(H79G) значительно устранял везикулярный захват Sec22B и ERGIC53 (рис.4 А ). Напротив, Sar1A(H79G) не препятствует везикулярному высвобождению TGN46 (Fig. 4 B ), грузового белка, который циклически перемещается между плазматической мембраной и Golgi (31). Кроме того, мы обнаружили, что Sar1A(H79G) усиливал мембранную ассоциацию Sec23A/B (рис. 4 C , сравните дорожки 3 и 2). Напротив, доминирующая активная форма другой малой ГТФазы, Arfrp1 (Q79L), не усиливала мембранную ассоциацию Sec23A/B (фиг. 4 C , сравните дорожки 4 и 3).Эти анализы предполагают, что наш анализ образования везикул повторяет специфические функции Sar1A в опосредовании сборки белков оболочки COPII и в регуляции упаковки грузовых белков в везикулы COPII.

Рис. 4.

Идентификация грузовых белков и цитозольных белков, которые зависят от Sar1A и связаны с транспортными везикулами. ( A–C ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Фракции везикул анализировали с помощью иммуноблота. ( D ) Анализ образования везикул проводили в присутствии или в отсутствие Sar1A(H79G).Выделенные везикулы в каждой экспериментальной группе ресуспендировали в сурфактанте RapiGest SF. Белки во фракциях везикул расщепляли трипсином и анализировали масс-спектрометрией без метки. Отношение log2 содержания каждого идентифицированного белка в везикулах, приготовленных в присутствии Sar1A(H79G), к таковому в везикулах, приготовленных в отсутствие Sar1A(H79G), наносили на ось x , а на оси −log10 P По оси y откладывалось значение разности .( E ) Количество белков, идентифицированных в области A в D , классифицированных на основе прогнозов Uniprot. ( F–H ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Фракцию везикул анализировали с помощью иммуноблота. Данные, представленные в A–C и F–H , являются репрезентативными примерами трех биологических повторов.

Мы предполагаем, что белки, содержание которых значительно снижено в присутствии Sar1A(H79G), представляют собой грузовые белки, связанные с везикулами COPII, и что цитозольные белки, содержание которых значительно усиливается в присутствии Sar1A(H79G), являются белками оболочки COPII или белками, которые непосредственно или косвенно взаимодействуют с покрытием COPII.Поэтому мы провели крупномасштабный анализ образования пузырьков в присутствии или отсутствии Sar1A(H79G). Белки во фракциях везикул определяли количественно с помощью масс-спектрометрии без метки (рис. 4 D ). Всего было идентифицировано и количественно определено 1223 белка, каждый из которых имел два или более уникальных пептида (FDR <0,01) и был успешно количественно определен во всех трех биологических повторах ( SI Приложение , таблица S2, лист 1). Этот анализ показывает, что подавляющее большинство белков, значительно обогащенных везикулами, образованными в присутствии Sar1A(H79G), являются субъединицами оболочки COPII (более чем двукратное обогащение, P < 0.05, рис. 4 D , область B и SI Приложение , таблица S2, лист 2). Однако цитозольный белок в дополнение к субъединицам COPII был значительно обогащен в состоянии Sar1A(H79G) (рис. 4 D , область B и SI, приложение , таблица S2, лист 2, белки, идентифицированные с использованием базы данных белковых последовательностей H. sapiens обозначены круглыми формами, и никаких дополнительных белков не было идентифицировано с использованием базы данных R. norvegicus ). Все идентифицированные совпадения показали значение q <0.05 ( SI Приложение , Таблица S2, лист 2).

Семьдесят три белка были идентифицированы со значительным обогащением в необработанной группе по сравнению с группой Sar1A(H79G) (более чем двукратное обогащение, P <0,05, рис. 4 D , область A и SI Приложение , таблица С2, лист 3). В общей сложности 62 из этих белков показали значение q <0,05 ( SI, Приложение , Таблица S2, лист 3). Предполагается, что в общей сложности 50 из этих 62 белков являются трансмембранными белками, а 4 являются растворимыми грузовыми белками, которые являются секреторными или расположены в комплексе Гольджи (рис.4 E и SI Приложение , таблица S2, лист 4). Было предсказано, что многие из трансмембранных белков обнаруживают локализацию в плазматической мембране и аппарате Гольджи (рис. 4, , E и , Приложение SI , таблица S2, лист 4). Ни для одного из этих трансмембранных белков не было предсказано локализации в митохондриях или пероксисомах. Все белки SNARE, идентифицированные в области B (Sec22A, Sec22B, STX5, GOSR2 и BET1), опосредуют транспортировку ER к Golgi. В общей сложности 33 из 62 попаданий были идентифицированы как связанные с везикулами COPII, воссозданными очищенными компонентами COPII, содержащими определенные изоформы Sec24 (13) ( SI, Приложение , Таблица S2, лист 3).Всего в предыдущем исследовании не было идентифицировано 29 белков ( SI, Приложение , Таблица S2, лист 3, выделены одиночными звездочками), и многие из них являются трансмембранными белками, которые, по прогнозам, демонстрируют локализацию на Гольджи или плазматической мембране. Вестерн-блоттинг подтвердил, что три трансмембранных белка, ERGIC1, SURF4 и LMAN2, присутствовали во фракции везикул, и их везикулярное высвобождение было значительно снижено под действием Sar1A(H79G) (рис. 4 F–H ), что указывает на то, что они упакованы в COPII везикулы.В области А было идентифицировано несколько цитозольных белков, включая RabL3, Sec23IP и SCFD1. Было показано, что SCFD1 и Sec23IP регулируют транспортировку ER-к-Гольджи в клетках млекопитающих (32⇓-34). Роль RabL3 в доставке ER к Golgi еще предстоит исследовать.

Таким образом, эти анализы выявили белки-кандидаты-грузы, которые упакованы в везикулы COPII, и белки-кандидаты цитозольных белков, которые связаны с везикулами, покрытыми COPII. Более того, эти анализы показывают, что наш подход является надежным в выявлении эффекторных белков, которые связаны с GTP-связанными белками семейства Arf на мембранах везикул.

PRRC1 рекрутируется в мембраны везикул с помощью GTP-связанного Sar1A, располагается в местах выхода ER и регулирует трафик ER-to-Golgi.

Наш анализ определил, что богатый пролином домен-содержащий белок, PRRC1, рекрутируется в везикулы с помощью GTP-связанного Sar1A (рис. 4 D , область B). Клеточная функция PRRC1 неизвестна. Вестерн-блоттинг подтвердил, что везикулы, полученные в присутствии Sar1A(H79G), содержат более высокие уровни PRRC1 (фиг. 5 —). Поэтому мы проверили, является ли PRRC1 партнером по связыванию Sar1A, используя подход GST-pulldown.Очищенный меченный GST человеческий Sar1A с удаленной N-концевой амфипатической спиралью (GST-Sar1A ^Δ1–17 ) загружали GDP или GMPPNP, а затем инкубировали с RLC. Концентрация RLC в реакционной смеси была равна концентрации, используемой в анализе образования везикул. После инкубации белки, которые связывались с Sar1A GTP-зависимым образом, элюировали этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА). Вестерн-блот анализ элюированной фракции показал, что Sec23A/B был специфически обнаружен в элюате GST-Sar1A ^Δ1–17 , нагруженного GMPPNP, но не нагруженного GDP, иммобилизованного на гранулах глутатиона (фиг.5 B , сравните дорожки 1 и 2). Напротив, PRRC1 не был обнаружен в элюате GST-Sar1A ^Δ1–17 , нагруженного GMPPNP (рис. 5 B ). Это вытягивание GST произошло в отсутствие липидного двойного слоя, тогда как анализ образования пузырьков сохраняет липидные двойные слои ER и Golgi. Мы предполагаем, что анализ образования пузырьков имеет то преимущество, что выявляет белок-белковые взаимодействия, которые происходят на липидных бислоях. Следовательно, для взаимодействия между PRRC1 и Sar1A могут потребоваться интактные мембраны.

Рис. 5.

PRRC1 взаимодействует с Sec23A/B, и нокдаун увеличивает мембранную ассоциацию Sec31A и Sec24C и снижает транспорт EGFR и ShhN от ER к аппарату Гольджи. ( A ) Анализ образования везикул проводили с использованием указанных реагентов. Фракции везикул анализировали с помощью иммуноблота. ( B ) GST-Sar1A ^Δ1–17 загружали GDP или GMPPNP, а затем инкубировали с цитозолем печени крысы. После инкубации белки, которые связывались с Sar1A нуклеотид-зависимым образом, элюировали ЭДТА.Элюированную фракцию и белки, оставшиеся на шариках после элюции, анализировали с помощью иммуноблота. ( C и D ) Агарозные шарики M2 инкубировали с клеточными лизатами из клеток HEK293T, экспрессирующих PRRC1-FLAG. После инкубации связанные белки элюировали пептидами 3×FLAG и анализировали с помощью вестерн-блоттинга с использованием указанных антител. ( E ) Клетки HEK293T трансфицировали контрольной миРНК или миРНК против PRRC1. На 3-й день после трансфекции клетки лизировали и анализировали с помощью вестерн-блоттинга.( F – Q ) Клетки HEK293T трансфицировали контрольной миРНК ( F–H, L – N ) или миРНК против PRRC1 ( I–K, O – Q ). На 3-й день после трансфекции локализацию Sec31A, Sec24C и Golgin97 анализировали с помощью иммунофлуоресценции. (Масштабная линейка, 10 мкм.) Увеличенные изображения указанной области в F , I , L и O показаны в F′ , I′ , L′ 9 , и О’ .( R–T ) Количественное определение общего уровня флуоресценции Sec31A ( R ), Sec24C ( S ) и Golgin97 ( T ) на клетку (среднее значение ± стандартное отклонение; n = 3; >125 клетки из девяти случайных полей изображения, подсчитанных для каждого эксперимента). В каждом эксперименте общий уровень флуоресценции нормализовали к таковому в ложных клетках. ** Р < 0,01; НС, не существенно. ( U и W ) Клетки HEK293T трансфицировали контрольной миРНК или миРНК против PRRC1.Через 24 часа после трансфекции клетки повторно трансфицировали плазмидами, кодирующими указанную конструкцию. На 3-й день после нокдауна клетки инкубировали с биотином в течение указанного времени и анализировали локализацию указанного белка с помощью флуоресцентного микроскопа. (Масштабная линейка, 10 мкм.) ( V и X ) Количественное определение процента клеток с локализованным по Гольджи EGFR или ShhN в клетках, обработанных контрольной миРНК или миРНК против PRRC1 (среднее значение ± стандартное отклонение; n = 3 ; >100 клеток подсчитано для каждого эксперимента).*** Р < 0,001; ** Р < 0,01. Данные, показанные в A , B , D и E , являются репрезентативными примерами трех биологических повторов.

Эксперименты по коиммунопреципитации показывают, что меченный FLAG PRRC1 взаимодействует с внутренней субъединицей COPII, Sec23A/B, но не с внешней субъединицей COPII, Sec31A (рис. 5 C и D , сравните дорожки 1 и 2). Нокдаун PRRC1 вызывал значительное усиление общего клеточного иммунофлуоресцентного сигнала, связанного с Sec31A и Sec24C, но не с Golgin97 (рис.5 E–Q , количественное определение на рис. 5 R–T ). Поскольку уровень экспрессии Sec31A в клетках с нокдауном PRRC1 был аналогичен уровню в клетках, подвергнутых ложной обработке (рис. 5 E ), усиленная флуоресценция предполагает, что в отсутствие PPRC1 обогащение Sec31A и Sec24C в местах выхода ER увеличивается. . Кроме того, нокдаун PRRC1 вызвал задержку транспорта EGFR и ShhN из ER в аппарат Гольджи в транспортной системе RUSH (рис. 5 U и W и количественные оценки на рис.5 V и X ), указывая на то, что PRRC1 важен для транспорта от ER к Golgi как трансмембранного белка-груза, EGFR, так и растворимого секреторного белка-груза, ShhN.

Затем мы проанализировали локализацию PRRC1 с С-концевой HA-меткой (PRRC1-HA). При экспрессии на низких уровнях PRRC1-HA был частично локализован в околоядерной области, колокализованной с околоядерным Sec31A ( SI, Приложение , рис. S4, AD, и увеличенные изображения в SI, Приложение , рис.S4 A’ , B’ и D’ ). При экспрессии на высоких уровнях PRRC1-HA частично располагался в ядре и цитоплазме, а Sec31A и TGN46 были диспергированы в гиперэкспрессирующих клетках ( SI Приложение , рис. S4 E-H ). После обработки клеток дигитонином в присутствии GMPPNP цитоплазматический пул PRRC1-HA был диспергирован, и PRRC1 демонстрировал четкий околоядерный паттерн, который колокализовался с околоядерным Sec31A ( SI Приложение , рис.S4 I – K ). Некоторые из PRRC1-HA также расположены в точечных структурах на периферии клетки, и большинство этих точечных участков PRRC1 локализованы вместе с Sec31A ( SI, Приложение , рис. S4 K’ — K» ), предполагая, что PRRC1 расположен в местах выхода ER (ERES).

Чтобы проверить, может ли PRRC1 рекрутироваться в ERESs GTP-зависимым образом, мы провели анализ пермеабилизированных дигитонином клеток (35).Клетки HeLa пермеабилизировали, промывали солью и инкубировали с цитозолем, приготовленным из клеток HEK293T, экспрессирующих PRRC1-HA, в присутствии GTP или GMPPNP. Как Sec31A, так и PRRC1-HA эффективно рекрутировались в околоядерную область и в точечные структуры на периферии клетки в присутствии GMPPNP ( SI Приложение , рис. S4 P-S ). Напротив, эти белки не были эффективно задействованы в полуинтактных клетках в присутствии GTP ( SI Приложение , рис.S4 L–O и количественные оценки в SI, Приложение , рис. S4 W–X ). Большинство периферических точечных структур, помеченных PRRC1-HA, были локализованы вместе со структурами, помеченными Sec31A, в присутствии GMPPNP ( SI Приложение , рис. S4 P-S и увеличенные изображения в SI Приложение , рис. S4 Т’ – В»» ). Эти результаты указывают на то, что PRRC1 рекрутируется на ERESs GTP-зависимым образом и модулирует мембранную ассоциацию оболочки COPII и транспортировку ER к Golgi.

Идентификация потенциальных трансмембранных клиентов везикул COPI.

Мы обнаружили значительное обогащение субъединиц COPI во фракции везикул, продуцируемой в присутствии GMPPNP ( SI, Приложение , Таблица S1, лист 2), предполагая, что фракция везикул содержит везикулы COPI. Чтобы идентифицировать клиентов везикул COPI, мы сосредоточили наш анализ на трансмембранных белках во фракции везикул. Мы предположили, что мембранные белки, отвечающие следующим критериям, вероятно, являются клиентами везикул COPI: 1) предсказанные Uniprot, локализованы в аппарате Гольджи, но не локализованы в эндосомах, лизосомах или плазматической мембране; и 2) количество во фракции везикул, существенно не сниженное Sar1A(H79G).В общей сложности 82 трансмембранных белка во фракции везикул соответствовали этим критериям и, следовательно, вероятно, были клиентами везикул COPI ( SI, Приложение , Таблица S2, лист 5). В общей сложности 27 из них были ранее идентифицированы в протеоме ядра везикул COPI клеток HeLa (13) ( SI Приложение , Таблица S2, лист 5). Анализ Gene Ontology 82 трансмембранных белков показывает, что 45 белков обладают трансферазной активностью; 10 белков обладают гидролазной активностью; 5 белков являются SNARE; и 6 белков обладают транспортной активностью ( SI Приложение , таблица S2, лист 5).

Идентификация грузовых белков, которые зависят от конкретного грузового рецептора для упаковки в транспортные везикулы.

Наш анализ образования везикул выявил несколько трансмембранных грузовых рецепторов, которые специфически зависят от гидролиза GTP с помощью Sar1A для их обогащения в везикулы (Fig. 4 D ). Двумя из этих белков являются ERGIC53 и SURF4 (рис. 4 A и H ). Чтобы выявить клиентский репертуар ERGIC53 и SURF4, мы провели анализ образования везикул с использованием донорских мембран, приготовленных из клеток HEKTrex с нокаутом ERGIC53 (KO) или клеток HEKTrex с нокаутом SURF4.Вестерн-блот анализ подтвердил отсутствие ERGIC53 или SURF4 в везикулах, полученных из соответствующих донорских мембран KO (фиг. 6 A и B ). Мы не обнаружили явных изменений в локализации ERGIC53 в клетках KO SURF4 ( SI Приложение , рис. S5 A–C ) или изменений в локализации SURF4 в клетках ERGIC53 KO ( SI Приложение , рис. S5). D – F ). Точно так же клетки KO не показали явных дефектов в морфологии ER, отмеченных HA-Vangl2 ^D255E ( SI Приложение, рис.S5 G–I ) или мембранная ассоциация COPII, отмеченная Sec31A ( SI Приложение, рис. S5 J–L ). Маркер цис -Golgi, GM130, был в основном расположен в околоядерной области в клетках дикого типа (WT) и KO ( SI Приложение , рис. S5 M-O ). GM130 примерно в 10% клеток WT и 30% клеток SURF4 KO или 30% клеток ERGIC53 KO, расположенных в некоторых точечных структурах в дополнение к околоядерной локализации ( SI Приложение , выделено звездочками в SI Приложение , рис.S5 N и O ). В соответствии с предыдущим отчетом (36), мы не обнаружили индукции ответа развернутого белка (UPR) в клетках SURF4 KO и ERGIC53 KO ( SI Приложение , рис. S5 P ).

Рис. 6.

Идентификация грузовых белков, которые зависят от ERGIC53 или SURF4 для упаковки в транспортные везикулы. ( A и B ). Формирование везикул осуществляли с использованием клеток HEK293TRex дикого типа и клеток ERGIC53 KO HEK293TRex ( A ) или клеток SURF4 KO HEK293TRex ( B ).Затем везикулярную фракцию анализировали с помощью иммуноблота. ( C и D ). Анализ образования везикул проводили с использованием клеток HEK293TRex дикого типа и клеток ERGIC53 KO HEK293TRex ( C ) или клеток SURF4 KO HEK293TRex ( D ). Выделенные везикулы в каждой экспериментальной группе ресуспендировали в сурфактанте RapiGest SF. Белки во фракциях везикул расщепляли трипсином и анализировали масс-спектрометрией без метки. Отношение log2 содержания каждого идентифицированного белка в везикулах, приготовленных из клеток ERGIC53 KO или SURF4 KO, к таковому в везикулах, приготовленных из клеток дикого типа, наносили на ось x , а значение -log10 P разность откладывалась по оси y .( E ) Кратность изменения идентифицированного клиента ERGIC53 сравнивали с кратностью изменения содержания этих белков во фракции везикул, приготовленной из клеток WT и клеток SURF4 KO. ( F ) Кратность изменения идентифицированного клиента SURF4 сравнивали с кратностью изменения содержания этих белков во фракции везикул, полученной из клеток WT и клеток ERGIC53 KO. Пунктирная линия указывает кратность изменения 0,75. ( G–O ) Формирование везикул осуществляли с использованием указанных клеток.Затем фракции везикул анализировали с помощью иммуноблота. Данные, представленные в G – O , являются репрезентативными примерами трех биологических повторов. Одиночные звездочки на панелях G – I указывают на неспецифические полосы, распознаваемые антителами против ERGIC53.

Везикулы были получены из донорских мембран KO или WT, инкубированных с цитозолем печени крысы. Затем белки во фракциях везикул анализировали с помощью количественной масс-спектрометрии без метки.Всего было идентифицировано и количественно определено 815 белков, каждый из которых имел два или более уникальных пептида (FDR <0,01) и был успешно количественно определен во всех трех биологических повторах экспериментальных групп ( SI Приложение , Таблица S3, лист 1). В каждом случае несколько белков были значительно снижены во фракции везикул реакции KO по сравнению с WT (область A, рис. 6 C и D и SI Приложение , таблица S3, лист 2). Трансмембранные белки, которые, по прогнозам, демонстрируют локализацию на Гольджи или плазматической мембране, выделены красным, а растворимые секреторные белки выделены зеленым.Дополнительные грузовые белки были значительно снижены во фракции везикул в везикулах KO по сравнению с WT, когда порог был изменен с 0,5 до 0,6 (область A, рис. 6 C и D и SI Приложение , таблица S3, лист 2).

Четырнадцать белков, включая ERGIC53, были недостаточно представлены в состоянии ERGIC53 KO по сравнению с диким типом (кратность изменения <0,6; P <0,05, Приложение SI , таблица S3, лист 2). Пять из них показали значение q <0.05. Удалив ERGIC53, мы определили оставшиеся четыре белка как клиенты ERGIC53 (выделены на рис. 6 C , область A и SI, Приложение , таблица S3, лист 2). Один из этих белков, белок множественной недостаточности фактора свертывания крови 2 (MCFD2), является известным интерактором ERGIC53 (37). Остальные три белка могут быть новыми взаимодействующими с ERGIC53. Среди остальных белков со значением q >0,05 фактор свертывания V (FV) ( q значение = 0,1) является известным грузовым клиентом ERGIC53 ( SI Приложение , таблица S3, лист 2) (3 ).MCFD2 образует комплекс с ERGIC53 для облегчения транспорта факторов свертывания V и VIII (FVIII) из ER в аппарат Гольджи (37, 38). Затем мы исследовали количество четырех клиентов ERGIC53 в везикулах, полученных из клеток SURF4 KO (рис. 6 E ). Три клиента ERGIC53 не были одинаково истощены в состоянии SURF4 KO (Fig. 6 E , над зеленой пунктирной линией), что позволяет предположить, что эти грузовые белки зависят от ERGIC53, но не от SURF4 для эффективной упаковки в везикулы.Более того, ERGIC53 необходим для удержания MCFD2 на раннем пути секреторного транспорта (39). Иммуноблот-анализ подтвердил, что упаковка MCFD2, меченного HA, в везикулы была отменена в клетках ERGIC53 KO (фиг. 6 G , дорожка 2), но не в клетках SURF4 KO (фиг. 6 I , дорожка 2). Экзогенная экспрессия ERGIC53 в клетках ERGIC53 KO восстанавливала упаковку MCFD2 в транспортные везикулы, а добавление Sar1A(H79G) блокировало это спасение (фиг. 6 H , дорожки 2 и 3).

Используя аналогичные критерии, 19 белков были недопредставлены в состоянии SURF4 KO по сравнению с диким типом (кратность изменения <0.6; P < 0,05). Большинство из них (за исключением одного белка) показали значение q <0,05 (приложение SI , таблица S3, лист 2). Удалив SURF4, мы определили оставшиеся 17 белков как клиентов SURF4 (выделены на рис. 6 D , область A и SI, приложение , таблица S3, лист 2). В общей сложности 16 из 17 клиентов SURF4 не пострадали от потери ERGIC53 (рис. 6 F ). Коммерческие антитела против двух лучших хитов, NUCB1 и NUCB2, подтвердили, что эти два белка упакованы в везикулы, а эффективность почкования была снижена с помощью Sar1A(H79G) (рис.6 J и M , сравните дорожки 2 и 3). Эффективность упаковки NUCB1 и NUCB2 была значительно снижена в клетках SURF4 KO (рис. 6 K и N , дорожка 2), тогда как везикулярное высвобождение этих двух грузовых белков не было затронуто в клетках ERGIC53 KO (рис. 6 L). и О , полоса 2). В соответствии с наблюдениями на клетках SURF4 KO, нокдаун SURF4 с помощью siРНК ( SI Приложение , рис. S6 E ) также значительно снижает эффективность упаковки NUCB1 и NUCB2 в транспортные везикулы ( SI Приложение , рис.S6 A и B , сравните дорожки 2 и 6, количественные оценки в SI, Приложение , рис. S6 C и D ). NUCB1 и NUCB2 коиммунопреципитировали с SURF4-HA в присутствии сшивающего линкера ( SI Приложение , рис. S6 F ), что позволяет предположить, что эти грузовые белки взаимодействуют с SURF4. В целом, наши анализы выявили специфические трансмембранные и растворимые грузовые белки, которые зависят от SURF4 или ERGIC53 для упаковки в транспортные везикулы.Эти анализы показывают, что наш метод является надежным подходом для выявления клиентов конкретного трансмембранного грузового рецептора.

Обсуждение

GTP-связывающие белки, включая белки семейства Arf и белки семейства Rab, играют важную роль в опосредовании мембранного рекрутирования цитозольных факторов для регуляции сортировки грузов и образования везикул (14⇓–16). Аффинная хроматография является традиционным подходом к идентификации этих цитозольных факторов. Здесь мы использовали анализ образования пузырьков, чтобы исследовать этот аспект.Преимущество нашего подхода заключается в том, что мембраны сохраняются, и наш анализ показывает, что этот подход может выявить межбелковые взаимодействия, происходящие в липидных бислоях. Благодаря этому подходу мы идентифицировали цитозольные факторы, которые связаны с мембранами везикул GTP-зависимым образом или которые взаимодействуют с GTP-связанным Sar1A на мембранах везикул. Эти цитозольные белки могут функционировать как адаптеры грузов или могут связываться с оболочками пузырьков, чтобы регулировать сортировку грузов.

Было показано, что два из этих цитозольных белков, FAM84B/LRATD2 и PRRC1, регулируют транспорт вновь синтезированного EGFR от ER к аппарату Гольджи.FAM84B/LRATD2 содержит домен LRAT (лецитин: ацилтрансфераза сетчатки). Этот домен присутствует в семействе H-Ras-подобных супрессоров (HRASLS). Экспрессия FAM84B/LRATD2 повышается при прогрессировании рака предстательной железы, а также в доклинических плоскоклеточных опухолях и опухолях пищевода (40, 41). Показано, что FAM84B/LRATD2 способствует онкогенезу предстательной железы (42). Предполагается, что PRRC1 обладает активностью связывания регуляторной субъединицы протеинкиназы А. Наши результаты показывают, что PRRC1 рекрутируется в сайты выхода ER GTP-зависимым образом; связывается с мембранами везикул в присутствии GTP-связанного Sar1A; и подавляет рекрутирование мембраны субъединицы COPII, Sec24C и Sec31A.PRRC1 содержит домен, богатый пролином. Богатая пролином область Sec31 взаимодействует с Sec23 (43⇓-45), указывая на то, что PRRC1 может напрямую взаимодействовать с Sec23 для выполнения своей функции. FAM84B/LRATD2 также содержит домен, богатый пролином, но его функцию еще предстоит изучить.

Мы обнаружили еще несколько белков Arf и Rab, помимо Sar1A, содержание которых было значительно увеличено во фракции везикул, продуцируемой в присутствии GMPPNP. Было бы интересно использовать наш подход для выявления цитозольных эффекторных белков, которые зависят от этих белков, чтобы ассоциироваться с транспортными везикулами.Наш подход также может быть выполнен в присутствии других внешних факторов, связанных с везикулами, которые дополнительно выявляют партнеров по связыванию на мембранах везикул.

В дополнение к цитозольным белкам, связанным с везикулами, наш подход позволяет выявить грузовые белки, обогащение которых зависит от конкретного фактора в транспортных везикулах. В этом исследовании мы обнаружили, что обогащение грузовым белком везикул зависит от гидролиза GTP с помощью Sar1A. Белковый состав везикул, продуцируемых очищенными оболочками COPII, был проанализирован (13), что выявило несколько клиентов COPII, которые зависят от специфических изоформ субъединицы, связывающей груз COPII, Sec24 (13).Высвобождение клиентов COPII, Sec22B и ERGIC53, в везикулы было значительно усилено, когда анализ образования везикул проводили с использованием очищенного COPII, дополненного низкой концентрацией RLC (рис. 1-K). Используя RLC в качестве источника цитозольных белков, мы обнаружили несколько нерезидентных грузовых белков ER, которые не были идентифицированы в предыдущем исследовании. Эти грузовые белки могут зависеть от цитозольных факторов в дополнение к COPII в RLC, чтобы эффективно упаковываться в везикулы COPII.

Используя донорские мембраны из клеток дикого типа или клеток, лишенных специфического грузового рецептора, мы выявили клиентов ERGIC53 и SURF4.Подобный анализ облегчит идентификацию клиентов др. грузовых рецепторов, тем самым предоставив важную информацию о специфичности сортировки белков, а также проявив понимание функциональной роли специфических клеточных факторов. Еще одним применением нашего подхода является анализ белкового состава везикул, полученных из клеток в различных физиологических условиях, таких как голодание. Это может дать важную информацию о том, как везикулы способствуют установлению и поддержанию определенного физиологического состояния.Предостережение нашего анализа заключается в том, что он основан на идентификации грузовых белков, которые активно продуцируются клетками. Другое предостережение нашего анализа заключается в том, что донорские мембраны для производства везикул происходят из проницаемых для дигитонина клеток, так что продуцируемые везикулы происходят из множества разных органелл. Было бы интересно провести этот анализ на клеточных линиях, которые сильно секретируют различные клеточные факторы, для идентификации грузовых белков и использования очищенных мембран ER или Гольджи в качестве донорских мембран для анализа образования пузырьков.

Таким образом, наше исследование демонстрирует, что анализ образования везикул в сочетании с количественным масс-спектрометрическим анализом позволяет идентифицировать цитозольные белки, которые связываются с мембранами везикул для регуляции транспорта везикул и выявления клиентов-грузов определенного клеточного фактора, обеспечивая надежный инструмент выявить секреторный путь.